1-Isolation des protéines

Question 1

Première étape dans la purification des protéines

Answer 1

les dissoudre dans une phase liquide

Question 2

Lyse des cellules permet la…

Answer 2

libération des protéines

Question 3

Lyse osmotique: cellules sont suspendues dans une solution…

Answer 3

hypotonique

Question 4

solution hypotonique?

Answer 4

concentration de la solution est inférieure à la concentration de la cellule. eau rentre pour diminuer concentration, cellule gonfle, lyse.

Question 5

lyse osmotique efficace avec quels types de cellules?

Answer 5

cellules animales qui n’ont pas de paroi cellulaire

Question 6

cellule bactériennes, levures et cellules végétales, quelle méthode?

Answer 6

lysozyme: enzyme qui dégrade les parois cellulaires

Question 7

Désintégration mécanique techniques (5)

Answer 7

1. Broyage avec de sable, alumine ou billes de verre
2. Déchiquetage mécanique (Waring)
3. Homogénéisateur (Potter en téflon)
4. rupture par haute pression (French press)
5. Sonication par vibration ultrasonique

Question 8

organites peuvent être identifiés avec des…

Answer 8

marqueurs moléculaires

Question 9

Intégrité structurale des protéines et leur stabilité dépendent de … 3 facteurs

Answer 9

1. pH
2. Température
3. Protéases

Question 10

pourquoi utiliser des solutions tampon lors de la purification des protéines?

Answer 10

Maintenir le pH dans une zone physiologique pour éviter d’endommager les protéines par des variations brusques.

Question 11

rsiques reliés à la température lors de la purification des protéines?

Answer 11

• facilement dénatuées à haute température

- lorsque conservées à 25 degrés, se dénaturent lentement

Question 12

températures idéales pour purification et conservation à long terme

Answer 12

• 0-5 degrés: purification

- -20 à -80 degrés: conserver après purification+ long terme

Question 13

protéases peuvent faire quoi lors de la purification…?

Answer 13

Protéases sont des enzymes qui hydrolysent les liens peptidiques
- peuvent être libérées lors de la lyse et dégrader les protéines

Question 14

solution pour éviter que les protéases désintègrent les protéines?

Answer 14

ajout d’inhibiteurs de protéases

Question 15

Propriétés physico-chimiques des protéines (4)

Answer 15

• Solubilité
• Charge ionique
• Taille moléculaire
• propriétés d’absorption et de liaison à d’autres molécules biologiques

Question 16

techniques de séparation pour solubilité?

Answer 16

précipitation

Question 17

techniques de séparation pour charge ionique? 3

Answer 17

• chromatographie par échange d’ions
• électrophorèse
• focalisation isoélectrique

Question 18

techniques de séparation pour taille moléculaire 3

Answer 18

• ultracentrifugation
• chromatographie par gel- filtration
• électrophorèse

Question 19

techniques de séparation pour spécifité

Answer 19

chromatographie d’affinité

Question 20

structure primaire des protéines…

Answer 20

séquence en acide aminés de la chaîne polypeptidique

Question 21

structure secondaire… exemple

Answer 21

hélice

Question 22

structure tertiaire des protéines

Answer 22

repliement de la séquence polypeptidique

Question 23

structure quaternaire

Answer 23

oligomérisation des polypeptides

ex: hémoglobine

Question 24

hémoglobine est un …

Answer 24

hétéro- tétramère

Question 25

solubilité d’une protéine dépend de (3)

Answer 25

• interactions polaires avec le solvant aqueux
• interactions ioniques avec les sels en solution
• forces électrostatiques répulsives entre molécules ou agrégats de chage similaire

Question 26

variations utilisées pour diminuer la solubilité d’une protéine (4)

Answer 26

• force ionique (concentration saline)
• ajout de solvants organiques
• pH
• ajout de polymères inertes

Question 27

zone de force ionique se situe entre…

Answer 27

0 et 0.5 M

Question 28

phénomène de salting-in?

Answer 28

augmentation en solubilité avec ajout de faibles concentrations de sels

Question 29

pourquoi solubilité augmente?

Answer 29

sels lient directement les protéines et augmentent leur charge nette.

• sels augmentent interactions avec l’eau
• augmentent répulsion entre protéines, donc moins d’agrégation

Question 30

phénomène de salting-out?

Answer 30

diminution de la solubilité d’une protéine dans l’eau par l’ajout de hautes concentrations de sels

Question 31

expliquer phénomène de salting out

Answer 31

• hydratation des ions de sels a une forte tendance à séquestrer les molécules d’eau
• séquestration d’eau diminue solvatation des protéines
• après une certaine quantité de molécules d’eau sont séquestrées, protéines vont agréger

Question 32

2 sorties de sels sont utilisés pour la précipation des protéines

Answer 32

• chaotropiques

- Sels optimaux

Question 33

sels chaotropiques?

Answer 33

sels se lient et interagissent directement avec la protéine

Question 34

sels optimaux

Answer 34

encouragent l’hydratation des régions polaires et la désydratation des régions hydrophobes. aucune interaction avec protéine

Question 35

série Hofmeister: Quels ions favorisent le salting out (précipitation)

Answer 35

• anions ++ hydratés

- cations - hydratés

Question 36

série Hofmeister: Quels ions favorisent le salting in (solubilité)

Answer 36

anions moins hydratés

cations ++ hydratés

Question 37

sel le plus couramment utilisé est le …

Answer 37

sulfate d’ammonium (NH4)SO4

Question 38

au pH isoélectrique, qu’arrive t-il à la solubilité de la protéine?

Answer 38

protéine devient moins soluble

Question 39

protéine devient moins soluble au PI, pourquoi?

Answer 39

charge nette minimise la répulsion électrostatique