Week 8 (qPCR et Prélèvement de traces) Flashcards
(41 cards)
Que sont les étapes de l’analyse de traces biologiques ?
- Il faut les trouver
- Il faut avoir une idée sûr leur nature
- Il faut réussir à les prélever pour les amener au laboratoire pour l’analyse
- Il faut avoir conscience des erreurs qui peuvent intervenir aux diverses étapes
Que sont les paramètres qui limitent le succès des analyses de traces biologiques ?
- La quantité d’ADN
- le degré de dégradation
- la présence de substances interférentes
Que sont les caractéristiques du sang ?
Le sang est composé de globules rouges, globules blancs et plaquettes. Les globules rouges contiennent de l’hémoglobine qui est une protéine qui assure le transport de l’oxygène
Quels éléments du sang est utile pour séquencer un profil ADN ?
Les globules blancs. Les globules rouges perdent leur noyau après maturation.
Combien de globules blancs sont présents dans le sang (cellules/Microlitres) ?
5000 - 10000 par micorlitres
Est-ce que le sang à but de transfusion et utilisable pour séquencer des profils d’ADN ?
Non car ils sont déleucocytés
Que sont les types de cellules présents dans le sperme et en quelle quantités (cellules par microlitres) ?
- les spermatozoïdes (100 000 cel/microL)
- Les cellules épithéliales
- les leucocytes/globules blancs (100 cel/microL)
Qu’est analysé dans la salive à des fins de séquençage d’ADN ?
Les cellules décrochées des parois des glandes salivaires ou des parois buccales (100 cellules par microL)
Que sont des exemples de d’échantillions ou l’on peut prélever de l’ADN ?
- les mégôts de cigarettes
- Brosses à dents
- les verres, récipients
- les denrées alimentaires
- chewing-gum
- brosses à dents
- timbres
- rabats d’enveloppes
Quand est-ce que l’ADN est séquençé des dents et os ?
Pour l’indentification de cadavres et de victimes de conflicts
Pourquoi l’ADN des os et des dents est utile dans des cas de vieux cadavres ou cadavres brûlées ?
Car ils ont des bonnes chances de survie car l’ADN est contenu au milieu de la dent / Os
Même si le tissue est mal conservé on peut toujours séquencer l’ADN mitochondrial qui donne des bons résultats
Que sont les caractéristiques des cheveux et poils sous un angle de la science forensique ?
Les cheveux laissés peuvent être utiles pour séquencer l’ADN mitochondrial(bien que les cheveux contiennent beaucoup de kératine qui est un inhibiteur de PCR)
Si les cheveux sont arrachés avec la racine, l’ADN autosomal est séquençable
Dans quel cas est-ce que l’ADN dans l’urine est séquencé ?
Pour des cas de doppage pour vérifier que l’urine testé appartient au bon individu.
Que sont les cellules présents dans l’urine qui contiennent de l’ADN analysable ?
Des cellules épithéliales décrochés des parois des organes traversés par l’urine (quelques cellules par microL)
Est-ce que les ongles sont une bonne source d’ADN ?
Oui très bonne ce qui cause malheuresement souvent des profils de mélange lors d’un cas de défense d’une victime
Que sont les trois causes de dégradation de l’ADN (“ennemis”) ?
- l’humidité (eau aide les réactions de dégradation
- La chaleur (accélère toutes les réactions)
- la lumière (rayons UV)
substances chimiques aussi (acides, eau de Javel)
Que sont des différents moyens de prélever des traces ?
- Mini Tapes
- Écouvillons
- Papier FTA
Que sont des Mini Tapes ?
C’est des bouts de scotch stériles qui sont appliqués sur des surfaces pour prélever des cellules de la peau.
Le scotch est pressé à plusieurs reprises contre l’article pour transférer la trace. Le scotch est ensuite déchiqueté et transferé dans un tube d’extraction prêt à être analysé
Que sont des écouvillons ?
Des contons tiges plus longs
Comment sont utilisés les écouvillons lors de prélèvements ?
La technique de double swab:
1. Un frottit avec un écouvillon imbibé d’eau
2. Un frottit avec un écouvillon sec
Les deux sont ensuites analysés
Comment s’assurer que les prélèvements ne sont pas modifier ?
Après le prélèvement, l’écouvillon est mis dans une boîte en carton offrant de bonnes conditions de séchage, puis son scellés par un autocollant très fragile
Qu’est un exemple de prélèvement fait avec des écouvillons ?
Des prélèvements buccaux. Frottement d’un écouvillon sur la paroi buccale
Comment fonctionne / est utilisé le papier FTA pour les prélèvements de traces ?
Le prélèvement buccal obtenu par frottement est appliqué sur le papier. Le papier arrive a “casser” les cellules et libérer l’ADN qui est ensuite fixé dans les mailles du papier. Neutralise les bactéries et virus pathogènes
Que sont des mesures de prévention de contaminations ?
- locaux et matériel séparés pour les opérations pre/post-PCR
- le port de gants et de masques
- ne pas se tenir au-dessus des échantillons ouverts (perte de cheveux, pellicules ou particules de peau)
- utiliser des filtres de protection sur les instruments utilisés pour prélever les extraits des échantillons pour éviter de transférer des micro-projections d’un échantillon à un autre
Établir des bases de données des profils ADN du personnel des laboratoires et des services de police
Mais il y a une question de confidentialité qui rentre en jeu
