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BCM II > 1ª PARTE > Flashcards

1ª PARTE Flashcards

(70 cards)

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1
Q

2 passos para a formação de DNA recombinante

2 coisas essenciais

A

enzima de restrição
Dna ligase

1) clivagem do DNA c/ a enzima de restrição
2) extremidades complementares unem-se (DNA ligase)
3) o DNA recombinante pode ser introduzido numa molécula maior

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2
Q

As endonucleases nao atacam o DNA da própria bactéria porque têm um mecanismo de proteção-> …

A

metilação do DNA

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3
Q

1 mecanismo de controlo da transcrição nos eucariotas

A

metilação do DNA

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4
Q

Através do padrão de metilação pode se realizar um diagnóstico

2 doenças

A

sindrome de prader willi

sindrome de angelman

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5
Q

mecanismo que controla a expressão de alguns genes associados ao desenvolvimento dos embriões dos mamíferos

A

imprinting genómico

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6
Q

gel de poliacrilamida vs gel da garose

qual é o que permite a separação de moléculas com diferenças em apenas 1 nucleotido?

A

poliacrilamida

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7
Q

variação da eletroforese em agarose que permite separar fragmentos de DNAs extremamente longos

A

gel de campo pulsado

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8
Q

eletroforese faz a separação de acordo com … ou…

A

tamanho ou densidade

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9
Q

definição PCR

A

tecnica de ampliação de amostras (ex DNA)

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10
Q

3 tipos de sondas de DNA

A

cDNA- derivam de mRNA e só têm exões ; tamanho variável

genomicas- derivam de qqlr DNA, podem ter introes e exoes; tamanho variável

oligonucleotídicas- sintetizadas de acordo com o DNA alvo (sondas à medida) ; mt pequenas

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11
Q

sondas + especificas

-

A

+ -> oligonucleotidicas

  • -> genomicas
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12
Q

As sondas oligonucleotídicas são muito …. se hibridizadas com DNA amplificado

e se forem usadas no DNA genomico total?

A

eficientes

horriveis

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13
Q

qual o melhor DNA recombinante ou RNA recombinante?

pq?

A

RNA recombinante

so tem expões, ou seja, dados genéticos essenciais

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14
Q

estrategias de marcação de sondas, com P32

A

nick translation

marcação aleatória de priores

marcação de pontas

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15
Q

nick translation
2 enzimas
procedimento

A

DNAase
DNA polimerase

a DNAase faz quebras intervaladas no DNA
DNA polimerase remove nucleotídeos
vão ser incorporados nucleotídeos marcados radioativamente nas quebras

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16
Q

marcação aleatória de primers
marcação de pontas

procedimentos

A

marcação aleatória de primers- quebra do DNA com endonulease seguida de uma desnaturação; colocadas em gelo (para as cadeias se manterem separadas) ; sintetizam se 6 oligonuclestidos que vai ser iniciadores e incorporam se DNTPs na nova seq complementar à cadeia mãe

marcação de pontas- marcação seguida de clivagem ; obtém se moléculas de DNA com uma extremidade com fósforo radioativo

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17
Q

NGS permite sequenciar todo o genoma? deteta apenas alguns tipos de mutações?

A

SIM

deteta todas as mutações

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18
Q

a leitura na sequênciação NGS é feita por …

A

apagar

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19
Q

o que é que a NGS fornece?

A

a ordem de nucleotidos individuais de DNA ou RNA isolado a partir de células animais, plantas, etc

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20
Q

DNA fingerprinting é preciso?

A

naom produz informações mt pouco precisas

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21
Q

alternativa + low cost de sequenciação

A

exome sequencing

apenas sequência as regiões codificastes do genoma

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22
Q

o que sao VNTRs

A

sequências longas de DNA repetitivo (4 a 40 repetições)

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23
Q

o que sao os STRs

A

sequências pequenas de DNA repetitivo (2 a 5 repetições)

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24
Q

seq de DNA repetitivas que tem maior utilidade na identificação de indivíduos através da tecnologia do DNA fingerprint

