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PCT U6 Flashcards

(61 cards)

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1
Q

¿Que es la imnuhistoquímica?

A

Método que permite la localización de antígenos específicos en tejidos o células gracias a un recononocimiento antígeno anticuerpo

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2
Q

¿A que se refiere la siguiente definición?

anticuerpos que proceden de un clon individual de células plasmáticas.

A

Anticuerpo monoclonal

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3
Q

Define Anticuerpo policlonal

A

anticuerpos que proceden de diferentes linfocitos B, por lo que reaccionan con distintos epítopos en el mismo
antígeno, con diferente afinidad y especificidad.

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4
Q

¿Que es un epítopo?

A

cada uno de los sitios discretos de una macromolécula reconocidos individualmente por un anticuerpo específico.

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5
Q

¿A que se refiere la siguiente definición?

se marca el anticuerpo primario que va a reaccionar con el antígeno. La técnica es muy rápida pero poco sensible

A

Marcaje directo

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6
Q

Define marcaje indirecto

A

se marca un anticuerpo secundario que se unirá al anticuerpo primario

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7
Q

¿A que se refiere la siguiente definición?

proceso que consiste en una reacción antígeno-anticuerpo que se hace visible mediante el marcaje del anticuerpo con un colorante fluorescente, que se manifiesta tras su exposición a la luz ultravioleta emitida por el microscopio.

A

Inmunoflorescencia

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8
Q

Define cromógeno

A

compuesto químico que se puede convertir mediante una reacción química en un compuesto que puede ser descrito como “color”.

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9
Q

¿Qué es un anticuerpo y cuantas cadenas tiene?

A

También conocidos como inmunoglobulina, son proteínas sintetizadas por células plasmáticas y tienen 2 cadenas ligeras y 2 pesadas

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10
Q

¿Que cadenas determinaran la clase de inmunoglobulina y que tipos hay?

A

Lo detrminan las cadenas pesadas y hay IgA, IgG, IgD, IgE, IgM

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11
Q

Características principales de los anticuerpos policlonales

A

proceden de la activación de distintos clones de linfocitos B. reaccionan con distintos epítopos en el mismo antígeno, con diferente afinidad y especificidad.

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12
Q

Ventajas y desventajas de los anticuerpos policlonales

A

Ventajas: alta sensibilidad, menor susceptibilidad a alteraciones en el tejido

Desventajas: especificidad variable reacciones cruzadas; problemas de reproducibilidad y disponibilidad limitada.

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13
Q

Caracteristicas de los anticuerpos monoclonales

A

proceden de un clon individual de células plasmáticas. Reaccionan con un solo epítopo

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14
Q

Ventajas y desventajas de los anticuerpos monoclonales

A

Ventajas: Mayor especificidad y reproducibilidad

Desventajas: menor sensibilidad mas falsos negativos ademas menor estabilidad que los policlonales

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15
Q
A
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16
Q

cuando un mis anticuerpo reacciona con diferentes antigenos o viceversa,¿Que nombre recibe este fenómeno?

A

Reacción cruzada

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17
Q

¿Que información de interes proporcionan los marcadores celulares que se detectan con la inmunohistoquimica?

A

proporcionan información sobre la biología y el estado de la enfermedad,
además de información sobre el pronóstico de la misma

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18
Q

¿Que dos tipos de marcaje de anticuerpos existen?

A

Directo e indirecto

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19
Q

Explica el marcaje directo

A

Se marca el anticuerpo primario que racciona con el antígeno. Técnica rapido pero poco sensible

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20
Q

Inconvenientes del marcaje directo

A

Se tienen que marcar tantos anticuerpos como antigenos se quieran detectar

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21
Q

¿Como funciona el marcaje indirecto?

A

Se marca un anticuerpo secundario que se unirá al anticuerpo primario

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22
Q

Ventajas e inconvenientes del marcaje indirecto

A

Ventajas: Solo se marca un anticuerpo, versatilidad (un solo Ac secundsrios se une a varios Ac primarios)

Inconvenientes: pequeñas cantidades de antigeno no son detectadas

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23
Q

¿Que es la fluoresceina?

