Viral Vectors Flashcards
(52 cards)
Que tipo de vírus são usados em Terapia Gênica?
Vírus recombinante, nunca wild-type.
Ao utilizar vetores virais na Terapia, o que pretendemos manter e retirar?
Remover elementos que causam patogenicidade ao ser humano;
Manter características de infecciosidade e capacidade de infetar rapidamente um grande número de células;
Garantir a expressão direcionada do gene terapêutico.
Quais são as características ideais de um vetor viral?
Perfil seguro;
Produção fácil;
Boa estabilidade nas células-alvo;
Alta capacidade transgênica.
Como é que se pode tornar os vetores virais mais seguros, sem comprometer a sua eficácia?
Evitar a replicação;
Promover a inativação;
Atenuar a toxicidade natural.
Que critérios são utilizados para classificar vírus?
Tipo de material genético (DNA/RNA);
Simetria do capsídeo;
Presença de envelope;
Tamanho (capacidade de carga);
Local de replicação (núcleo ou citoplasma).
Caracterize os lentivírus de acordo com os critérios de classificação de vírus.
Material genético: RNA (retrovírus);
Contêm proteínas como transcriptase reversa, integrase e protease;
Ligando: glicoproteína gp120;
Capsídeo proteico;
Replicação: ocorre em células mitóticas e não mitóticas.
Quais proteínas formam o capsídeo, nucleosídeo e matriz dos lentivírus (HIV-1)?
Capsídeo: p24;
Nucleosídeo: p7;
Matriz: p17.
Nos lentivírus, ou HIV-1, por que existem 2 moléculas de RNA de cadeia simples idênticas?
Apenas 1 é utilizada.
A outra contribui para estrutura funcional e regulação durante a transcrição.
Qual a constituição/estrutura genômica de um lentivírus (HIV-1)?
LTR em cada extremidade (zonas reguladoras: U3, R, U5).
Sequências codificadoras principais:
✳ Gag (estrutura), Pol (replicação), Env (glicoproteínas de envelope).
Elementos reguladores essenciais:
✳ Regulatórios: Tat, Rev;
✳ Acessórios: Nef, Vif, Vpr, Vpu.
Por que os lentivírus são mais seguros que os retrovírus gamma para integrar genes?
Lentivírus integram em regiões intrônicas ou intergênicas.
Retrovírus gamma integram em promotores ou zonas reguladoras, aumentando risco de mutagênese.
Descreva o ciclo replicativo do HIV-1.
Ligação a receptores (CD4).
Fusão do envelope com a membrana.
Uncoating no citoplasma, liberando transcriptase reversa, integrase e protease.
Transcrição reversa (RNA → DNA).
Integração no núcleo via integrase.
Transcrição do mRNA viral, produção de proteínas virais.
Maturação e liberação do vírus após modificações pós-tradução.
O que envolve a 3ª geração de produção de vetores lentivirais?
Aumentar segurança removendo elementos regulatórios;
Introduzir vetores SIN.
Em que consiste o pseudotyping (pseudotipagem)?
Alterar o tropismo celular;
Modificar glicoproteínas do envelope.
Em que consiste o uso de adaptadores na modificação de vetores lentivirais?
Combinar com polímeros/lipossomas;
Prevenir interações indesejadas e respostas imunes.
Em que consistem as modificações genéticas dos vetores lentivirais?
Alterar o genoma para que produza proteínas diferentes.
O que são vetores SIN (auto-inativação)?
Mutação/deleção em U3 das LTRs, inibindo replicação;
Permite expressão controlada do transgene.
O que são vetores não integrativos?
Não integram o transgene no genoma do hospedeiro;
Modificados por mutações nas zonas reguladoras ou na integrase.
Caracterize os retrovírus gamma.
infectam células mitóticas;
Integram em regiões exônicas ou promotores;
Altamente infecciosos;
Capacidade de carga: 8–9 kb.
Quais são as vantagens dos retrovírus gamma?
Simplicidade genética;
Tropismo amplo;
Produção fácil;
Expressão duradoura.
Quais são as desvantagens dos retrovírus gamma?
Transduzem apenas células mitóticas;
Alto risco de mutagênese;
Baixa estabilidade.
Caracterize os Adenovírus de acordo com os critérios de classificação de vírus.
Simetria icosaédrica (cápsideo composto por 240 proteínas – hexons);
Sem envelope;
Material genético: DNA de cadeia dupla linear;
Fibras e domínios Knob (adesão e entrada nas células);
Base do pentão: proteína na base das fibras;
Tamanho: 35 kb.
Qual é a constituição/estrutura genômica de um Adenovírus?
Flanqueado por 2 ITRs (Inverted Terminal Repeats);
2 grandes unidades de transcrição:
✳ Early transcription units (E1, E2, E3, E4): reguladoras;
✳ Late transcription units (MLTU): estruturais.
Descreva o ciclo replicativo do Adenovírus.
Adsorção: ligação pelas fibras e knobs;
Endocitose via clatrina;
Desempacotamento parcial no endossoma;
Cápsideo vai ao núcleo e libera DNA;
DNA viral é transcrito no núcleo;
Produção de proteínas virais no citoplasma;
Maturação e liberação do vírus via lise celular.
Em que consiste a 3ª geração de produção de vetores adenovirais?
Remoção de quase todos os genes virais, exceto ITRs e sinal de empacotamento;
Capacidade de carga ampliada (35 kb);
Maior segurança.
