4 (vektörler)

Question 1

T7 ve SP6 promotorları nedir?

Answer 1

RNA üretimi için önemlidirler. T7 ve SP6 bakteriyofajlarının RNA polimerazları tarafından tanınırlar.
pGEM vektöründe bulunurlar.

Question 1

En son jenerasyon pGEM klonlama vektörünün özellikleri?

Answer 1

1. pUC’ye benzer özellikler
2. f1 ori (ssDNA çoğalmasını sağlar)
3. T7 ve SP6 promotorları. RNA üretimini sağlar.

Question 2

Phagemid nedir?

Answer 2

Hem bakteriyofaj gibi ssDNA üretebilen hem de plazmit gibi çoğalabilen klonlama vektörü.
Plazmit orijini, faj orijini ve seçim markerı bulunur.

Question 3

Phagemidlerin klonlama ve dizileme çalışmalarında önemi nedir?

Answer 3

ssDNA formu, bazı klonlama ve dizi analizlerinde daha stabil veya daha kullanışlı olabilir. Phagemidler bu tür çalışmalarda ssDNA sağlamada faydalıdır.

Question 4

pGEM ile üretilen RNA ne için kullanılabilir?

Answer 4

hibritleme probu olarak kullanılabilir
RNA işlenmesi (intronların uzaklaştırılması) çalışmalarında kullanılabilir.
Protein sentezi deneylerinde vb..

Question 5

Lambda fajını kullanarak DNA klonlaması yapma aşamaları?

Answer 5

1. faj DNA’sı ayrıştırılır.
2. EcoRI gibi resti. enzimi ile kesilerek sol kol, sağ kol ve vazgeçilebilir orta bölüm olarak 3 bölüm oluşturulur.
3. Sol ve sağ kollar izole edilir,kollar EcoRI ile kesilmiş başka kaynaktan gelen DNA ile karıştırılır.
4. DNA ligaz katılır.
5. Rekombinant lambda vektörleri fajın protein kafası içine paketlenir.
6. Bakteri içinde vektörler çoğalır.

Question 6

Kozmit vektör? ve ne içerir?

Answer 6

lambda kromozomu+ plazmitin bir kısmı
bakteriyel ori, bir cos bölgesi, ampsilin direnç geni, 4 klonlama bölgesi.

Question 7

cos dizisi nedir?

Answer 7

lambda fajına özgü bir DNA dizisidir. kozmit vektörlerde de bulunur. Yabancı DNA taşıyan kozmitin, lambda fajının viral protein kılıfı (capsid) içerisine paketlenmesini sağlar.

Question 8

Kozmid vektörlere örnek ver.

Answer 8

pJB8

Question 9

Shuttle vektörlerin en önemli özelliği nedir?

Answer 9

Vektörün iki alıcı hücresi bulunmasıdır. Bir hücrede (bakteride) sayısal olarak çoğalırken diğer hücrede (mayada) klonladığımız genin ifadesi gerçekleşir.

Question 10

Shuttle vektör örnrği?

Answer 10

YEp24 plazmiti

Question 11

BAC kullanım amacı

Answer 11

Karmaşık yapılı ökaryotik genomların analizi ve haritalanması için gerekli vektörler çok büyük DNA parçalarını taşıyabilmeli. BAC da bu görevi görür.
(Bazı insan genlerinin uzunluğu 1000-2000 kb)

Question 12

BAC nasıl oluşturulur?

Answer 12

Bakterilerin üreme plazmiti ile.

Question 13

Maya yapay kromozomları (YAC) yı diğer vektörlerden ayıran özellik?

Answer 13

Çok büyük miktarlarda DNA klonlamasına olanak tanır.
100.000-1.000.000 kb arası

Question 14

YAC nerde kullanılmaktadır?

Answer 14

İnsan genom projesinde, insan kromozomlarının fiziksel hairtasının çıkarılmasında.

Question 15

YAC vektörünün içeriği?

Answer 15

CEN
ORI
ARS
TEL
MARKERLAR (SUP4, URA3, TRP 1

Question 16

CEN dizisi nedir?

Answer 16

Sentromer dizileridir. Hücre bölünmesi sırasında vektörün kardeş hücrelere ayrılmasını sağlar.

Question 17

ARS?

Answer 17

Otonom olarak çoğalmayı sağlayan gen dizileridir.

Question 18

TEL?

Answer 18

Telomeraz bölgeleridir. Lineer hale getirilmiş yapının stabilitesini sağlar. NÜkleazlar tarafından kesilmesini engeller.

Question 19

YAC’da bulunan üç marker?

Answer 19

SUP4: bu marker Smal’ın kesme noktasını içerir. Böylece yapının kesilip lineer hale getirilip getirlmediğini kontrol eder. Yapı lineer hale gelmişse bu gen işgörmez hale gelmiştir.
URA3 ve TRP1: Eğer yapı kesilmiş ise iki kola ayrılmış demektir. Bu marketlar yapının sağ ve sol kolunu belirler. URA3 sağ kolda TRP1 sol kolda.