A

STRs

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25
mapeamento genomico | 2 tipos de mapas
mapas fisicos mapas genéticos de ligação
26
em que é que se baseiam os mapas físicos? e os mapas genéticos de ligação?
mapas físicos-> baseiam se na analise das moléculas de DNA que constituem cada cromossoma mapas genéticos de ligação-> baseiam se na frequência com 2 ou + marcadores genéticos sao co herdados
27
o que é um marcador genético?
é detetável como diferenças entre indivíduos da mm população
28
2 tipos de marcadores geneticos
mutação- diferença rara e ocorre em sequências codificantes polimorfismo- diferença comum e nao ocorre em sequências codificantes
29
o que a hibridização?
processo pelo qual 2 segmentos de DNA de cadeia única complementares formam uma helice
30
como saber se um fragmento de DNA clonado esta presente numa molécula de mRNA?
1) Desnaturação do DNA 2) hibridização do RNA 3) Tratamento com 1 nuclease que degrada intrões
31
2 tipos de hibridização
em fase liquida em fase solida
32
a hibridização em fase solida é realizada por ...
microarrays
33
o que sao microarrays?
lamina de microscópio crivada com fragmentos de DNA, contendo uma sequência de nucleotidos que serve como sonda para um gene especifico
34
resultados da leitura de hibridização em fase solida amarelo vermelho verde
amarelo- houve hibridização vermelho - há um défice (menos material genético) verde - há duplicação no doente (mais material genético)
35
a tecnica dos microarrays apenas permite detetar mutações...
desiquilibradas
36
é preciso células vivas intactas para a tecnica dos microarrays?
nao
37
A técnica pela qual os fragmentos de RNA são separados por electroforese em gel de agarose, transferidos para uma membrana de nylon e reconhecidos pela hibridização complementar com uma sonda radioactiva detetada por autoradiografia
nothern blotting
38
A técnica pela qual os fragmentos de DNA são separados por electroforese em gel de agarose, transferidos para uma membrana de nylon e reconhecidos pela hibridização complementar com uma sonda radioactiva detetada por autoradiografia
Southern blotting
39
o southern blotting serve para detetar doenças...
autossomicas recessivas
40
procedimento de southern blotting
1) clivagem das moléculas de DNA por endonucleases 2) separadas por eletroforese 3) fragmentos sao transferidos para a membrana de nylon 4) hibridização radiomarcada 5) leitura
41
western blotting é usado para...
proteinas
42
Consegue-se separar todas as proteínas no Western blotting?
NAO | nao se separam as que têm o mm ponto isoelétrico e tamanho
43
2 técnicas que permitem saber se ha variações no genoma
MLPA arrays
44
qual a mais abrangente? fish OU mlpa
MLPA
45
2 coisas necessárias para a FISH
sonda marcada com flurorcromos saber o "material alvo" (a sonda que vamos utilizar e para que cromossoma)
46
4 tipos de sondas de DNA
centromericas sequência unica pintura cromossómica subteloméricas
47
grandes vantagens da FISH
nao é necessario ter células em cultura pode fazer analise em interface e metafase
48
procedimento da FISH
sondas sao marcadas com flurocromos ativadas por um feixe de ultravioletas visualizados em microscopios -> a cor do sinal vai depender tanto do flurocromo como do filtro utilizado
49
o que é um polimorfismo?
diferença comum e ocorre em sequências nao codificantes
50
O que é que a pintura cromosómica envolve?
hibridização de sondas fluorescentes aos cromossomas
51
O DNA fingerprinting é baseado na identificação de minissatélites que são:
sequências curtas de DNA repetitivo
52
minissatélites =
SNTRs
53
processo de clonagem
fragmento de DNA humano que tem o gene a ser clonado pode ser unido com um cromossoma de vírus bacteriano, que depois é introduzido numa célula bacteriana o virus replica-se , amplificando o fragmento de DNA humano
54
2 coisas necessaria para clonagem
1 fragmento a ser clonado vector de clonagem (virus ou plasmideo)
55
definição vetores de clonagem
veículos de transporte dos fragmentos de DNA e os transferem para as células, que se vai replicar
56
3 coisas necessarias aos vetores de clonagem
local complementar de ligação para os fragmentos a inserir com enzimas especificas (sequências poly linker) origem de replicação genes que confiram resistencia a antibioticos
57
7 tipos de vetores
``` plasmideos bacteriofagos cosmideos YAC BAC MAC HAC ```
58
Plasmideo
molecula de DNA circular que nao se integra no genoma bacteriano
59
bacteriofago vs plasmideo fragmento MAIOR que 20 kb
PLASMIDEO
60
bacteriofago vs plasmideo fragmento MENOR que 20 kb
BACTERIOFAGO
61
bacteriofago
virus bacteriano com 1 molécula de DNA com 45kb
62
definição de cosmideo Clona um fragmento de cada vez?
plasmideo com capacidade infeciosa dos fagos PERMITEM A CLONAGEM DE VÁRIAS SEQUENCIAS DE DNA EM SIMULTÂNEO
63
definição de YACs
cromossoma de levedura com centromero e telomero
64
YACs vs outros vetores
YACs são os maiores suporta fragmentos maiores são inseridos num hospedeiro eucarísticos-> levedura
65
o facto dos YACs clonarem fragmentos maiores torna mais ..., o movimento unidirecional ao longo do cromossoma
FÁCIL
66
definição de BAC
semelhantes aos plasmideos com uma origem de replicação , MAS têm ORI binding proteína necessárias à replicação
67
definição de HAC e MAC
vetores cromossomicos autónomos que nao integram o genoma do hospedeiro
68
vetores que tem maior utilidade para a compreensão da estrutura cromossoma e função dos genes
HACs e MACs
69
definição de PCR
amplificação de DNA degradado, sem o uso de um organismo vivo
70
5 coisas essenciais o PCR
``` DMA dNTPs (nucleotidos livres) primers Taq DNA polimerase termociclador ```

BCM II (6 decks)

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