La Photométrie Flashcards
Quels sont les types de photométrie ?
- Photométrie d’absorption et de transmission
- Photométrie d’émission
- Photométrie de diffusion
Qu’est-ce que la photométrie ?
L’étude quantitative et qualitative de substances physiologiquement importantes.
Les substances à doser peuvent absorber, transmettre, dévier ou émettre de la lumière.
Qu’est-ce que les méthodes photométriques peuvent mesurer ?
- L’intensité d’un faisceau lumineux qui traverse une substance
- L’intensité de la lumière émise par la substance
- La quantité de lumière diffusée par la substance
Qu’est-ce qui détermine le type de photométrie employé ?
Les propriétés d’interactions de la substance dosée avec la lumière.
Quelles sont les propriétés d’interactions que peut avoir une substance dosée avec la lumière ?
- Substance qui absorbe et transmet de la lumière à une certaine longueur d’onde et proportionnelle à sa concentration
- Substance qui émet un intensité de fluorescence à une certaine longueur d’onde et proportionnelle à sa concentration
- Substance qui diffuse une lumière incidente proportionnellement à sa concentration
Photométrie d’absorption et de transmission : le principe ?
Mesure l’importance de l’absorption de la lumière par une substance en solution de la façon suivante :
- Faisceau lumineux traverse une substance
- Le faisceau cède une partie de son énergie aux molécules qui l’absorbent et deviennent excitées
- L’intensité du faisceau transmis diminue
- Le spectrophotomètre mesure la diminution de l’intensité
- Cette diminution d’intensité est proportionnelle à la concentration
Quelle est la relation mathématique entre l’absorption et la transmission ?
A = -log T
Principe loi de Beer-Lambert
Loi de Beer:
Jusqu’à une certaine concentration, l’absorbance augmente de façon proportionnelle à la concentration. À un moment donné, l’absorbance n’augmente plus et on obtient un plateau.
Loi de Lambert:
La longueur du trajet optique est la distance que la lumière parcours dans la solution à doser.
Pourquoi l’absorbance n’a pas d’unité ?
A = a x c x l
où
a = coefficient d’absorption molaire (L/molxcm)
c = concentration de la substance en mol/L
l = Longueur du trajet optique en cm
donc:
A = Litre/Mole x cm x Mole/L x cm
Toutes les unités s’annulent
Photométrie d’absorption : Que provoque l’interaction de la lumière avec la matière ?
Une réorganisation énergétique interne des molécules:
- Énergie électronique
- Énergie de vibration
- Énergie de rotation
Photométrie d’absorption: Quelles sont les interactions que peut avoir la lumière avec la matière ?
- Les molécules de la matière absorbent les photons de la lumière
- Les molécules absorbent la lumière de longueur d’onde déterminée d’après son niveau énergétiques potentiel (à l’aide de la courbe spectrale)
- L’absorption se fait par quantité définie d’énergie
Photométrie d’absorption : Nommer les caractéristiques de la solution absorbante
- Elle doit être homogène et transparente
- Elle doit être placée dans un contenant qui ne cause pas de variation d’intensité du faisceau
- La concentration doit être comprise dans la linéarité de la courbe d’étalon
Photométrie d’absorption : Nommer les caractéristiques du faisceau lumineux
- Le faisceau incident doit être monochromatique
- l’intensité du faisceau incident doit être constante et suffisamment grande (donc on allume le spectro d’avance)
- La longueur d’onde de la lumière incidente doit correspondre à la longueur d’onde d’absorption maximale de la solution
Présence de lumière parasite
Photométrie d’émission : Quel est le principe ?
- La substance à étudier doit d’abord absorber l’énergie thermique ou lumineuse
- les molécules deviennent excitées et instables
- Les molécules retournent à un niveau inférieur d’énergie afin d’être plus stables
- Il se produit des transitions électroniques causant l’émission d’énergie lumineuse
- Mesure de l’intensité de cette émission (+ c’est intense, + c’est concentré)
- Détermination de la concentration de la solution (avec la courbe étalon)
Photométrie d’émission : Que porte la lumière émise ?
Elle porte une quantité définie d’énergie lumineuse. une même substance peut émettre plusieurs longueurs d’onde. Mais à une longueur d’onde donnée, l’émission de lumière est représentative de la concentration de la substance.
