DNA recombinante

Question 1

Transformación bacteriana

Answer 1

Es cuando una bacteria incorpora ADN libre de otra célula

Question 2

Conjugación bacteriana

Answer 2

Es cuando se transfiere ADN de manera directa con otra bacteria por medio del pili

Question 3

Transducción bacteriana

Answer 3

Cuando el vector es un bacteriofago

Question 4

Que es un ADN recombinante

Answer 4

Un ADN que proviene de más de una fuente

Question 5

Pasos para producir DNA recombinante
(6)

Answer 5

1. Localizar el gen de interés
2. aislar el gen
3. insertar el gen en otra secuencia de DNA (vector)
4. introducir DNA recombinado en célula huésped
5. Confirmar que la célula huésped recibió el DNA recombinado
6. dejar que la célula prolifere –> clona el gen

Question 6

Enzimas de restricción

Answer 6

Endonucleasas que identifican DNA extraño y lo cortan
En las bacterias es un medio de defensa al cortar ADN exógeno
Originario de bacterias: degrada DNA extraño

Question 7

Nomenclatura de las enzimas de restricción

Answer 7

Acrónimo en cursiva 3 letras
- 1: primera letra del género de la bacteria
- 2 y 3: nombre de la especie
Letra o número de acuerdo a la cepa
Número romano en orden cronológico que se aisló

Question 8

Cómo se protegen las bacterias de sus propias enzimas de restricción?

Answer 8

metilan sus bases que son reconocidas por la enzima para poder diferenciarlas de DNA extraño

Question 9

Clasificación de las enzimas de restricción

Answer 9

Tipo I: restricción y metilación. sitio corte a 1000 pb
Tipo II: reconoce secuencias palindrómicas. sitio de corte = sitio de reconocimiento. Uso en ing genética
Tipo III: restricción y metilación. sitio de corte de 20 - 30 pb
Tipo IV: reconocen DNA metilado

Question 10

Tipos de cortes de las enzimas de restricción (2)

Answer 10

Cohesivos
Romos

Question 11

¿Cómo son los cortes cohesivos?

Answer 11

Corta en nucleótidos diferentes cada cadena.
3 a 5 nt de diferencia

Question 12

¿Cómo son los cortes romos?

Answer 12

Cortes simétricos en ambas cadenas

Question 13

Cómo debe ser el corte para producir DNA recombinante?

Answer 13

con la misma enzima de restricción

Question 14

Vector

Answer 14

Molécula que es capaz de aceptar DNA exógeno

Question 15

Tipos de vectores

Answer 15

Clonación: para obtener grandes cantidades de ADN (almacena la secuencia y la duplica), ejemplos, bacteriofagos, fagemidos, plasmidos y cósmidos

Expresión: transcribe el gen, ejemplos, plasmidos y bacteriofagos

Question 16

Partes de vectores de clonación

Answer 16

Origen de replicación
Sitio múltiple de clonación
Marcador de selección

Question 17

Vector de expresión

Answer 17

Origen de replicación
Sitio múltiple de clonación
Marcador de selección
Cola de poli A
IRES: sitio de entrada del ribosoma
Promotor

Question 18

Secuencia específica que es reconocida por las enzimas de restricción para poder insertar el DNA complementario

Answer 18

Sitio múltiple de clonación

Question 19

Plásmidos

Answer 19

dsDNA, circulares, separados del DNA cromosómico, (bacterias y levadura)

Question 20

Bacteriófago

Answer 20

virus que infecta bacterias

Question 21

Cósmidos

Answer 21

vector híbrido
Plásmidos que se insertan en virus
(resistencia a ab + sitio cos: empaquetamiento)

Question 22

Fagemidos

Answer 22

Plásmidos con sitio ori de un fago –> produce ssDN

Question 23

Cromosoma artificial

Answer 23

BAC (bacteria)
YAC (levadura)

Question 24

Pasos de clonación molecular

Answer 24

1. preparación del inserto
2. preparación del vector: cortar y desfosforilación
3. ligación del inserto y vector
4. preparación de la célula: hacer la membrana permeable (CaCl2)
5. transformación celular: adquiere nuevo gen –> fenotipo
6. identificación de la colonia celular que aceptó el vector

Question 25

¿Cómo se hace la clonación?

Answer 25

Fragmento DNA introducido en un plásmido -> Transformación E. Coli -> Células hijas tienen el plásmido recombinante

Question 26

¿Qué hacen las nucleasas programables?

Answer 26

Reconocen secuencias específicas en un dsDNA