Lab 28: Transformation bactérienne Flashcards
Qu’est-ce que la transgenèse?
Une technique qui consiste à insérer un gène étranger dans une cellule
Dans quel domaine est utilisé la transgenèse?
- Chez une espèce de poisson vivant dans les eaux glaciales de l’arctique, on a isolé un gène jouant un rôle dans la protection contre le froid
- Par transgenèse, on a inséré ce gène dans des plants de blé, une fois modifiés, résistant mieux au gel
aussi:
-Utilisation des gènes qui interviennent dans la résistance contre les parasites ou offrent une meilleure protection à la sécheresse
DESSIN cellule bactérienne…
Tansgenèse dans le domaine de l’environnement
On modifie génétiquement des bactéries pour qu’elles puissent digérer des nappes de pétrole
-On utilise les bactéries aussi comme usine pour produire différents composés comme le plastique ou des médicaments
(Ex: on insère le gène humain de l’insuline dans une bactérie pour qu’elle puissent fabriquer de l’insuline. Ensuite, on isole et purifie cette insuline qu’on peut donner aux individus souffrant du diabète
Qu’est-ce que les plasmides de certaines bactéries?
Ce sont des fragments d’ADN, qui contiennent plusieurs gènes bactéries qui donnent avantage au microorganisme
Comment on effectue le transgenèse pour les plasmides?
- On enlève certains gènes du plasmide en utilisent des enzymes de restriction (fonctionnent comme des ciseaux moléculaires qui permettent de couper et d’enlever une portion de l’ADN plasmidique)
- Ensuite, on insère le gène d’intérêt dans le plasmide, qu’on réintroduit dans la cellule bactérienne
Qu’est-ce qui est contenu dans le plasmide pGLO du laboratoire?
- Gène résistance à la pénicilline, un antibiotique responsable de tuer les bactéries
- Le gène GFP qui provient d’un e méduse bioluminescente (ce gène contient l’information génétique qui permettra à la bactérie de produire la protéine GFP, une protéine qui produit une couleur verte, qui peut seulement être activé s’il y a présence d’arabinose, un sucre)
Qu’est-ce que le choc thermique?
Ça consiste à effectuer un changement de température brusque
-Il augmente la perméabilité de la membrane cellulaire à l’ADN, ce qui augmente l’efficacité de latransgenèse
Qu’est-ce qui est essentiel pour le transfert du gène et son intégration dans la cellule bactérienne?
La durée du choc thermique
Qu’est-ce que contiennent les milieux de culture?
Source d’énergie, facteur de croissance, minéraux… nécessaires à la croissance des cellules
Si vous avez observé des colonies bactériennes dans le contrôle -pGLO LB/amp/ara, comme pourriez-vous expliquer ce résultat?
l’’ampicilline utilisée n’est pas efficace.
Dans la situation où aucune colonie bactérienne n’est présente dans le contrôle +pGLO LB/amp. Qu’est-ce qu’on conclut?
Durant le choc thermique, les bactéries n’ont pas absorbé le plasmide ce qui ne leur a
pas permis de survivre à la présence de l’ampicilline.
Il n’y a aucune bactérie sur le contrôle -pGLO LB. Qu’est-ce qu’on conclut?
Il n’y avait pas de bactéries vivantes dans la culture bactérienne de départ.
Vous avez utilisé le gène GFP à la place du gène humain codant pour la protéine facteur VIII. Par transgenèse, vous avez inséré le gène GFP dans les cellules bactériennes qui remplaçaient les cellules souches humaines.
En admettant que vous expérience de trnsgenèse a fonctionné, expliquer comment le fait de transférer le gène facteur VIII dans les cellules souches du patient peut le guérir de son hémophilie? Est-ce que le transfert de ce gène des cellules déjà différenciées serait aussi efficace pour le traitement?
Les cellules souches sont des cellules qui peuvent se diviser par mitose et se différencier
en cellules spécialisées. Si le gène est modifié dès l’étape cellule souche, toutes les autres cellules issues des mitoses auront le nouveau gène ou le gène modifié et produiront la protéine désirée. Il faut absolument faire le changement dans les cellules souches car une modification dans une cellule déjà spécialisée ne toucherait que cette cellule en particulier et lors de sa mort, le nouveau gène disparaîtrait. La thérapie génique vise la modification d’un grand nombre de cellules afin d’assurer sa réussite.
Dans cette expérience de transgenèse, à quoi sert le choc thermique?
Faire pénétrer le plasmide dans la cellule receveuse (bactérie).
