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Biomol 🧬 > DNA recombinante > Flashcards

DNA recombinante Flashcards

1
Q

cuáles son las 6 etapas para realizar un DNA recombinante

A
  1. localizar gen
  2. aislar gen con enzimas que cortan
  3. insertar gen en otro segmento
  4. introducir DNA recombinado en célula huésped
  5. confirmar que célula huésped tiene propiedades del DNA recombindado
  6. clonar gen (células se multiplican
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2
Q

qué es el plásmido

A

DNA que le da características a una bacteria, mas no es escencial

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3
Q

qué es un DNA recombinante

A

una secuencia de DNA derivada de más de una fuente

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4
Q

cuáles son las enzimas de restricción utilizadas para el DNA recombinante

A

Pst 1
EcoR 1
Hind III

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5
Q

las bacterias usan las endonucleasas de restricción como un

A

mecanismo de defensa frente a la entrada de ADN foráneo

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6
Q

qué hacen las enzimas de restricción en las bacterias

A
  • degradan DNA extraño (el propio no)
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7
Q

cuando el bacteriófago (DNA) entra a una bacteria, esta se

A

contagia del virus, se rompe y contagia a más bacterias

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8
Q

las enzimas de restricción corta DNA del bacteriófago y lo

A

guardan como memoria para atacar a la próxima

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9
Q

a qué corresponde la primera, segunda y tercera palabra de la nomenclatura de enzimas de restricción

A
  1. género de bacteria
    2 y 3. nombre de especie
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10
Q

en la nomenclatura de enzimas de restricción se agregan letras o números de acuerdo a la

A

cepa o serotipo

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11
Q

en la nomenclatura de enzimas de restricción se agregan números romanos de acuerdo a la

A

cronología en que se aislaron

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12
Q

qué hacen las endonucleasas

A

degradan DNA extraño, reconocen una secuencia y cortan ADN

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13
Q

qué hacen las enzimas del sistema de modificación

A

metilan residuos de adenina o citosina para que el ADN se vuelva inmune y no sea degradado

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14
Q

endonucleasa de restricción I

A

sitio de corte es 1000 pares de bases río abajo o arriba de la base buscada

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15
Q

endonucleasa de restricción II

A

secuencias palindrómicas

sitio de reconocimiento es igua al sitio de corte

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16
Q

endonucleasa de restricción III

A

corte lejos de la secuencia de reconocimiento (20-30 pb)

corte asimétrico

río arriba o abajo

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17
Q

endonucleasa de restricción IV

A

reconoce DNA metilado

18
Q

secuencias que se leen de ambos lados

A

palindrómicas

19
Q

características de cortes cohesivos

A

cortes en diferente posición
3 a 5 nt de diferencia
pares de bases libres

20
Q

características de cortes romos

A

cortes simétricos de ambas cadenas
no hay pares de bases libres

21
Q

el DNA recombinante se trata con una enzima de restricción que genera cortes

A

cohesivos

22
Q

los fragmentos generados por la misma enzima de restricción son

A

complementarios

23
Q

los fragmentos de DNA recombinante se unen por

A

ligasas

24
Q

molécula dsDNA con capacidad de albergar un fragmento de DNA exógeno

A

VECTOR

25
Q

en qué consiste la clonación de un vector

A

en que se replica la bacteria con el nuevo código genético (ADN)

26
Q

en que consiste la expresión del vector

A

en producir un transcrito o proteína de los plásmidos o bacteriófagos

27
Q

la clonación cuenta con (3)

A

origen de replicación
sitio múltiple de clonación (secuencias palindrómicas para enzimas de restricción)
marcadores de seleción

27
Q
A
28
Q

la expresión cuenta con (6)

A

origen de replicación
sitio múltiple de clonación
marcador de selección
promotor
IRES (unión ribosomas)
secuencia de poliA

29
Q

el plásmido cuenta con

A

origen de replicación
gen de resistencia antibiótica
región de DNA exógeno

30
Q

dsDNA
circular
separado del DNA cromosómico
está en bacterias/levaduras

A

plásmido

31
Q

virus que infecta bacterias

A

bacteriófago

32
Q

vectores híbridos

A

cósmidos

33
Q

los cósmidos cuentan con (2)

A

plásmidos
bacteriófagos

34
Q

qué es un fagémido

A

plásmido al que se le incorpora el origen de replicación de un fago
no tiene sitios cos

35
Q

ejemplos de cromosomas artificiales

A

BAC (bacterias)
YAC (levaduras)

36
Q
  1. preparación del inserto que se va a clonar
A

se utilizan enzimas de restricción

37
Q
  1. preparación del vector
A

enzimas de restricción
desfosforilación del vector
purificación plásmido

38
Q
  1. ligación del inserto y el vector
A

ligasa

39
Q
  1. preparación de células competentes
A

permeabilidad de membrana para aceptar vector

glicerol 10%
CaCl2

40
Q
  1. transformación celular
A

adquisición de gen exógeno

nuevo genotipo de célula

41
Q
  1. identificación de las colonias celulares con el vector recombinante
A

(todos estos son los pasos de clonación)
:)

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