Uso diagnóstico de anticuerpos Flashcards

1
Q

Sistema inmune innato

A

Rápido inespecífico

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Q

Cuales son las barreras físicas del sistema inmune

A

Piel y mucosa

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3
Q

Sistema inmune adaptativo

A

Lento y específico

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4
Q

Qué célula secreta anticuerpos?

A

células plasmáticas <– linfocitos B

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5
Q

Células de la inmunidad adaptativa

A

Linfocitos B- céls plasmáticas
Linfocitos T - como efectores

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6
Q

Para que nos sirven los anticuerpos diagnósticos

A

Identificar patógenos
Saber los componentes de la sangre

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7
Q

¿Qué es ELISA?

A

Test inmunológico muy sensitivo

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8
Q

¿Para qué se utiliza ELISA?

A

Para la detección y cuantificación de:
- Anticuerpos
- Antígenos
- Proteínas
- Glucoproteínas
- Hormonas

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9
Q

Proteína elaborada por las células plasmáticas en respuesta a un antígeno

A

Anticuerpo

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10
Q

Composición anticuerpo

A

Se compone de:
* 2 cadenas pesadas (variable, puesta por linfocito B)
* 2 cadenas lígeras (constante)
Cada cadena pesada se une a la ligera mediante puente disulfuros.

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11
Q

¿A qué se une un anticuerpo?

A

A un solo antígeno específico

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12
Q

¿Para qué el linfocito B pone una cadena pesada diferente?

A

Es específico a cada parte de un microorganismo

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13
Q

¿Qué tipo de anticuerpos se utilizan?

A

De origen monoclonal

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14
Q

¿Cómo se logra realizar un ELISA?

A

Realizando complejos antígeno-anticuerpo

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15
Q

Cómo funciona la técnica ELISA

A

detecta antígenos específicos con anticuerpos marcados

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16
Q

Molécula ajena o tóxica para el organismo que, una vez dentro del cuerpo, induce en éste una respuesta inmunitaria

A

Antígeno

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17
Q

¿Qué provocan los antígenos dentro del cuerpo?

A

Formación de anticuerpos

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18
Q

¿Qué se requiere para realizar un ELISA? (4)

A

Anticuerpos primario y/o secundario
Antígeno
Buffer
Cromógeno o sustrato

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19
Q

Pasos generales para realizar un ELISA (4)

A
  1. Recubrimiento
  2. Bloqueo
  3. Detección
  4. Lectura final
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20
Q

¿Con qué se hace el recubrimiento?

A

Con un antígeno o anticuerpo

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21
Q

¿Con qué se hace normalmente el bloqueo?

A

Con la adición de albúmina de suero bovino [BSA]

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22
Q

¿Para qué sirve el bloqueo?

A

Para evitar que en las incubaciones se unan a la placa, de forma inespecífica otras moléculas que podrían interferir con los resultados

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23
Q

ELISA directo

A
  • El antígeno se inmoviliza sobre una placa
  • Se añaden anticuerpos primarios antígeno de interés con una enzima
  • Se pone el sustrato de la enzima para que reaccione–> señal visible (cambia color)
  • Ciclos de lavado intermedios
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24
Q

Funciones de la ELISA directo

A

Analizar la respuesta inmunológica
Baja sensibilidad
Mucho ruido de fondo ya que las proteínas y antígenos se quedan en el fondo

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25
Q

ELISA indirecto

A
  • Se inmoviliza el antígeno sobre una placa
  • Se pone un anticuerpo primario antígeno de interés (sin marcar) (sin la enzima)
  • Se pone un anticuerpo secundario para el primer anticuerpo marcado con la enzima
  • Se añade el sustrato reacciona con la enzima y te da una señal visible
  • Ciclos de lavado intermedios
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26
Q

Ventajas ELISA indirecto

A

Mayor sensibilidad
Proceso más tardado
Reacciones cruzadas
Determinar la concentración total de anticuerpos en la muestra

27
Q

ELISA tipo sándwich

A
  • El anticuerpo de captura se inmoviliza
  • Se añade el antígeno de interés–> se une al anticuerpo de captura
  • Se añade un anticuerpo de detección
  • Se añade un anticuerpo secundario marcado con la enzima
  • Ciclos de lavado intermedios
28
Q

Ventajas de la ELISA tipo sándwich

A

Análisis de muestras complejas
Alta sensibilidad y especificidad

29
Q

Tipo de ELISA más simple y rápido

A

ELISA directo

30
Q

¿Por qué ELISA directo tiene un uso limitado?

A

Por su menor sensibilidad y la dificultad para obtener un conjugado que reconozca directamente al antígeno

31
Q

¿Para qué sirven los controles?

A

Para saber que la muestra se realizó correctamente

32
Q

Para qué se usa una citometría de flujo?

A

Identificar y cuantificar diferentes poblaciones celulares en suspensión

33
Q

Qué son los cluster of differentiation?

