Anticuerpos (ELISA y citometria) Flashcards
(18 cards)
Que es un anticuerpo?
Proteina que identifica molecuals
Estructura de un anticuerpo
Tiene 2 cadenas: una pesada (constante y variable) y ligera
ELISA
Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
Cada paso se lava para evitar falsos positivos
ELISA directo
El más rápido
Antígeno + anticuerpo + enzima
ELISA indirecto
Sin errores
Antígeno + anticuerpo + anticuerpo secundario + enzima
Que enzima se usa en la ELISA?
Peroxidasa
ELISA tipo sandwich directo e indirecto
Deteccion y cuantificacion de Ag
Directo: Anticuerpo de captura + antígeno + anticuerpo + enzima
Indirecto: Anticuerpo de captura + antígeno + anticuerpo + anticuerpo secundario + enzima
Para que se usa la citometría de flujo?
Identifica, cuantifica y clasifica las células individuales en una muestra
Identifica proteínas en membrana celular
Con que se cuantifican las células?
Los clusters de diferenciación (CD), son específicas para cada linaje celular
Preparación para una citometria de flujo
En una suspensión de células individuales se incuban con anticuerpos fluorescentes que reconocen antígenos específicos. Pasa por el citómetro que tiene un láser que detecta los anticuerpos. En una máquina se registra la intensidad de la fluorescencia, tamaño y granularidad
Para que se usa la citometría?
Diagnóstico de leucemias:
Mieloide CD33, 14 y 15
Linfoide CD3, 79, 22, 19, 10, TRC
Southern Blot
Para detectar una secuencias de DNA específica en sangre o tejido
Busca mutaciones de DNA, identifica presencia por complementación
Northern Blot
Para secuencias de RNA
Western Blot
Identificar proteínas específicas
Será más exacta que la ELISA
Técnica de Southern Blot
Aísla el ADN, pasa por enzimas de restricción, se desnaturaliza al separar sus hebras, se pasa por un filtro de nitrocelulosa y al último en la hibridación se expone a una sonda
Microarreglos
Se utiliza para analizar simultáneamente la expresión de múltiples genes o detectar variaciones genéticas
Se interpretan patrones de expresión génica
Proceso de microarreglos
Se extrae la muestra, se usa una transcriptasa reversa para hacer DNA, se pone colorantes fluorescentes, se pondrá en un chip para hibridación, se lava y se escanea con un láser
Que se usa para saber si un paciente con cancer tiene metástasis o si esta creciendo su tumor por medio de los genes
Microarreglos
