Tema 5.1. FIV. Desarrollo embrionario temprano. Flashcards
(61 cards)
2 métodos para la
Obtención de ovocitos en mamíferos
y cual tiene un rendimiento medio mayor
- OPU en animales vivos (menos ovocitos pero más maduros)
- Postmortem (más ovocitos pero en diferentes estados de maduración)
El rendimiento medio será mayor en postmortem
Diferentes técnicas para
Ovum Pick Up
(2-3)
- Laparoscopia/laparotomía abdominal con anestesia general
- Punción transvaginal ecográfica con anestesia local
Inconveneintes de
Ovum Pick Up
(3)
- Invasiva
- Laboriosa
- Se pueden formar adherencias en el sitio de punción
Factores que afectan al éxito de
Ovum Pick Up
(2)
- Presión de aspiración
- Diámetro de la aguja
3 pasos de la
Recogida postmortem
de ovocitos en mamíferos
- Transporte a 25-30 ºC en suero fisiológico
- Aspirar con jeringa o con aguja conectada a una bomba de vacío
- Cortar (slicing) ovarios en una placa con medio de recogida
Según el momento y el lugar de recogida encontraremos diferentes
Estados de maduración del ovocito
en cuanto a su dotación y estado cromosómico
- 4n: arresto meiótico, en el folículo (para reproducción asistida)
- 2n: MADURO, metafase 2, aparece el primer corpúsculo polar (huso meiótico y cromosomas lo más compatcos posible)
- n: tras fecundación
No podré fecundar ovocito sin células del cúmulus
Qué ocurre durante la
Maduración nuclear y citoplasmática
del ovocito
- Maduración nuclear: reanudación meiosis (Profase I → Metafase II)
- Maduración citoplasmática: redistribución orgánulos, migración orgánulos corticales (bloqueo periplasma)
Diferentes métodos de
Evaluación del ovocito
3 con lupa, 4 con otras técnicas
LUPA
* 1er corpúsculo polar
* Aspecto
* Células del cúmulus
OTRAS TÉCNICAS
* Integridad de la membrana
* Mitocondrias
* Huso meiótico
* Expresión génica
El 1er corpúsculo polar (CP1) se evalúa con lupa, y es un
Marcador de maduración meiótica y competencia ovocitaria
Que esté degenerado indica
- Envejecimiento del ovocito
- Bajas tasas de fertilización
Con la lupa podemos comprobar la calidad del ovocito según
La distancia entre el CP1 y el huso meiótico.
A mayor distancia
Más envejecido está el ovocito
Qué 3 características del
Aspecto del ovocito
buscamos bajo la lupa
- Citoplasma regular (esférico) y homogéneo
- Gran tamaño
- Zona pelúcida espesa
Color normal del citoplasma difiere entre especies (🐎 > oscuro que 🐑)
Con la lupa, la buena calidad ovocitaria se observa si las
Células del cúmulus
han sufrido qué proceso tras la maduración in vitro
Expansión
Indicada por la acumulación de ácido hialurónico
Células del cúmulus: imprescindibles para la correcta maduración del citoplasma
Qué fluoróforos empleamos para medir la
Integridad de la membrana ovocitaria
fijándonos en la viabilidad y la apoptosis
- 🔴IP: membrana dañada, inviable
- 🟢Anexina-V: apoptosis
Qué fluoróforo empleamos para medir el
Potencial mitocondrial
de los ovocitos o de las células del cúmulus
🔴JC-1: potencial y distribución mitocondrial
Mayor intensidad roja = mayor potencial mitocondrial
Qué tinción empleamos para observar los
Cromosomas
y en qué fase esperamos que se encuentren
🔵 Tinción de Hoeschst
Buscamos que esté en Metafase II (no en vesícula germinal) y compactado
Definición de
Huso meiótico
Estructura del citoesqueleto que interviene en la distribución de los cromosomas
Clave para un correcto desarrollo embrionario
Qué método emplearemos para medir la
Expresión génica
Real Time qRT-PCR
PCR cuantitativa retrotranscriptasa en tiempo real
Analizamos la
expresión de mRNA
de genes relacionados con (5)
- Estrés oxidativo
- Apoptosis
- Actividad mitocondrial
- Reconocimiento maternal, metabolismo e imprinting
- Factores de crecimiento asociados a la maduración ovocitaria
Teniendo la misma genética excelente,
¿qué sexo es más rentabilizable
y porqué?
Macho
porque la hembra se ve afectada por su fisiología
- Duración de la gestación (no se puede quedar embarazada cuando ya lo está)
- 1-2 ovocitos/ciclo
De forma natural, una vaca puede tener
10 terneros en toda su vida
con qué técnicas se puede ampliar este número
- MOET: 30
- OPU o IVP: 70
Uso de diferente macho por cada lote de ovocitos (consanguinidad?)
Ventajas de la
Producción de embriones in vitro
(3)
- ↑ producción de embriones viables de hembras donantes élite
- Fertilizar ovocitos de hembras prepúberes (↓ intervalo generacional → acelera progreso genético)
- Recuperar animales infértiles de alto valor genético
Actualmente, la mayor parte de las
Transferencias de embriones
¿se realizan con embriones obtenidos in vivo o in vitro?
In vitro
Componentes de los
Medios para producir embriones in vitro
(7)
- Iones inorgánicos: funciones catalíticas y fisiológicas
- Fuentes de energía: lactato, piruvato y glucosa
- Aminoácidos: síntesis proteica, regulación del desarrollo embrionario
- Vitaminas: metabolismo de los hidratos de carbono y los aminoácidos
- Fuentes proteicas adicionales: FBS (Fetal Bovine Serum), BSA (Bovine Serum Albumina)
- Hormonas: LH, FSH y 17B estradiol
- Antibióticos
Fases de la
Fecundación in vitro
(4)
- Obtención, selección y maduración de ovocitos
- Preparación esperma
- Fecundación in vitro
- Desarrollo de embriones in vitro
