Anticorpos Monoclonais

Question 1

Em que ano foi criada a tecnologia do anticorpo monoclonal ?

Answer 1

1975

Question 2

O que são anticorpos monoclonais ?

Answer 2

São anticorpos sintetizados por uma população de células idênticas (clone) crescidas em um meio de cultura celular. Todos eles reconhecem a mesma parte específica da proteína antigênica que induziu sua formação

Question 3

Em que consiste a produção dos anticorpos monoclonais ?

Answer 3

Consiste na obtenção de imunoglobulinas secretadas por células híbridas, derivadas de um único clone específico denominado hibridoma, a partir de prévia imunização de camundongos com o antígeno específico

Question 4

O que é hibridoma ?

Answer 4

É a fusão entre um linfócito B com uma célula mielóide. Assim sendo, um
clone da célula que sofreu a fusão.

Question 5

Qual substância é usada na etapa de fusão ?

Answer 5

Polietilenoglicol (PEG)

Question 6

Os anticorpos monoclonais reconhecem UM sítio antigênico do bioquímico injetado.

Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?

Answer 6

Verdadeira

Question 7

Quais são as etapas para a produção de anticorpos monoclonais ?

Answer 7

1. Inoculação do antígeno específico
2. Remoção do baço do camundongo contendo linfócitos B produtores de Ac (plasmócitos)
3. Fusão dos linfócitos B e células tumorais (Mieloma)
4. Produção de hibridomas
5. Seleção de clones produtores de mAc

Question 8

Qual o uso dos anticorpos monoclonais ?

Answer 8

1. Diagnóstico
2. Terapia
3. Imunosupressão
4. Imunoprofilaxia
5. Tipificação de Leucemias e Linfomas
6. Purificação de material biológico

Question 9

Quais os tipos de inoculação ?

Answer 9

Inoculação via subcutâneo (SC)
Inoculação via intraperitoneal (IP)
Inoculação via intravenosa (IV)

Question 10

Qual a substância indutora de mieloma ?

Answer 10

Pristane

Question 11

As células tumurais (mieloma) são deficientes na produção da enzima HGPRT (enzima envolvida na produção de purinas e pirimidinas).

Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?

Answer 11

Verdadeira

Question 12

As células tumurais (mieloma) possuem sensibilidade ao meio devido a presença de quais substâncias ?

Answer 12

Hipoxantina, Aminopterina e Timidina (HAT)

Question 13

Sobre a preparação de cultura de macrófagos peritonais responda: o que são e para que serve ?

Answer 13

São células preparadas de 1-2 dias antes da fusão e tem como função alimentar o suporte da cultura de hibridoma. Elas realizam:
1. Remoção de debris (vestígios) celulares
2. Desintoxicar o meio
3. Fornece fatores de crescimento

Question 14

Quais são as etapas da fusão ?

Answer 14

1. Coleta do baço linfócito B (plasmócitos)
2. Mistura dos plasmócitos com células de mieloma
3. Adição de Polietilenoglicol (PEG)
4. Produção de células híbridas e não híbridas

Question 15

Qual enzima e quais proteínas as células de mieloma utilizadas na produção de anticorpos monoclonais, não expressam ?

Answer 15

Não expressam a enzima HGPRT e nem imunoglobulinas

Question 16

As células de mieloma fornecem as enzimas necessárias para o crescimento num meio seletivo e os linfócitos B cedem propriedades de crescimento imortal.

Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?

Answer 16

Falsa. São os linfócitos B quem fornecem as enzimas necessárias para o crescimento num meio seletivo e as células de mieloma quem cedem as propriedades de crescimento imortal

Question 17

Todas as células de mieloma que não consigam fundir e as que fundem com outras células de mieloma não vão crescer no meio seletivo, devido a ausência de qual enzima ?

Answer 17

A enzima: HGPRT

(Hipoxantina fosforribosil transferase)

Question 18

Como é feito a obtenção do hibridoma ?

Answer 18

É feita através da fusão do linfócito B, proveniente do baço do ratinho de laboratório e previamente imunizado com o antigeno alvo, com uma célula de mieloma, selecionada pela ausência da produção ou secreção de anticorpos e falta da enzima HGPRT

Question 19

Qual a função da aminopterina ?

Answer 19

Bloquear a principal via de síntese das purinas e pirimidinas

Question 20

Qual a função da hipoxantina e timidina ?

Answer 20

Podem ser utilizadas para a produção de nucleotídeos na presença da enzima HGPRT

(Hipoxantina fosforil transferase)

Question 21

Com relação a expansão temos:

1. Em camundongo (concentração maior 5mg/ml mAb)
2. Em in vitro concentração menor 10ug/ml mAb)

Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?

Answer 21

Verdadeira. Em camundongos a concentração precisa ser maior.

E em in vitro menor (Material in vitro é menos concentração e contém soro bovino)

Question 22

O que é ascite ?

Answer 22

É o acúmulo de líquido na cavidade peritoneal, rico em anticorpo monoclonal

Question 23

O que é Cromatografia de afinidade ?

Answer 23

É um método utilizado para purificação de macromoléculas. As misturas bioquímicas tem naturalmente diferenças estruturais que favorecem uma interação altamente específica entre antígeno e anticorpo, enzima e substrato, ou receptor e ligante.

É o método mais específico (quando a quantidade de ligante ou
antígeno não é limitante)

Question 24

O que faz a precipitação diferencial com sulfato de Amônio ?

Answer 24

Separa o anticorpo de albumina e outras proteínas encontradas do meio de cultura ou soro

Question 25

Quais os principais métodos utilizados no diagnósticos com anticorpos monoclonais

Answer 25

1. IFA (imunofluorescência) marcados com fluoróforos FLUORESCÊNCIA (Adição de um “anticorpo secundário”
   São bons e muito rápidos)
2. IPX - enzima peroxidase COLORIMÉTRICO (imunoperoxidase) mudar a cor
3. ELISA (imunoenzimático) a solução mudar de cor - laranja, vermelho, azul.
   COLORIMÉTRICO(Detectar tanto a presença de antígeno (já teve contato com patógeno), como de anticorpo. Teste de antígeno e teste de antisoro)
4. RIP (radioimunoensaio) RADIOATIVIDADE
5. WB (Western Blot) COLORIMÉTRICO

Question 26

Como é feita a purificação de material biológico ?

Answer 26

• Através da cromatografia de afinidade
• Identificação de leucócitos
• Determinação de linhagens linfocitárias
• Enzimas, hormônios, receptores celulares