P4

Question 1

judul dan tujuan

Answer 1

judul: analisis kualitatif dan kuantitatif vitamin C menggunakan HPLC

tujuan: mempelajari cara kerja HPLC, menganalisis vit C dalam jus buah dan tablet vit C pakai HPLC

Question 2

definisi vitamin C dan HPLC

Answer 2

vitamin C atau asam askorbat:
- nutrien/vitamin yg larut dalam air
- penting dan harus dipenuhi untuk mempertahankan metabolisme tubuh yang optimal
- struktur mirip monosakarida, tapi punya gugus enediol (sertakan struktur)

HPLC:
- high performance liquid chromatography
- untuk misahin berbagai komponen dalam campuran
- teknik lanjutan dari kromatografi cair, di mana pelarut mengalir kolom dengan bantuan gravitasi tapi di HPLC diberi tekanan tinggi shg bisa terpisah bds afinitas
- prinsip: pemisahan analit bds kepolarannya thd fase diam (kolom) dan fase gerak (larutan tertentu)
- campuran terpisah dg waktu retensi tertentu shg memberikan puncak2 terpisah di kromatogram
- skema alat

asam askorbat: salah satu senyawa vitamin C, mudah larut dalam air shg konsumsi berlebihan mudah dikeluarkan bersama urin

Question 3

sistem pemisahan HPLC

Answer 3

• pemisahan dg sistem pemisahan balik (reverse)
• fase gerak = polar, fase diam = nonpolar

Question 4

perhitungan

Answer 4

kurva standar
sb y = luas area puncak (mAU*min)
dicari nilai x (jangan lupa dikali fp = 100) shg hasil x dalam satuan %

dicari konsentrasi asam askorbat dalam jeruk dan vit.C per 100 gram sampel

x(Vo/m sampel)(a gram/100 gram)
di mana a = 100 gram (volume pengenceran sebelum HPLC?)

Question 5

Keunggulan HPLC

Answer 5

1. waktu singkat
2. sensitivitas detektor tinggi
3. bisa meningkatkan throughput
4. hemat biaya karena cuma butuh sedikit sampel
5. bisa buat organik & anor
6. bisa menggunakan bermacam-macam detector, misal diode array detector
7. kolom dapat digunakan kembali
8. mudah melakukan “sample recovery”

Question 6

pemisahan dan pemompaan HPLC: normal phase, Reverse phase, isokratik, gradien

Answer 6

macam sistem pemisahan
1. normal phase: fase diam silika gel –> u/senyawa organik
2. reverse phase: fase diam C8/C18 (kolom desil dan oktadesil) –> u/senyawa organik
3. sistem penukar ion –> u/ion anorganik
4. pemisahan bds ukuran –> u/makromolekul organik

sistem pemompaan
isokratik: komposisi pelarut selalu tetap selama analisis
gradien: komposisi pelarut berubah menurut program komposisi tertentu

Question 7

contoh fase gerak dan fase cair

Answer 7

fase gerak: pelarut polar (metanol, air, asetonitril) maupun nonpolar (n-heksana)
fase diam: dipack dalam kolom HPLC, material fase diam menentukan sistem pemisahan

Question 8

metode HPLC berdasarkan sifat serapan terhadap …

Answer 8

• UV-Vis
• indeks refraksi (RID)
• fluoresensi
• deteksi elektrokimia
• digabungkan dengan MS (LC-MS)