Tercer parcial Flashcards
Manejo, extracción, (30 cards)
Características de una muestra bioquímica
- sensible
- costosa
- específica
¿Qué se analiza en una muestra bioquímica?
Proteínas y metabolitos - se usa material reciclado
Características de una muestra molecular
- sensible
- cara
- específica
¿Qué se analiza en una prueba molecular?
DNA y RNA - Se usa material nuevo
Falsos positivos
Contaminación cruzada
Falsos negativos
Cuando se degrada la muestra debido a un mal manejo
Enzimas que degradan ácidos nucleicos
RNAasa
DNAasas (endonucleasas y exonucleasas)
¿Qué muesta se usa para el diagnóstico de enf. genéticas?
Sangre - leucocitos
¿Qué muesta se usa para el diagnóstico de enf. adquiridas?
Tuberculosis: (esputo) DNA - bacteria
Hepatitis B: (sangre) DNA
Hepatitis C: (plasma) RNA- virus
VIH: RNA
Hongo: DNA
¿Qué muesta se usa para el diagnóstico de enf. crónico-degenerativas?
Se analiza el DNA, RNA y proteínas
Pasos para la extracción de ac. nucleicos
- Lisis
- Separación
- Separación
- Lavado
- Disolución
- Lectura
Lisis
- Romper las membranas con detergente
- Proteinasa
- Buffer con ph 8 (DNA) o 5 (RNA) para q el DNA quede disuelto
Separación
Fenol y Cloroformo para cuando se centrifuge
- Acuosa (DNA)
- Proteínas y RNA
- Fenólica (restos de membrana)
Precipitación
Con alcohol -etanol concentrado-
Se centrifuga
Lavado
Con Et-OH al 70% (eliminar impurezas)
Disolución
Disolver en agua destilada
Lectura
260 nm: Concentración de DNA
280 nm: Proteínas
Fórmula de concentración de DNA
Absorbancia x 50
Fórmula de concentración de RNA
Absorbancia x 40
Diferencias para la extracción de RNA
Buffer ph 5
No se necesitan proteínasas
Inhibidor de RNAasas
Fórmula para calidad de DNA
Abs. 260 / Abs. 280 = 1.8-2
¿Dónde se encuentran las endonucleasas (enzimas de restricción)?
Bacterias
Enzimas de restricción más utilizadas
Tipo II
Nomenclatura de las enzimas de restricción
Género: E
Especie: co
Cepa: R
N° de enzima aisalda de esa cepa: I (en números romanos)
