Biologie moléculaire 2 (PCR) Flashcards
(52 cards)
Que veut dire PCR?
Acronyme pour polymerase chain reaction (réaction de polymérase en chaine)
À quoi sert la PCR?
Méthode qui permet de choisir un segment particulier dans un génome et d’amplifier cette séquence cible pour en obtenir des millions de copies
Comment nomme-t-on le segment d’ADN qu’on désire amplifier lors d’une PCR?
Séquence cible
Quel est le nom du chercheur qui a inventé la PCR?
Kary Mullis
Vrai ou Faux: la PCR utilise des caractéristiques de la double hélice de l’ADN
Vrai
Est-il possible pour les 2 brins d’ADN de se réassocier entre eux après une dénaturation? Si oui, comment?
Oui, si la température redescend ils peuvent se réassocier entre eux
Vrai ou Faux: les petits fragments d’ADN ont plus de facilité à se réapparier
Vrai
Décrire l’ADN polymérase en 3 points
1- enzyme qui catalyse la synthèse d’un brin complémentaire à partir d’un ADN gabarit
2- présente chez tous les eucaryotes et procaryotes
3- essentielle à la réplication de l’ADN
Vrai ou Faux: la synthèse d’ADN par l’ADN polymérase se fait TOUJOURS dans le sens 3’ vers 5’
Faux, c’est toujours dans le sens 5’ vers 3’
Qu’est-ce qu’une amorce?
Courte séquence d’ADN qui sert de point de départ pour la synthèse d’ADN
Quelles sont les étapes d’une réaction PCR?
1) dénaturation = les 2 brins sont séparés par haute T° (95°C durant 30 à 60 secondes)
2) hydratation des amorces = T° redescend, les amorces se reapparient (30 à 60 secondes)
3) élongation = l’ADN polymérase utilise la complémentarité des bases pour allonger une amorce appariée au brin gabarit (72°C )
ET
étape de polissage à la fin pour s’assurer que tous les brins synthétisés sont bels et biens complétés
Vrai ou Faux: lors de l’hydratation des amorces, la température d’appariement dépend de la Tm des amorces
Vrai
Vrai ou Faux: lors de l’élongation lors de la PCR, la durée de cette étape dépend de la longueur de la séquence cible
Vrai,
c’est 1kb/min lorsqu’on utilise la Taq polymérase
Quelle est l’utilité d’un thermocycleur?
Il produit les changements de température à chaque cycle lors d’une réaction PCR
Que contient une réaction PCR?
- ADN polymérase thermostable
- tampon
- dNTPs
- amorces forward et reverse
- ADN gabarit
- eau
À quoi sert le tampon dans une réaction PCR?
- il permet de maintenir les conditions optimales de l’enzyme
ex: pH et concentration des sels
Qu’est-ce que des dNTPs?
C’est un mélange de 4 nucléotides
(A-T et C-G)
Ce sont des blocs de construction pour l’ADN polymérase
À quoi servent les amorces forward et reverse lors d’une réaction PCR?
Ces 2 amorces vont se lier spécifiquement aux extrémités de la région à amplifier
Que contient l’ADN gabarit?
ADN contenant la séquence à amplifier
Vrai ou Faux: c’est la découverte des ADN polymérase thermostable qui a permis de faire plusieurs cycles sans ajout d’enzyme lors d’une réaction PCR
Vrai,
En plus, cela limite les chances de contamination et cela facilite la manipulation
Décrire l’ADN polymérase Taq en 3 points
1- est isolée à partir de la bactérie thermophile Thermus aquaticus
2- température pour son activité optimale = 72°C
3- résiste aux températures élevées (95°C)
Vrai ou Faux: la polymérase Taq permet de générer des fragments d’ADN ne dépassant pas généralement 4kb
Vrai
Comment se nomme l’ADN amplifié par PCR
amplicon
Vrai ou Faux: la position des amorces délimite la région qui sera amplifiée
Vrai
