Électrophorèse des protéines

Question 1

Définir: électrophorèse des protéines

Answer 1

Méthode utilisée en laboratoire pour analyser la pureté d’une solution protéique ou de déterminer la masse moléculaire et le pI d’une protéine

Question 2

Qu’est-ce que le principe d’électrophorèse?

Answer 2

Ensemble de méthodes permettant de séparer les composantes d’un mélange selon leur vitesse de migration dans un champ électrique

Question 3

Vrai ou Faux: la charge électrique, la forme et la masse moléculaire influencent la migration d’une molécule

Answer 3

Vrai

Question 4

Vrai ou Faux: dans une électrophorèse, pour une même charge, les grosses molécules vont migrer plus rapidement

Answer 4

Faux, les grosses vont ressentir plus de résistance.

C’est les petites molécules qui vont traverser le gel plus rapidement

Question 5

Quels sont les 3 types d’électrophorèse des protéines?

Answer 5

SDS
SDS-PAGE
IEF

Question 6

Comment se nomme l’électrophorèse sur gel d’acrylamide en condition natives?

Answer 6

PAGE

Question 7

Décrire l’électrophorèse SDS-PAGE

Answer 7

Électrophorèse sur gel d’acrylamide en condition dénaturantes

Question 8

Qu’est-ce que le IEF?

Answer 8

Focalisation isoélectrique

Question 9

De quoi est composé le gel de polyacrylamide?

Answer 9

c’est un mélange d’acrylamide et de bis-acrylamide

Question 10

Qu’est-ce que le bis acrylamide?

Answer 10

• il agit comme agent réducteur et permet la polymérisation de l’acrylamide en polyacrylamide
• gel inerte et non chargé
• utilisé pour analyser la migration des acides nucléiques de petites tailles et des protéines

Question 11

Vrai ou Faux : l’acrylamide seul forme de longues chaines sans lien entre elles

Answer 11

Vrai (polymérisation)

Question 12

Qu’est-ce que la polymérisation avec un agent réducteur?

Answer 12

En ajoutant un agent dénaturant, il y a une copolymérisation des chaines d’acrylamide. Un réseau de pores se forme

Question 13

De quoi avons-nous besoin pour la polymérisation?

Answer 13

De radicaux libres

Question 14

À quoi servent les radicaux libres?

Answer 14

Ils sont nécessaires à la polymérisation

Question 15

Vrai ou Faux: les radicaux libres sont fournis au mélange d’acrylamide par le persulfate d’ammonium

Answer 15

Vrai

Question 16

À quoi sert le persulfate d’ammonium?

Answer 16

Inhibiteur de la réaction

Question 17

À quoi sert le TEMED?

Answer 17

Inhibiteur de la réaction de polymérisation

Question 18

De quoi dépend la taille des pores? (2)

Answer 18

1- du pourcentage total d’acrylamide et de bis-acrylamide

2- de la proportion acrylamide/bis-acrylamide

Question 19

Vrai ou Faux: plus le pourcentage d’acrylamide dans un gel est élevé, plus le gel permet de séparer des molécules de petites tailles

Answer 19

Vrai

Question 20

De quoi dépend la séparation des molécules dans le PAGE?

Answer 20

• de la charge nette
• de la structure
• de la taille des protéines à analyser

Question 21

Dans quelles conditions utilise-t-on le PAGE?

Answer 21

Lorsque la structure de la protéine doit être conservée

ex: études structurales et fonctionnelles et études enzymatiques

Question 22

Qu’est-ce que le pI?

Answer 22

pH pour lequel la somme des charges + et - d’une protéine s’annule
(charge nette est nulle)

Question 23

Comment se passe la migration d’une protéine en conditions non-dénaturantes?

Answer 23

• les protéines sont séparées de manière à conserver
  leur conformation native (structure tertiaire),
  leurs interactions entre sous-unités (structure quaternaire),
  leurs interaction proteine-protéine et leur activité biologique

Question 24

Vrai ou Faux: le SDS-PAGE permet de séparer les molécules uniquement selon leur masse moléculaire

Answer 24

Vrai

Question 25

Quelle est l'action du SDS?

Answer 25

c'est un agent réducteur qui dénature la protéine (détruit sa structure tridimensionnelle)

Question 26

Que permet la technique du SDS-PAGE?

