Cours 2

Question 1

Expliquez le principe de demi-vie pour les atomes radioactifs.

Answer 1

La moitié des atomes radioactifs sont désintégrés durant la période de temps correspondant à la demi-vie.

Question 2

Quelle est la demi vie du 32P?

Answer 2

14 jours

Question 3

Comment peut-on incorporer le 35S à l’ADN?

Answer 3

Comme il n’y a pas de S dans l’ADN, on doit modifier les nucléotides pour pouvoir incorporer ce radioisotope. On utilise des dérivés du phosphorothiate, où un oxygène est remplacé par un atome de 35S.

Question 4

Nommez 2 avantages de l’utilisation du 35S par rapport au 32P dans la détection de l’ADN

Answer 4

1- Plus longue demi-vie (88 jours vs 14)

2- Plus faible énergie d’émission, ce qui donne des bandes plus précises et moins floues sur le gel

Question 5

Si on veut mesurer la radioactivité d’un échantillon placé sur gel, quelle technique devons nous utiliser pour détecter la bande?

Answer 5

Autoradiographie

Question 6

Si on veut mesurer la radioactivité d’un échantillon en liquide ou sur papier filtre, quelle technique devons nous utiliser?

Answer 6

Comptage à scintillation

Question 7

Expliquez en bref le principe du comptage à scintillation.

Answer 7

Utilisation d’un produit chimique nommé scintillant, qui émet des pulses de lumières lorsqu’un électron de haute énergie est relâché par l’isotope radioactif dans l’ADN. Les pulses de lumières sont détectés par une cellule photo-électrique.

Question 8

Donnez un exemple d’application du comptage à scintillation

Answer 8

Mesure du taux de réplication d’une souche bactérienne, qui représente en même temps une mesure de la viabilité.

Question 9

Expliquez le principe en bref de l’autoradiographie.

Answer 9

Émission de béta particules qui font noircir un film photographique.

Question 10

Expliquez le principe de fluorescence

Answer 10

La fluorescence survient lorsque qu’une molécule absorbe la lumière d’une longueur d’onde particulière et émet de la lumière de plus faible énergie d’une longueur d’onde plus longue.

Question 11

Nommez 2 choses qu’on a besoin pour la détection de la fluorescence.

Answer 11

Un faisceau lumineux pour exciter le colorant, et un photodétecteur pour détecter l’émission de la fluorescence.

Question 12

Vrai ou faux. La biotine et la digoxigénine sont des colorants fluorescents.

Answer 12

Faux.

Question 13

L’analogue de la thymine (EdU) est utiliisé à quel fin dans la détection de l’ADN?

Answer 13

On peut voir directement l’ADN en réplication

Question 14

Qu’est ce qu’un ADN hybride?

Answer 14

2 sb apparentés qui se sont mis ensemble lors de l’appariement. Peuvent provenir de deux molécules d’ADN différentes.

Question 15

Quelle technique doit-on utiliser pour détecter une séquence d’ADN dans la cellule.

Answer 15

FISH : hybridation fluorescente in situ

Question 16

Comment se fait la détection en 2 étapes de l’ADN grâce à la biotine?

Answer 16

1- Liaison de l’avidine à la biotine. L’avidine est conjuguée avec une enzyme appelée alkaline phosphase, qui peut couper des liens P à des molécules diverses
2- Des substrats comme X Phos ou Lumi-phos sont ajoutés. L’alkaline phosphatase enlève les P de ces substrats. Le X phos réagit avec l’oxygène, et forme un colorant bleu, alors que lumi-phos produit de la lumière lorsque débarassé de son groupement P

Question 17

Un analogue de la thymine est utilisé pour marquer l’ADN en réplication. Comment se nomme-t-il?

Answer 17

EdU

Question 18

Vrai ou faux. On peut visualiser la réplication dans la cellule grâce à un anticorps qui reconnait BrdU.

Answer 18

Faux, l’anti-corps est beaucoup trop gros pour accéder à l’ADN double-brin.

Question 19

Qui aura la température de fusion la plus élevée? Une séquence G-C riche, ou une séquence A-T riche?

Answer 19

Une séquence G-C riche

Question 20

Vrai ou faux. Dans les brins d’ADN hybrides, il est possible que des bases ne soient pas complémentaires.

Answer 20

Vrai. Quand il y a appariement, si deux brins d’ADN qui se ressemblent mais ne sont pas identiques se mettent ensemble, il y aura nécessairement certaines séquences qui diffèrent.

Question 21

Vrai ou faux. On peut utiliser les techniques d’hybridation pour des applications en clonage.

Answer 21

Vrai.

Question 22

Quelle est l’utilité d’une sonde lors d’expérience d’hybridations?

Answer 22

Comme la sonde est marquée radioactivement ou avec de la fluorescence, elle sert à repérer des régions/séquences semblable dans un échantillon expérimental.

Question 23

Comment fonctionne l’hybridation de type Southern?

Answer 23

1-L’ADN complet de l’espèce dont on veut vérifier une séquence est digéré par un enzyme de restriction, et les fragments générés sont séparés par électrophorèse sur gel.
2-Les fragments sont ensuite séparés, en trempant le gel dans une solution d’hydroxide de sodium.
3- L’ADN est ensuite transféré par buvardage sur une membrane de nylon.
4- La membrane de nylon est trempée dans une solution contenant la sonde ADN marquée, et va se fixer solidement aux régions avec une forte homologie.
5- Un papier photographique va ensuite nous permettre de visualiser les bandes correspondantes (autoradiographie)

Question 24

Vrai ou faux. La technique FISH permet de localiser un gène d’intérêt sur le chromosome.

Answer 24

Vrai.