virusologie 2

Question 1

Ciclul infecțios

Answer 1

1. Atașarea si intrarea particulei virale
2. Traducerea informației genetice
3. Replicarea genomului
4. Asamblarea particulei virale
5. Eliberarea particulei virale

Question 2

O celulă susceptibilă

Answer 2

-are un receptor funcțional
pentru un anumit virus
- celula poate sau nu poate
suporta replicarea virală

Question 3

O celulă rezistentă

Answer 3

-nu are receptor
- poate fi sau nu
competentă să susțină replicarea virală

Question 4

O celulă permisivă

Answer 4

-are capacitatea de a replica
virusul
-poate fi sau nu susceptibilă (prin transfecție)

Question 5

O celulă susceptibilă ȘI permisivă

Answer 5

este celula care
permite intrarea particulei virale și care permite
replicarea particulei virale

Question 6

virusuri cultivare

Answer 6

• La început, virusurile nu au putut fi cultivate în culturi celulare
• Majoritatea virusurilor au fost cultivate utilizând animale de laborator
  -Ouă de pui embrionate (10-12
  zile)

Question 7

Efectul citopatic (CPE)
si incluziunile
DEFINITIE

Answer 7

-Modificări morfologice induse în celule individuale sau grup de celule de infecția cu virus (rotunjire, contracție, fuziune, agregare, pierderea aderenței, liză)
-Incluziile: sunt modificări mai subtile ale arhitecturii intracelulare a celulelor individuale

Question 8

Factori de care depinde observarea CPE la virusurile animale

Answer 8

tipul de virus, cantitatea de inoculum

Question 9

CPE importanta

Answer 9

-este foarte important pentru monitorizarea infectiei virale și deci pentru diagnostic
-Este foarte important de precizat faptul ca nu toate virusurile cauzează un efect citopatic. In consecință, pentru diagnosticul unei infecții virale trebuie să se utilizeze o alta metodă (testul formării de placi etc).

Question 10

Plaque Assay

Answer 10

-Una dintre cele mai bune analize de infectivitate
* Probabil că este cea mai elegantă, cea mai cantitativă și cea mai utilă analiză biologică pentru virusuri
- este încă utilizată pentru a purifica un stoc viral

Question 11

PFU/mL

Answer 11

Plaque-forming units pe mililitru

Question 12

in cazut testului plaque assay, care este scopul stratului de agar semi-solid care se pune peste stratul monocelular de celule infectate

Answer 12

Monostratul cellular acoperit cu un strat
de agar pentru a oprii difuziunea virusului

Question 13

De câte particle virale avem
nevoie pentru formarea unei placi?

Answer 13

• One-Hit (o linie)
• Two hits: (o curba)

Question 14

One-Hit (o linie) :

Answer 14

• o particula virala este suficienta pentru a forma o placa
• numărul plăcilor este direct proporțional cu numărul particulelor virale

Question 15

Two hits: (o curba) :

Answer 15

• mai mult de o particula viral este necesara pentru a forma o placa
• numărul plăcilor este direct proporțional cu pătratul concentrației virusului inoculat (genomul este împachetat in doua particule si deci este nevoie cele doua particule pentru infecție (virusurile plantelor)

Question 16

Doza infecțioasă 50 sau mediană TCID50/ml

Answer 16

-acea cantitate de agent patogen care va produce modificări patologice in 50% din cultura celulara inoculată.
* Exprimată in TCID50/ml

Question 17

Endpoint dilution assay

Answer 17

• Celule in fiecare godeu
• Diluții seriate ale virusului de testat
• Incubație
• Vizualizarea efectului citopatic

Question 18

TCID

Answer 18

tissue culture infectious doses 50%.

Question 19

infectie

Answer 19

Nu toate particulele virale sunt
infecțioase

Question 20

Nr. de particule virale (fizice)/Nr.
de particule infecțioase

Answer 20

• O singură particulă poate iniția infecția
• Nu toate virusurile pot iniția infecția :
• Particule deteriorate
• Mutații
• Complexitatea ciclului infecțios

Question 21

Ciclul de creștere intr-o singura
etapa (”One-step growth cycle”)

Answer 21

• Adsorbție (celulele + virus)
• Diluția culturii (oprim infecția sau sincronizăm cultura)
• Incubare
• Evaluare

Question 22

Perioada de ECLIPSA

Answer 22

faza în care se pierde infecțiozitatea (când
virionii sunt dezasamblați după ce au penetrat in celule)

Question 23

Perioada de LATENTA

Answer 23

timpul necesar replicării, asamblării și
eliberării de noi particule de virus înainte de liză

Question 24

Sincronizarea infectiei: cheia
ciclului “one-step growth

Answer 24

• Infecția sincronă poate fi realizată prin
  infectarea culturilor celulare cu un număr suficient de particule virale pentru a fi sigur ca un număr cat mai mare de celule sunt infectate.
• Pentru a realiza acest lucru, trebuie să infectăm toate celulele
• Pentru a defini acest număr trebuie să calculam MOI („multiplicity of infections”).