Answer 26

- déterminer la masse moléculaire des protéines analysées - déterminer le nb de sous-unités d'une protéine - déterminer la pureté d'un échantillon

Question 27

Vrai ou Faux: en plus de faire perdre la conformation native d'une protéine en brisant les interactions non covalentes et les ponts disulfures, la dénaturation des protéines affecte la structure primaire

Answer 27

FAUX, les liens peptidiques ne sont pas affectés, donc la structure primaire reste intacte

Question 28

Nommez les 3 agents dénaturants pour les proteines

Answer 28

- chaleur, pH - SDS - b-mercaptoéthanol

Question 29

Que fait la chaleur et le pH comme agents dénaturants

Answer 29

Déplie et linéarise les molécules

Question 30

Que fait le SDS comme agent dénaturant?

Answer 30

Il recouvre les molécules de charges négatives et empêche la renaturation des protéines dénaturées

Question 31

Que fait le b-mercaptoéthanol?

Answer 31

Rupture des ponts disulfures formés entre les résidus Cys

Question 32

Pourquoi la méthode de SDS-PAGE permet de séparer les molécules selon leur masse moléculaire uniquement?

Answer 32

Car, le SDS déplie les structures secondaires et tertiaires des protéines en brisant les liens covalents. Il entoure ensuite la protéine dépliée pour éviter sa renaturation. Les protéines dénaturées par le SDS sont -, donc ont toutes la même charge et migrent du même côté à des vitesses différentes selon leur masse

Question 33

Vrai ou Faux: le b-mercaptoéthanol est un agent réducteur le plus utilisé dans le SDS-PAGE

Answer 33

Vrai

Question 34

Qu'est-ce qu'une rupture intrapeptide?

Answer 34

à l'intérieur du même peptide

Question 35

Qu'est-ce qu'une rupture interpeptide?

Answer 35

Entre différentes sous-unités peptidiques

Question 36

Vrai ou Faux: on retrouve un système continu et discontinu dans la méthode du PAGE ?

Answer 36

Faux, c'est dans la méthode du SDS-PAGE

Question 37

Qu'est-ce qu'un système continu?

Answer 37

Un seul gel de polycarylamide et un seul système de tampon

Question 38

Qu'est-ce qu'un système discontinu?

Answer 38

Superposition de deux gels de polyacrylamide: 1- gel de concentration/d'empilement 2- gel résolution/de séparation

Question 39

Dans un système discontinu, les gels sont différents sur deux points, quels sont-ils?

Answer 39

1- la concentration de polyacrylamide 2- les gels sont préparés dans des tampons Tris-HCl de pH différent

Question 40

Quelle est l'utilité du système discontinu?

Answer 40

Il permet de concentrer les échantillons en une fine bande pour une meilleure résolution

Question 41

Que permet le gel d'empilement/ de concentration?

Answer 41

Il permet aux protéines d'arriver en même temps au niveau du gel de séparation

Question 42

Que permet le gel de séparation?

Answer 42

Les protéines migrent vers l'anode, puisque le % d'acrylamide est plus élevé par rapport au gel d'empilement, elles se séparent selon leurs tailles

Question 43

Quelle est la méthode de détection des protéines la plus sensible?

Answer 43

La radiographie

Question 44

Quelles sont les méthodes de détections des protéines les plus utilisées?

Answer 44

Bleu de Coomassie Nitrate d'argent

Question 45

Vrai ou Faux: les modification post-traductionnelles peuvent affecter le poids moléculaire apparent du SDSS-PAGE

Answer 45

Vrai

Question 46

Que permet l'isofocalisation/focalisation isoélectrique?

Answer 46

Déterminer le pI d'un peptide ou d'une protéine

Question 47

Vrai ou Faux: dans l'isofocalisation, le gel de polyacrylamide contient un gradient de pH

Answer 47

Vrai, une extrémité basique (+) et une autre acide (-)

Question 48

Que permet l'électrophorèse 2D?

Answer 48

Déterminer le pI et la masse moléculaire au cours de la même expérience

Question 49

Vrai ou Faux: l'électrophorèse 2D fait partie de la batterie d'outils utilisée en protéomique

Answer 49

Vrai

Question 50

Définir: protéomique

Answer 50

Étude d'un protéom

Question 51

Définir: protéome

Answer 51

Ensemble des protéines d'un individu