Tecnicas Moleculares Flashcards
(35 cards)
ETAPAS DEL DIAGNÓSTICO MOLECULAR
*TOMA DE MUESTRA
*PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
*APLICACION DE UNA TÉCNICA MOLECULAR DE DIAGNÓSTICO
¿Que es la bioseguridad?
Serie de acciones que llevan a la disminución del riesgo de contaminación con elementos biológicos: sangre, fluidos corporales y materiales contaminados
Cual es la regla de manejo de residuos biológicos peligrosos?
NOM-087-ECOL-SSA1-2002
TOMA Y PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
*Utilizar la indumentaria de bioseguridad.
*Utilizar guantes desechables libres de talco.
*Material de plástico desechable, excento de nucleasas.
*Campanas de bioseguridad espáciales/UV para
Clasificación de laboratorios: BSL-1
Agentes no asociadas con enfermedades en humanos, adultos saludables, ni animales.
Clasificación de laboratorios: BSL-2
Agentes asociados con enfermedades humanas, raramente serias, hay medidas preventivas terapéuticas.
Clasificación de Laboratorios: BSL-3 Y BSL-4
BSL-3: agentes asociados con enfermedades humanas serias, pero con tratamiento.
BSL-4: agentes causantes de enfermedades humanas serias o letales
TIPOS DE MUESTRAS DE LAS QUE PODEMOS OBTENER MATERIAL GENÉTICO ( Tejidos)
SANGRE, HECES, ORINA, LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO, BIOPSIAS, SEMEN, CÉLULAS EN CULTIVO(PBMCs), TEJIDOS EMBEBIDOS EN PARAFINA
TIPOS DE MUESTRAS DE LAS QUE PODEMOS OBTENER MATERIAL GENÉTICO( MUESTRAS FORENSES)
PELO, UÑAS, CÉLULAS EPITELIALES, COLILLAS DE CIGARROS, HUESOS, DIENTES, MOMIAS
POR QUE SE DEBE DE EVITAR EL USO DE HEPARINA?
Por que la heparina inhibe el PCR.
Qué tipo de muestra se utiliza para la extracción de DNA?
PCR(gDNA)
Qué tipo de muestras se utiliza para la extracción de RNA?
RT-PCR(mRNA)
Cómo se realiza la extracción de los ácidos nucleicos?
- Lysis Celular
- Purificación
- Lavados
- Elución
Condiciones para almacenamiento de muestras de DNA y RNA
Congeladores a -20 C
Ultracongeladores a -70 C:
DNA: puede durar años
RNA: hasta 6 meses.
cDNA: años
Qué sucede en la lysis celular?
Se van a romper las membranas de la célula, lo que quiere decir que se van a exponer los ácidos nucleicos y vamos a tener inhibidores tanto de DNAsas y de RNAsas
En qué consiste el proceso de purificación en la extracción de ácidos nucleicos?
El DNA se va a unir de manera selectiva la columna utilizando las cargas negativas que tiene el DNA (que es negativo) y por atracción se va a pegar tanto ADN como ARN y todo aquello que no tiene esa carga negativa (ejemplo proteínas), todo eso va a pasar a través del filtro y se va a eliminar.
En qué consiste el proceso de elución, en la excepción de ácidos nucleicos.
Es la recuperación del ácido nucleico, cambiando el pH para cambiar la atracción que tiene el DNA con las columnas de Silice, para que ya no tengan esa atracción y puedan pasar a través de la columna.
En que consiste la técnica de hibridaxion fluorecente in situ (fish)
- Sondas marcadas: Se diseñan pequeñas cadenas de ADN o ARN (sondas) que son complementarias a la secuencia que se quiere estudiar. Estas sondas están marcadas con un tinte fluorescente.
- Hibridación: Las sondas se introducen en las células o tejidos, donde se unen específicamente a su secuencia objetivo mediante apareamiento de bases.
- Detección: Bajo un microscopio de fluorescencia, las sondas emiten luz, lo que permite visualizar la ubicación de la secuencia en las células o cromosomas.
En qué consiste la prueba inmunohistoquímica?
Su funcionamiento básico es el siguiente:
1. Anticuerpos específicos: Se utilizan anticuerpos diseñados para unirse específicamente a la proteína de interés en la muestra.
2. Marcaje: Estos anticuerpos están vinculados a una sustancia detectable, como un colorante o una enzima que genera un producto visible.
3. Detección: Al aplicar un reactivo (como un sustrato), la sustancia ligada al anticuerpo produce un cambio visible (coloración) que revela la ubicación de la proteína en la muestra bajo un microscopio.
En qué consiste la técnica de microarreglos en la hibridación?
. Diseño del microarreglo: Una superficie (como un vidrio o chip) contiene miles de sondas de ADN específicas para diferentes genes, dispuestas en una matriz ordenada.
2. Preparación de la muestra: Se extrae ARN de la muestra biológica, se convierte en ADN complementario (ADNc) y se marca con un tinte fluorescente.
3. Hibridación: El ADNc marcado se aplica al microarreglo y se une (hibrida) a las sondas complementarias presentes en el chip.
4. Detección: Un escáner láser detecta la fluorescencia en cada punto de la matriz, indicando qué genes están expresados y en qué cantidad.
En qué consiste la técnica de obligación de southern Blot?
- Digestión del ADN: El ADN de la muestra se corta en fragmentos más pequeños utilizando enzimas de restricción.
- Separación por electroforesis: Los fragmentos se separan según su tamaño en un gel de agarosa mediante una corriente eléctrica.
- Transferencia a una membrana: Los fragmentos de ADN del gel se transfieren a una membrana de nailon o nitrocelulosa, donde quedan inmovilizados.
- Hibridación: Se introduce una sonda marcada (ADN o ARN complementario) que se une específicamente a la secuencia de interés en la membrana.
- Detección: La sonda, marcada con radiactividad o fluorescencia, permite identificar y visualizar el fragmento que contiene la secuencia deseada.
Que es un polimorfismo?
Se considera un polimorfismo genético cuando la secuencia de nucleótidos del DNA en un locus específico es variable entre los organismos de una población menos del 1%
Diferencia entre una mutación y un polimorfismo
El polimorfismo no se presenta al azar, si no una respuesta a estímulos de adaptación
Define polimorfismo de un solo nucleótido (SNP)
- variaciones en un solo nucleótido o par de bases
- deleción, inserción sustitución de una base nitrogenada.
- muy frecuente, uno de cada 100 a 300 pares de bases en secuencias codificantes de proteínas
