Analise De Enterobacteriaceae, Coliformes Totais E Termotolerantes

Question 1

Qual é o princípio desse método( Análise de enterobacteriacea)

Answer 1

Plaqueamento em profundidade com sobrecamada de modo a realizar a contagem Pedrão em placas com meio VRBG.

Question 2

Quais são as características do meio VRBG(Ágar vermelho; Violeta; Bile, Glicose)??

Answer 2

-Agar líquido

-Seletivos: Cristal de violeta e sais biliares

-Diferenciais: Glicose+ Vermelho neutro e sais biliares.

Question 3

Onde se aplica esse método?

Answer 3

Aplica-se em amostras de matérias-primas e de alimentos em geral, inclusive em águas

Question 4

Desmistifique a família das enterobacteriacea?

Answer 4

1-Enterobacteriacea
1.1- Coliformes totais
1.1.1-Coliformes termotolerantes
1.1.1.1- Ecoli

Question 5

Descreva a análise das enterobacteriacea e quais as características da colônia?

Answer 5

1-Inocularar 1ml das diluições nas placas esterilizada vazia

2- Adicionar Agar VRBG, homegeinizar e deixar endurecer

3- Adicionar uma subcamada e encubar invertido a 35°C/48h

4- Observar o surgimento de colônias vermelhas púrpuras e com Halo de precipitação de sais bilhares

Question 6

Em que método se baseia a análise coliformes[Totais, termotolerantes Ecoli]?

Answer 6

Baseia-se no método do número mais provável

Question 7

Descreva como é feito o teste presuntivo de coliformes?

Answer 7

1- Retira-se apartir de cada diluição 3 alicotas (9 no total) de 1ml e verte-se em tubos contendo Caldo Lauril Sulfato Triptose

2-Incuba-se por (24-48)h a 35°C

3-Observar o crescimento(turvação) e produção de gás devido a fermentação da lactose, mostrando suspeita de coliformes.

Question 8

Qual é a confirmação que se deve fazer a seguir após a suspeita de coliforme?

Answer 8

Deve-se prosseguir com o Teste confirmativo para coliformes totais e termotolerantes

Question 9

Descreva o procedimento ( totais e termotolerantes)?

Answer 9

Totais:
1-As amostras dos tubos suspeitos(LST+) são transferidos para caldo Verde brilhante, 1 alçada.

2-incuba-se por (24-48)h por 35°C

3- O crescimento e produção de gás indicará a presença de C.totais.

Question 10

Descreva o procedimento ( Coliformes termotolerantes)?

Answer 10

1-As amostras dos tubos suspeitos(LST+) são transferidos para Caldo Ecoli, 1 alçada.

2-Incubar por (24-48)h a 45,5°C

3- Observação de crescimento e produção de gás confirmará a presença de coliformes Termotolerantes.

Question 11

O que diferencia a análise da E. Coli dos outros(Termotolerantes)?

Answer 11

-Características de crescimento no Agar EAM (Eosina azul de metilo)
- Pelos testes:
*Indol
*Vermelho de metila
*Voges Proskauer
*Citrato( IMViC).

Question 12

Como se faz o teste presuntivos de E. Coli?

Answer 12

1-Após a confirmação de suspeita de termotolerantes em caldo EC deve-se fazer o esgotamento da alça da amostra em Agar EAM.

2-Verificar-se-á para colônias típicas :
*Borda irregulares
*Brilho verde metálico ou sem
*Centro preto.

Question 13

Qual é a via fermentativa típica da E.coli em meio VMVP?

Answer 13

Via ácida

Question 14

Qual carboidrato é fermentado no Agar VRBG?

Answer 14

Glicose

Question 15

Qual composto precipita o redor das colônias típicas em meio VRBG?

Answer 15

Sais bilhares

Question 16

Descreve a prova bioquímica com:”Citrato “?

Answer 16

1-Transferir inoculo da cultura para a rampa dos tubos inclinados de citrato de Simmons;

2-Incubar a 35°C por 48h;

3- Caso haja mudança de cor de verde para azul é positivo e caso não haver é negativo( confirma a presença de E.Coli).

Obs: A enzima citraza não reage

Question 17

“INDOL”

Answer 17

1-Transferir inoculo da cultura e encubar a 35°C por 24h

2- Em seguida adicionar 5 gotas de reagente de kovacs a cada 4,0ml de cultura.

3 -Observar o desenvolvimento de um anel vermelho- violeta na superfície do meio de cultura ( Teste positivo) confirmando Cepas típicas de E.coli

*Anel permanece na cor amarela do reagente ( Teste negativo) confirmando cepas atípicas de E.coli.

Question 18

Qual é o nome do teste que investiga a presença da enzima triptofanase?

Answer 18

Indol

Question 19

“VM VP”

Answer 19

1-Transferir o inoculo e incubar a 35-37°C por 48h

2-Transferir 1 ml da cultura para um tubo de ensaio e adicionar: 0,6ml de alfa naftol 5% e agitar. Adicionar em seguida 0,2ml de KHO 40% e agitar.

3- Observar por até 1h o desenvolvimento de uma cor vermelha ou rósea no meio de cultura ( teste positivo)

Permanência da cor(amarela) é negativo e confirma a presença de E. Coli

Question 20

3-VM-VP

Answer 20

3- Observar por até 1h o desenvolvimento de uma cor vermelha ou rósea no meio de cultura ( teste positivo)

Permanência da cor(amarela) é negativo e confirma a presença de E. Coli

Question 21

4- VM-VP

Answer 21

-Reincubar a cultura remanescente no caldo VM-VP por mais 24h adicionais e realizar o Teste VM adicionando +- 5 gotas da solução de vermelho de metila.

-Se o meio adquirir uma coloração vermelha (+) {confirmando a presença de Cepas E.coli} ou amarela (-)