Séance 1

Question 1

Pourquoi choisir la souris dans un laboratoire?

Answer 1

Peu coûteux, facile d’hébergement, facile à manipuler.

Question 2

Quels sont les dangers de manipuler des souris?

Answer 2

Risques de faire des réactions allergènes par leur salive/poil, rhino-conjonctivite, urticaire et asthme

Question 3

Le choix de l’animal est dicté par ces quelques facteurs :

Answer 3

a. Le volume d’antisérum requis (lapin, chevaux, moutons, chèvres, bovins, poulets, souris, rats, hamsters);

b. La relation phylogénétique entre l’espèce choisie et la protéine qui sert d’immunogène;

c. La fonction effectrice des anticorps produits (capacité à lier le complément, etc.);

d. L’utilisation prévue des anticorps produits (besoin d’un anticorps secondaire spécifique à une espèce).

Question 4

Pourquoi on favorise les lignées inbred?

Answer 4

pour avoir une population homogène et avoir des résultats communs similaires

Question 5

Quelle est la quantité injectée chez la souris?

Answer 5

Entre 0,5 et 100 ug

Question 6

Quelle sont les deux voies d’injection pour l’immunisation de la souris?

Answer 6

Intra-péritonéale et ensuite intraveineuse pour la dose de rappel

Question 7

Est ce que les anticorps obtenus sont monoclonaux ou polyclonaux?

Answer 7

Polyclonaux

Question 8

Quel adjuvant a été utilisé dans l’immunisation primaire des souris?

Answer 8

Quil-A, vient d’un arbre, efficace avec les protéines membranaires

Question 8

Quelles protéines sont utilisées pour l’immunisation?

Answer 8

A et O

Question 9

Où sont retrouvées les différentes classes des cellules immunitaires?

Answer 9

Les organes lymphoïdes secondaires

Question 10

Qu’est ce que le ACK (ammonium-chloride-potassium) et à quoi sert-il?

Answer 10

C’est un red lysis buffer qui attaque les érythrocytes sans affecter les globules blancs

Question 11

Où doit on utiliser le red lysis buffer?

Answer 11

La rate, le sang et la moelle osseuse

Question 12

Que permet l’ajout de PBS et serum?

Answer 12

Aux cellules de mieux survivre

Question 13

Comment peut-on différencier les lymphocytes de la rate?

Answer 13

Grâce aux glycoprotéines portées à leur surface

Question 14

Comment les différents lymphocytes seront différenciés lors de la cytométrie en flux?

Answer 14

Avec des anticorps avec fluorochromes spécifiques aux glycoprotéines

Question 15

Que veulent dire les paramètre FSC et SSC en cytométrie?

Answer 15

FSC : taille
SSC : Granularité

Question 16

Qu’est ce que le bruit de fond?

Answer 16

Les cellules auto-fluorochromes, qui n’ont pas reçu de fluorochromes. Permet de mieux isoler les cellules avec fluorochromes en enlevant ce bruit de fond

Question 17

Que sont les fluorochromes utilisés?

Answer 17

FITC (520nm) et PE (576nm) (excités par laser argon 488nm)

Question 18

Qu’est ce que du déversement de fluorescence?

Answer 18

Quand un filtre capte des photons provenant d’un autre fluorochrome que celui assigné

Question 19

Qu’est ce qu’un contrôle de compensation?

Answer 19

Quand on effectue des spectres individuels pour chaque fluorochrome afin de mieux mesurer le déversement de fluorescence

Question 20

Est ce que je dois toujours faire des contrôles de compensation?

Answer 20

Oui, sinon l’analyse est impossible car on ne peut pas situer le déversement de fluorescence

Question 21

Comment de cellules sont nécessaires pour avoir un bon résultat lors de l’analyse?

Answer 21

10^4

Question 22

Que doit être la concentration d’un échantillon pour donner de bon résultats?

Answer 22

2x10^5 à 2x10^7 cellules/ml

Question 23

Avec quel instrument faisons-nous le comptage cellulaire?

Answer 23

Hématimètre

Question 24

Quelles cellules doit on compter dans les carrés?

Answer 24

Celles qui sont non colorées et qui touchent les parois gauches et supérieures uniquement, compter les 4 carrés et faire la moyenne

Question 25

Avec quoi sont colorées les cellules mortes lors du comptage

Answer 25

Bleu de trypan

Question 26

Avec quoi sont anesthésiées les souris?

Answer 26

Kétamine et xylazine

Question 27

Que font les ganglions dans le PBS1%SVF?

Answer 27

Ils coulent et les graisses flottent

Question 28

Quelle est la formule pour le comptage cellulaire?

Answer 28

Moyenne/carré x dilution dans bleu de trypan x 10 000

Question 29

Si j'ai 2,5 millions cellules/ml que dois-je faire pour être en mesure de faire de la cytométrie?

Answer 29

Prendre 4 ml, centrifuger, enlever 3 ml pour obtenir 10 000 000 cellules/ml

Question 30

Pourquoi on ne mettait pas le même cocktail dans les tubes?

Answer 30

Parce que ce ne sont pas les mêmes anticorps avec les mêmes fluorochromes. On ne veut pas toujours marquer le même type cellulaire

Question 31

Pourquoi les tubes 1 4 et 6 n'avaient pas d'anticorps?

Answer 31

Parce qu'il sont utiles pour faire les contrôles de compensation