A

Fluorocromo que emite color verde manzana

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24
Q

Nombre del fluorocromo que emite color rojo—anaranjado

A

Rodamina

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25
Ventajas e inconvenintes de la inmunofuorescencia directa:
Ventajas: tiempos de incubación son cortos y los protocolos de tinciónmás sencillos. Inconvenientes: señal menor, mayor coste economico, protocolo menos flexible
26
Ventajas de la inmunofuorescencia indirecta:
Ventajas: mayor sensibilidad que la inmunofluorescencia directa; los anticuerpos secundarios son más baratos; gran variedad de fluorocromos.
27
¿ significa el término photobleaching?
Principal limitación de la inmunofluorescencia, degradación irreversible del fluorocromo excitado debido al oxigeno
28
¿Se puede reducir el photobleaching?
Si, con iluminacióm mas baja dentro del intervalo de excitación del fluorocromo
29
¿Cuándo se añade el cromogeno?
Al final de la reacción antígeno anticuerpo
30
¿Cómo funciona el método inmuenzimático?
Para marcar el Ac se usa una enzima, y se le añade al final un cromógeno. La enzima actúa sobre el Ac y este sobre el cromógeno dando lugar a un precipitado insoluble y coloreado
31
¿ que enzimas son las mas utilizadas en el método inmunoenzimático?
peroxidasa. fosfatasa alcalina.
32
¿Que es el oro coloidal?
marcador de inmunoglobulinas, de forma directa o indirecta
33
¿Como funciona el oro coloidal y como se pueden disminuir sus limitaciones?
Se liga a una proteina que tiene la capacidad de unirse mediante un mecanismo no inmune a Ig. Se disminuyen sus limitaciones utilizando iones de plata para intensificar la coloración (técnica de oro coloidal-plata).
34
¿Como afecta la descalcificación al materialhistologico?
puede alterar la inmunorreactividad e incluso hacer que desaparezca al cabo de unas pocas horas de tratamiento, sobre todo si se utilizan soluciones fuertes que contengan ácido nítrico.
35
¿Como afecta la inclusión al materialhistologico?
En los procesos de deshidratación y aclaraciónpueden interferir en la inmunorreacción El empleo de acetona o de cloroformo mejora la inmunotinción. inclusión en parafina da lugar a una mayor tinción de fondo
36
Paso muy importante dentro de la inclusion antes de hacer una inmunotinción
Desparafinación
37
¿Porque se pierde la antigenicidad?
Por creación de enlaces que enmascaran los antígenos (epítopos) y el Ac no se puede unir
38
¿Que es la recuperación antigénica?
permite desenmascarar los epítopos, que quedan accesibles para el anticuerpo
39
Caracteristicas digestión enzimática
Se usan enzimas proteolíticas que rompen enlaces cruzados y manifiesta los epítopos Inconvenientes: solo se beneficia un numero reducido de Ac y es de estabilización dificil pudiendo destruir el tejido e incrementando la Tinción no específica
40
¿Cua es el método mas utilizado para la recuperación antigénica? ¿Que solucón es mejor usar?
Inducción por calor y la mejor solución es el citrato sódico
41
¿Como se minimizan los falsos positivos al usarse marcadores que son enzimas ya existentes en nuestro tejido?
Inhibiendo su actividad endógena antes de la inmunotinción
42
Explica los métodos mas utilizados para el bloque de la actividad endógena en enzimas
-Incubación en metanol absoluto con peróxido de hidrógeno:bloquea peroxidasa. -Levamisol: bloquea la fosfatasa alcalina, exceptuando la de tipo intestinal, sensible ácido acético, peróxido de hidrógeno o ácido peryódic
43
¿Que engloba la tinción de fondos?
toda tinción inespecífica de una preparación inmunohistoquímica.
44
¿Como se da de forma directa la tinción de fondo?
presencia del antígeno en lugares diferentes al que se quiere detectar, antisueros primarios de anticuerpos frente antígenos distintos al que quiere determinarse, atrapamiento del antígeno o difusión del mismo hacia lugares donde no suele encontrarse.
45
¿Como se da de forma indirecta la tinción de fondo?
unión no inmune de un antisuero a los componentes de los tejidos.
46
¿Cómo se reduce una tinción de fondos?
bloqueando los lugares con afinidad no inmune por las inmunoglobulinas añadiendo suero bloqueante al antisuero primario y añadiendo grandes concentraciones de sal al tampón; mediante digestión enzimática
47
Explica el control negativo
Carece de antígeno de un detrminado Ac (no da positivo). Si da positivo la técnica es mala y puede haber contaminación cruzada o contaminación de reactivo
48
Explica el control positivo
Contiene el antígeno a detectar células o componentes control interno: tejido normal/no patológico, en las que exista el antígeno que se quiere estudiar. Si el resultado es negativo en la preparación a estudiar se deberá a cualquier fallo técnico.
49
¿Que antigeno es responsable de otorgar especificidad a la reacción inmunohistoquímica?
El primario
50
¿Que son las soluciones de Ac policlonales?
Ac con distintas especificidades que se enriquecen los de mayor afinidad y se disminuyen los de menor.
51
¿Que es la dilución óptima? ¿Es siempre la misma?
proporciona la intensidad-especificidad más alta con la mínima tinción de fondo inespecífica. Cambia dependiendo del laboratorio
52
¿Que son las soluciones tamponadas?¿cual es la mas utilizada?
las soluciones tamponadas confieren una mayor estabilidad, PBS mas utilizado
53
¿Que es la peroxidad?
enzima que se utiliza como marcador de anticuerpos.
54
¿Como actúa la peroxidasa?
∙ Con anticuerpos marcados: la enzima se une mediante un enlace covalente al anticuerpo. A su vez puede ser directa o indirecta La técnica de la peroxidasa-antiperoxidasa también puede realizarse para anticuerpos monoclonales. Con anticuerpos no marcados (técnica de la peroxidasa-antiperoxidasa): puede utilizarse para anticuerpos policlonales
55
Ventajas e inconvenientes de la peroxidasa
Ventaja: Elevada sensibilidad. Inconveniente: falsos positivos debido a la preexistencia de peroxidasa
56
¿Que son los amplificadores de señal?
Técnicas que aumentan la intensidad de la técnica inmunohistoquímica
57
Caracteristicas fosfatasa alcalina
Se emplea fosfatasa alcalina-antifosfatasa alcalina. Inconveniete; medio de montaje acuoso Ventaja: no se encuentra en muchos tejidos del organismo
58
Objetivos anatomia patologica
estudio de la patología tumoral se encuentran precisar el tipo de neoplasia y su histogénesis e intentar determinar la localización de la neoplasia primaria en caso de metástasis.
59
Los principales marcadores ultraestructurales son:
∙ Especializaciones de la membrana plasmática. ∙ Modificaciones del citoesqueleto. ∙ Alteraciones del paraplasma. ∙ Presencia de estructuras especiales. ∙ Cambios en los orgánulos.
60
Para que se los marcadores ultraestructurales?
Estan en desuso, solo sirven para:detección amiloide, patología glomerular renal y de forma excepcional ciertos tumores
61
¿Que son los marcadores moleculares?
alteraciones genéticas o epigenéticas específicas de ciertos tumores que pueden ser detectadas por FISH, amplificación o técnicas de análisis masivos

Pct (2 decks)

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