Questions de laboratoire Flashcards
En microbiologie, quelle est l’importance du travail en milieu stérile?
Un environnement stérile empêche que les microorganismes environnants (air, instruments,
surfaces…) viennent se déposer dans les milieux de culture utilisés et ainsi fausser les résultats
des manipulations
Quelle est l’utilité de l’ensemencement par épuisement?
Il permet d’isoler sur une gélose des bactéries faisant parties d’un mélange ou d’un échantillon.
Ainsi, nous pouvons avoir la gélose des colonies séparées typiques de chaque espèce composant
le mélange. Il est ensuite possible de prélever chacune de ces colonies et les ensemencer
séparément dans des bouillons afin d’avoir des cultures pure de chacune des espèces.
Pourquoi la plupart des incubations s’effectuent à 37oC plutôt qu’à température pièce?
La plupart des bactéries que nous utilisons dans ce cours sont des bactéries qui vivent dans et sur
notre corps, leur température optimale de croissance est donc 37oC. Elles peuvent se développer
à température pièce, mais leur croissance se fera plus lentement.
Quel est le rôle d’une gélose sang?
Cette gélose permet de voir le potentiel hémolytique (à faire de l’hémolyse) de certaines souches
bactériennes. Plus la lyse des globules rouges présents dans la gélose est complète, plus le
potentiel pathogène de la souche est grand
Quels sont les trois types d’hémolyse et comment peut-on les distinguer?
Hémolyse alpha : hémolyse partielle – présence d’un halo vert autour des bactéries
Hémolyse bêta : hémolyse complète – présence d’un halo transparent autour des bactéries
Hémolyse gamma : absence d’hémolyse – la gélose conserve sa couleur rouge autour des
bactéries
Pourquoi utilise-t-on souvent des milieux de culture TSA?
Hydrolysat enzymatique de caséine (15 g/L)
Peptone de soja (5 g/L)
Chlorure de sodium (5 g/L)
Poudre d’Agar (12 g/L)
Cette composition permet la croissance de la plupart des microorganismes.
Énoncez chaque étapes de la coloration de GRAM
a) Fixation des bactéries
b) Coloration du frottis au cristal violet
c) Fixation du cristal violet à l’aide du lugol (solution d’iode)
d) Décoloration à l’alcool
e) Contre-coloration à la safranine
f) Rinçage
Détaillez l’utilité de la fixation des bactéries.
Entraine la mort et l’adhérence des bactéries à la lame (aucune couleur).
Détaillez l’utilité de la coloration du frottis au cristal violet
Permet la coloration indifférenciée de toutes les
bactéries (coloration de leur paroi et cytoplasme). Toutes les bactéries sont violettes.
Détaillez l’utilité de la fixation du cristal violet à l’aide du lugol (solution d’iode)
Permet une meilleure adhérence du cristal violet à la bactérie. Toutes les bactéries restent violettes.
Détaillez l’utilité de la décoloration à l’alcool
Permet la décoloration des bactéries Gram- seulement (l’alcool pénètre plus facilement la mince couche de peptidoglycane de la paroi des Gram-). Les bactéries Gram+ restent violettes et les bactéries Gram- sont décolorées (transparentes).
Détaillez l’utilité de la contre-coloration à la safranine
Permet une coloration différentielle des bactéries Gram+ et Gram-. En fait, toutes les bactéries se colorent en rose (la safranine colore leur cytoplasme et paroi) mais les bactéries Gram+ étant déjà colorée en violet, la coloration rose ne parait pas. Ainsi les bactéries Gram+ paraissent violettes et les Gram – paraissent roses.
Détaillez l’utilité du rinçage
Permet de retirer l’excédent de colorant sur la lame et de mieux percevoir la coloration différentielle.
Selon vos observations, classifiez les souches utilisées dans les catégories Gram – et Gram +. Expliquez vos résultats en fonction de la technique détaillée à la question 2 et de la théorie sur la paroi des bactéries.
Escherichia coli (un cocobacille, donc un bacille) parait rose, elle est donc Gram-. La couche de peptidoglycane plus mince de la paroi de E. coli a permis sa décoloration à l’alcool et sa contre-coloration à la safranine.
Enterococcus feacalis (streptococcus) paraît mauve, elle est donc Gram +. Sa grande quantité de paroi a conservé le colorant cristal-violet, et la décoloration à l’alcool n’a pas permis de retirer le colorant. Le colorant ayant donc resté dans la paroi, la contre-coloration n’a eu aucun effet sur cette bactérie et elle est demeurée mauve.… Si on avait fait la coloration gram, la bactérie suivante aurait aussi été Gram +, donc
mauves :Bacillus subtilis (bacille)
