Prática

Question 1

O que avalia o angulo de contacto?

Answer 1

a molhabilidade da superfície para diferentes líquidos

Question 2

Do que depende o angulo de contacto?

Answer 2

do equilíbrio entre a tensão de superfície entre sólido, liquido ou vapor

Question 3

Qual a relação entre as forças coesivas para uma superfície ser hidrofóbica?

Answer 3

forças coesivas entre moléculas de água > forças coesivas entre água e superfície

Question 4

Qual o angulo de contacto para uma superfície hidrofílica?

Answer 4

< 90

Question 5

Do que depende o caráter +/- hidrofóbico de um material?

Answer 5

da quantidade de grupos OH na sua superfície

Question 6

O que é preciso para se poder avaliar o ângulo de contacto de uma superfície?

Answer 6

estar limpa e livre de potenciais agentes;
ser lisa e homogénea;
ser insolúvel no solvente utilizado;

Question 7

Porque é que limpamos as lâminas com etanol 99%?

Answer 7

vão fornecer grupos OH à superfície do material para ele depois reagir com sigmacote;
permitem secagem rápida, porque é muito volátil.

Question 8

O que é a sonicação?

Answer 8

Limpeza com recurso a ultrassons

Question 9

Quais são as características do sigmacote?

Answer 9

solução em heptano que forma um filme microscopicamente fino e covalente sobre o vidro;
é um agente de cilarização (capaz de reparar danos e fissuras);
altera a molhabilidade da superfície (fica hidrofóbico).

Question 10

Se fizéssemos um tratamento térmico nas lâminas após a adição do sigmacote para que é que isto serviria?

Answer 10

Aumentar a durabilidade do tratamento.

Question 11

Quais são as características do PCL? (9)

Answer 11

PCL=policaprolactona;
polímero;
termoplástico;
alto peso molecular;
hidrofóbico;
semi-cristalino;
baixo ponto de fusão;
biodegradável e bio-reabsorvível (lento);
solúvel em solventes orgânicos.

Question 12

Como é que ocorre a degradação do PCL e do PLA?

Answer 12

Hidrólise do grupo éster

Question 13

Quais são as características do PLA?

Answer 13

biodegradável, mas + rápido que o PLA pq tem - carbonos;
hidrofóbico;
semi-cristalino;
baixa resistência térmica.

Question 14

Quais são os métodos de processamento de filmes de PCL e quais as vantagens/desvantagens de usar cada um deles? (2)

Answer 14

melt blending:
-vantagens: não há resíduos de solvente;
-desvantagens: gasta + energia e é + complexo
solvent casting:
-vantagens: conseguimos criar poros;
-desvantagens: resíduos do solvente

Question 15

Que métodos se podem usar para verificar se há resíduos de solvente no método de solvent casting?

Answer 15

FTIR e ressonancia magnética nuclear

Question 16

Que solvente e que usamos para a produção de filmes de PCL?

Answer 16

diclorometano

Question 17

Quais são as vantagens da produção de scaffolds?

Answer 17

conseguimos controlar o tamanho dos poros, orientação das fibras e posicionamento;
obtemos uma rede homogénea.

Question 18

Qual é a temperatura ideal a que a resistência da máquina de fazer os scaffolds tem que ter?

Answer 18

> que o melting point;
< que a temperatura de degradação.

Question 19

Porque é que é importante controlar a temperatura da plataforma da máquina dos scaffolds?

Answer 19

Permite uma maior adesão das camadas, o que impede desalinhamento.

Question 20

Qual é a influencia do tamanho dos poros do scaffold no desenvolvimento das células?

Answer 20

Muito grande: células ficam muito isoladas por isso é mais difícil produzir matriz;
Muito pequeno: células não conseguem entrar no poro.

Question 21

Que técnicas existem para modificar a superfície do PCL e PLA? (5)

Answer 21

protein coating;
plasma treatment;
photo-induced grafting;
chemical etching;
hidrolise de superfície.

Question 22

No que é que consiste a hidrolise da superfície do PCL?

Answer 22

implementar novos grupos funcionais na superfície, alterando a química da superfície e assim modificando as interações com água, proteínas e células;
alteração da hidrofobicidade e molhabilidade da superfície;
aumenta a rugosidade e porosidade da superfície.

Question 23

Que parâmetros afetam a reação de hidrolise da superfície do PCL?

Answer 23

[NaOH];
tempo;
temperatura.

Question 24

Que parâmetros do PCL afetam a sua hidrólise?

Answer 24

porosidade;
área de contacto;
espessura

Question 25

Quais são as vantagens e desvantagens da hidrolise do PCL?

Answer 25

V: podemos regular a taxa de hidrolise regulando a [NaOH]; D: possibilidade de perder a integridade do polímero

Question 26

Que parâmetros do PCL são alterados com a sua hidrolise?

Answer 26

Propriedades mecânicas e químicas; topografia; morfologia.

Question 27

Qual é a primeira coisa que acontece quando adicionamos NaOH ao PCL?

Answer 27

delaminação da superfície

Question 28

Porque é que utilizamos PBS na lavagem do PLA?

Answer 28

Porque o PBS é um tampão que não vai interagir com possíveis resíduos do NaOH e vai manter o pH constante de 7.

Question 29

Porque é que incubamos o PLA em vácuo?