Question 25

Multiplicitatea infecției (MOI) 1

Answer 25

* Numărul de particule infecțioase adăugate pe celulă * Cantitatea de virus (PFU) ÷ # de celule * Nu este numărul de particule infecțioase pe care le primește fiecare celulă * Daca adăugam 10^7 particule de virus la 10^6 celule atunci MOI este 10: dar fiecare celulă NU primește 10 particule virale

Question 26

Multiplicitatea infecției (MOI) 2

Answer 26

* Infecția depinde de coliziunea aleatorie a particulelor virale și celulele * Când celule susceptibile sunt amestecate cu virusul, unele celule sunt neinfectate, unele primesc una, două, trei sau mai multe particule * Distribuția particulelor pe celulă este cel mai bine descrisă prin formula distribuției lui Poisson

Question 27

formula distribuției lui Poisson

Answer 27

P(k) = e-mmk/k! -P (k): fracțiunea celulei infectate de k particule virale -m: multiplicitatea infecției (moi)

Question 28

Celule neinfectate

Answer 28

P (0) = e-m

Question 29

Celule ce au primit o singură particulă

Answer 29

P (1) = me-m

Question 30

Celula infectată cu multiplicare

Answer 30

P (> 1) = 1- e-m (m + 1) -această valoare se obține scăzând din 1 (suma tuturor probabilităților pentru orice valoare a lui K) probabilitățile P (0) și P (1)

Question 31

Exemple MOI

Answer 31

-Dacă 106 cells sunt infectate cu un moi=10: * 45 celule nu sunt infectate * 450 cellule primesc 1 particulă * Restul de celule primesc >1 particule -Dacă 106 cells sunt infectate cu un moi=1: * 37% dintre celule nu sunt infectate * 37% dintre celule primesc 1 particulă * 26% dintre cellule primesc >1 particule -Dacă 106 cells sunt infectate cu un moi=0,001: * 99,9% dintre celule nu sunt infectate * 00,099% dintre celule primesc 1 particulă (990) * 00,0001% dintre cellule primesc >1 particule

Question 32

Concluzii MOI

Answer 32

* Multiplicitatea infecției este un factor critic în proiectarea unui experiment. * Un adevărat experiment de multiplicare a unui virus într-un singur pas se poate face numai la MOI ridicat. * La MOI scăzut: se vor măsura mai multe runde (cicluri) de infecție * Un experiment realizat la MOI scăzut are utilitate prin faptul că măsoară atât creșterea, cât și răspândirea virusului în cultură, * Timpul de la infecție pana la instalarea platoului nu reflectă cu precizie timpul necesar unui singur ciclu de infecție.

Question 33

Măsurarea fizică a particulelor de virus (pentru virusurile care nu formează plăci)

Answer 33

* Hemaglutinarea * Microscopia electronica * Masurarea enzimelor virale * Serologie * Acizii nucleici Toate aceste tehnici nu ne spun nimic despre infectiozitatea virusului

Question 34

arbore filogenetic

Answer 34

măsoară distanța genetică dintre organisme și identifică cele mai apropiate rude -"Rădăcina" este presupusul strămoș comun al tuturor organismelor din arbore.

Question 35

Pentru a construi un arbore filogenetic

Answer 35

-se compara diferențele dintre secvențele de nucleotide ale mai multor izolate de organisme presupus înrudite. * Fiecare diviziune din arbore este un "nod", strămoșul comun al organismelor sau al izolatelor identificate în dreapta * După o astfel de ramificare, organismele și secvențele lor evoluează independent.

Question 36

scara

Answer 36

numărul de modificări /lungimea secvenței

Question 37

Polymerase chain reaction (PCR)

Answer 37

* Cercetare * Industrie * Diagnostic -Produsul PCR nu este același cu virusul infecțios