A

antígenos en la membrana celular
específicos para la célula o su linaje

34
Q

Cómo funciona la citometría de flujo?

A

Marcan CD con anticuerpos
las células pasan una por una en solución por un laser
Dispersa el láser dependiendo del tamaño de la célula y sus proteínas expresadas (marcadas con anticuerpos)

35
Q

Ejemplos de aplicaciones de la citometría de flujo

A

Leucemias
Seguimiento de VIH
linfomas

36
Q

IgM

A

Respuesta a una infección aguda

37
Q

IgG

A

Respuesta de memoria

38
Q

¿Qué es Southern Blot?

A

Técnica de laboratorio utilizada para detectar una secuencia específica de DNA en una muestra de sangre o tejido

39
Q

¿A partir de qué se busca el DNA en esta técnica?

A

A partir de DNA

40
Q

Enzima que divide al DNA en fragmentos cerca o en de sitios de reconocimiento específicos dentro de moléculas conocidas como sitios de restricción

A

Enzima de restricción

41
Q

Otro nombre para la enzima de restricción

A

Endonucleasa de restricción

42
Q

¿Dónde se encuentran los sitios de reconocimiento?

A

Dentro de las moléculas de reconocimiento

43
Q

¿Qué reconoce la enzima de restricción?

A

Una secuencia específica de nucleótidos

44
Q

¿Qué produce la enzima de restricción?

A

Un corte de la doble cadena del DNA

45
Q

¿Qué les pasa a los fragmentos de DNA producidos por el corte de la enzima de restricción?

A

Son separados por electroforesis

46
Q

Cómo funciona una prueba Southern blot?

A

aísla DNA
corta DNA con enzimas de restricción
separa secuencias de DNA por electroforesis
transfiere fragmentos de DNA del gel a una membrana de nitrocelulosa
hibridación: añaden sondas marcadas radiactivamente para la secuencia de DNA de interés
se guarda la membrana de nitrocelulosa con una película de rayos-x fuera de la luz para que las sondas radioactivas la marquen

47
Q

Cuál es la diferencia del northern blot con el southern blot?

A

El northern blot es para RNA
usa DNAsas antes de la electroforesis

48
Q

Cuál es la diferencia del western blot con el southern blot?

A

El western blot detecta proteínas
usa anticuerpos marcados en vez de sondas

49
Q

Uso diagnóstico de Ac en infección viral

A

Ver respuesta de paciente a infección como respuesta inmune aguda o de memoria con IGs

50
Q

¿Qué es Northern Blot?

A

Técnica de laboratorio utilizada para detectar una secuencia de RNA específica en una muestra de sangre o tejido

51
Q

¿Qué se usa en esta técnica para encontrar el RNA?

A

DNA

52
Q

Pasos para realizar una Northern Blot

A

Extracción del RNA y separación por electroforesis
Transferencia Northern a una membrana
Hibridación del RNA con una sonda específica
Detección de bandas

53
Q

¿Qué se necesita hacer para obtener una muestra pura de RNA?

A

Separarlo de sus otros componentes moleculares (lípidos, proteínas y DNA)

54
Q

¿Cómo debe estar el gel de agarosa para la separación por electroforesis?

A

Disuelto en buffer M.O.P.S para estabilizar el RNA , y se le añadirá formaldehído para evitar estructuras secundarias

55
Q

¿Qué se le añade para que pueda ser visible?

A

Colorante de carga

56
Q

Proceso por el cual dos hebras sencillas de DNA, RNA o un híbrido se unen por complementariedad de sus bases nitrogenadas, formando una doble cadena

A

Hibridación

57
Q

¿Qué son las sondas?

A

Ácidos nucleicos sintetizados de cadena sencilla que, por complementariedad de sus bases van a hibridar en la muestra sencilla de RNA de interés

La sonda está marcada para poder detectar al RNA

58
Q

Tipos de marcaje de sondas

A

Radioactivo
No radioactivo

59
Q

Aplicaciones de investigación de northern blot

A

Monitoreo de la expresión génica y procesamiento de los diferentes RNA´s

60
Q

Aplicaciones clínicas de Northern Blot

A

Diagnósticos oportunos para el cáncer

61
Q

¿Qué es Western Blot?

A

Técnica de laboratorio utilizada para detectar una proteína específica en una muestra de sangre o tejido

62
Q

¿A partir de qué se busca la proteína en esta técnica?

A

Anticuerpos

63
Q

Pasos para realizar Western Blot

A

Sustraer las proteínas del tejido deseado (ej. sangre) -> ponerlas en un gel SDS -> separar las proteínas según su peso molecular -> transferir las proteínas a una membrana PVDF (mediante un campo eléctrico o químico, para poder detectar la proteína de interés) -> detectamos la proteína mediante un anticuerpo de forma específica -> una vez unido el anticuerpo a la proteína, se usa algún método de fluorescencia o luminiscencia para detectar la proteína

64
Q

¿Qué tipo de anticuerpo es utilizado en este estudio?

A

Monoclonal