17- transformacija

Question 1

kaj je transformacija

Answer 1

je sprejem in vključitev proste DNA iz okolja v celico. donorski sev razpade, ker se njegova DNA sprosti v okolje. recipientski sev mora biti kompetenten in ko sprejme DNA postane transformanta.

Question 2

obliki trasformacije

Answer 2

naravna
umetna

Question 3

naravna transformacija

Answer 3

• večina bakterij ni sposobna
• sposobne: bacilus, helicobacter, streptococcus
• lahko sprejmejo v določenih pogojih. ko so sposobne sprejeti DNA pravimo da so kompetentne
• razlikuje se med G- in G+ zaradi sestave celične stene

Question 4

G+ faze transformacije

Answer 4

1. vezava dsDNA na zunanjo površino celice
2. razgradnja ene verige DNA
3. prenos ssDNA skozi celično steno in celično membrano
4. vključitev prenesene DNA v genom recipienta s homologno rekombinacijo

Question 5

transformacija B. subtilis

Answer 5

imamo comEA, ki je receptor za dsDNA na celični površini. ComG sestavlja pseudopil. ko gre dsDNA skozi pil se razgradi na ssDNA s pomočjo NucA endonukleaze. ComEC tvorijo kanal skozi katerega gre ssDNA v citoplazmo, kjer se dodajo še SSB proteini. skozi kanal ssDNA vleče comFA.

Question 6

faze transformcije pri G+-

Answer 6

1. vezava dsDNA na zunanjo membrano
2. prenos dsDNA skozi zunanjo membrano in steno
3. razgradnja ene verige
4. prenos ssDNA skozi citoplazmatsko membrano v citoplazmo
5. vključitev prenesene DNA v genom

ločimo 3 različne sisteme

Question 7

katere sisteme poznamo pri G-

Answer 7

1. temelječi na sekrecijskemu sistemu tipa ll
2. temelječi na sekrecijskemu sistemu tipa lV
3. temelječi na transformasomih

Question 8

transformacija N. gonorrhoeae

Answer 8

SST2

pilQ (sekretin - hidrofilni vodni kanal) tvori poro skozi katero potuje dsDNA čez zunanjo membrano do peptidoglikana. tam je psevdopil, ki ga tvori pilE in DNA vezavni protein comE. prevdopil se krajša in na ta način vleče dsDNA. ena veriga se razgradi in potuje skozi poro v citoplazemski membrani - comA. ssDNA vleče pilT skozi comA poro. potreben ATP.

Question 9

transformacija H. influenzae

Answer 9

membranski receptor veže DNA. dsDNA vstopi v transformasom (, kjer se preoblikuje v ssDNA, ki nato vstopi v citoplazmo. ssDNA se s homologno rekombinacijo vključi v kromosom

Question 10

transformacija H. pylori

Answer 10

SST4
v zunanji membrani imamo proteine B2, B7 in B9, ki tvorijo kanal. sklepajo da je prisotna tudi translokaza. potem imamo na citoplazemski membrani drugi kanal iz comEC kjer se pretvori v ssDNA.

Question 11

kako proučujemo transformacijo

Answer 11

tako da radioaktivno/fluorescenčno označimo DNA , pustimo da poteče transformacija. dodamo DNAze da razgradijo DNA ki ni v celici. Filtriramo celice in izmerimo radioaktivnost.

Question 12

pomen transformacije

Answer 12

prehrana
rekombinacija
popravljanje DNA

Question 13

kako umetno pripravimo kompetentne celice

Answer 13

s CaCl2 in nizko temperaturo.
led - zmanjšamo fluidnost membrane
CaCl2: nevtralizirajo negativne naboje na površini celice

elektorporacija: vnos DNA s pomočjo električnega sunka

Question 14

transformacija protoplastov

Answer 14

odstranimo peptidoglikanski sloj

izoosmotsko okolje je potrebno

Question 15

transfekcija

Answer 15

transformacija s prosto virusno DNA

Question 16

načini transformacije

Answer 16

elektroporacija
genski pištol
mikroinjiciranje: brizga
nanovezikli