Answer 29

Para limpar os poros

Question 30

No que consiste uma cultura celular?

Answer 30

Remoção de células de um animal ou planta, seguida por crescimento num meio artificial favorável.

Question 31

Que tipos de culturas celulares existem?

Answer 31

Cultura primária: células são retiradas diretamente do tecido e cultivadas até ocuparem todo o substrato Linha celular: deriva da cultura primária; há linhas finitas e contínuas

Question 32

Que células é que crescem em suspensão e que células crescem aderidas ao substrato?

Answer 32

aderidas: fibroblastos e células epiteliais; suspensão: linfoblastos

Question 33

Que equipamentos são necessários para fazer uma cultura celular? (6)

Answer 33

câmara de fluxo laminar (condições asséticas); incubadora (condições ambientais); banho de água; centrifugadora; congelador; microscópio invertido.

Question 34

Que condições do ambiente de cultura se podem variar?

Answer 34

Fisioquímicas: temperatura, pH, pressão osmótica, tensão de O2 e CO2 Fisiológicas: concentração de hormonas e nutrientes.

Question 35

O que é que o meio de cultura fornece às células?

Answer 35

Nutrientes, fatores de crescimento e hormonas e regula o pH e a pressão osmótica.

Question 36

Quais são as características do meio de cultura usado na cultura celular?

Answer 36

FBS: soro bovino fetal; inibe a tripsina e fornece fatores de crescimento e adesão, hormonas, lípidos e minerais.

Question 37

O que é que a variação do pH de uma cultura celular significa?

Answer 37

-contaminação (muda cor e turvidez); -necessidade de trocar o meio de cultura; -diminuição do CO2, tem que ir à incubadora.

Question 38

Que contaminantes podem existir numa cultura celular?

Answer 38

Químicos: impurezas (endotoxinas), plastificantes e detergentes; Biológicos: bactérias, leveduras, vírus, microplasmas, contaminação cruzada.

Question 39

O que faz a tripsina?

Answer 39

enzima digestiva que cliva as proteínas que medeiam a adesão celular, ou seja, liberta as células da superfície de cultura.

Question 40

Que corante se usa para corar as células mortas para a contagem de células?

Answer 40

Trypan blue

Question 41

Do que depende a adsorção de proteínas?

Answer 41

-hidrofobicidade da superfície; -topografia e rugosidade de superfície; -impedimento estérico; -carga da superfície e da molécula.

Question 42

Como é que a adsorção de proteínas pode ser modelada?

Answer 42

-tratamento da superfície; -modificação do polímero; -coating com moléculas bioativas.

Question 43

O que é que se faz depois da tripsinização e contagem das células e contas?

Answer 43

splitting (centrifugação) e seeding das células

Question 44

O que é que é preciso avaliar para avaliarmos a resposta biológica das culturas celulares?

Answer 44

-morfologia celular; -atividade metabólica.

Question 45

Como é que avaliamos a morfologia celular?

Answer 45

SEM

Question 46

Que técnicas existem para avaliar a atividade metabólica? (4)

Answer 46

-MTT tetrazolium colorimentric assay; -MTS assay; -WST-1 assay; -resazurin assay.

Question 47

Como é que funciona a resazurina?

Answer 47

penetra células emtablicamente ativas na forma oxidada (azul e sem fluorescência) e é reduzida (rosa e com fluorescência) pela cadeia respiratória.

Question 48

Como é que é feita a preparação das amostras para o SEM?

Answer 48

1. Lavar com PBS; 2. Lavar com formaldeído (fixar); 3. Desidratação progressiva .

Question 49

Como funciona o SEM?

Answer 49

Um feixe de eletrões incide na superfície da amostra e varre essa superfície, então são emitidas radiações que são detetadas por um detetor que retira a informação através de um espetro ou imagem.

Question 50

Como é que é obtida a melhor resolução possível no SEM?

Answer 50

O feixe de eletrões vai atravessar diafragmas e espelhos até conseguir alcançar o menor diâmetro possível, e isso vai fazer obter a maior resolução.

Question 51

Quais são os modos que existem no SEM? Quais as características?

Answer 51

1. Alto vácuo (usado): -amostras condutoras e secas (se não forem reveste-se com ouro paládio por pulverização iónica); -tem boa resolução porque é feito a baixa pressão e o feixe de eletrões tem o menor número de interações possível; -a temperaturas <0. 2. Baixo vácuo: -amostras secas e não condutoras; -leva ao encontro dos eletrões com moléculas de ar, por isso há maior dispersão dos eletrões, maior diâmetro e pior resolução. 3. Modo ambiental: -amostras hidratadas

Question 52

Que tipos de eletrões/fotões saem das amostras no SEM?

Answer 52

1. eletrões secundários (imagem): -baixa energia e detetam só a superfície (boa informação de topografia e morfologia); -zonas claras = + relevo; -zonas escuras = + plano; 2. eletrões retrofundidos (imagem): -eletrões com + energia; -permite ver + profundidade; -zonas claras = maior numero atómico; -zonas escuras = menor número atómico. 3. fotões de raio X (espetro): -permite saber a composição elementar da amostra.

Question 53

O que é que seria de esperar na análise do angulo de contacto nos filmes de PCL?

Answer 53

À medida que aumentava o tempo de tratamento deveria diminuir o ângulo de contacto porque a superfície ficava mais hidrofílica.