BIOTECNOLOGIE

Question 1

Che cosa è un enzima di restrizione?

Answer 1

È una proteina che taglia il DNA in corrispondenza di una sequenza nucleotidica specifica, palindromica

Question 2

Quale è la differenza tra plasmide e vettore plasmidico?

Answer 2

Plasmide: DNA circolare presente nei batteri che può dare caratteristiche extra
Vettore plasmidico: plasmide modificato per essere usato in laboratorio (es aggiunta di siti di restrizione)

Question 3

Quale è il prodotto della transcrittasi inversa e che organismi possono farla?

Answer 3

La trascrittasi inversa è un enzima che dall’RNA riesce a ottenere un cDNA (copia del DNA). È presente solo in alcuni virus

Question 4

Quale è la caratteristica fondamentale del cDNA?

Answer 4

È formato solo ed esclusivamente da esoni, non sono presenti gli introni

Question 5

Quali sono 3 applicazioni della ricombinazione del DNA?

Answer 5

1 espressione controllata di un gene
2 miglioramento genico (OGM)
3 ricerca scientifica - proteine fluorescenti che vengono messe all’interno di un altro organismo per vedere lo spostamento di specifiche molecole

Question 6

Chi era la pecora Dolly?

Answer 6

Primo clonazione di un mammifero da una cellula adulta (e non dallo stato embrionale)
Cellula uovo di pecora 2 con all’interno DNA di pecora 1 messa nell’utero di pecora 3

Question 7

Che tipo di taglio possono compiere gli enzimi di restrizione?

Answer 7

• piatto: dritto per dritto lungo la sequenza nucleotidica del DNA
• coeso: taglio non dritto però migliore dal punto di vista del riappaiamento delle basi nucleotidiche

Question 8

Da cosa è determinata la resistenza che si sviluppa in alcuni ceppi batterici?

Answer 8

Dai geni presenti nei plasmidi R

Question 9

Ai fini del clonaggio di un gene, la DNA ligasi è usata per

Answer 9

Inserire il frammento di DNA in un vettore plasmidico

Question 10

Quali sono alcuni vettori di clonaggio?

Answer 10

• fagi: virus che infettano i batteri
• cosmidi: plasmidi molto grandi
• cromosomi artificiali: plasmidi quasi del tutto modificati

Question 11

Che scopo ha la terapia genica?

Answer 11

Sostituire un gene difettoso con uno sano

Question 12

Che cosa è la libreria genomica?

Answer 12

Insieme di frammenti di DNA ottenuti dal genoma di un organismo e inseriti in opportuni vettori

Question 13

Che cosa è un OGM?

Answer 13

È un organismo il cui genoma è stato modificato con tecnica del DNA ricombinante. Include organismi cisgenici e transgenici

Question 14

Che cosa è la PCR? (Reazione a catena della polimerasi)

Answer 14

Tecnica di laboratorio che permette di amplificare/duplicare/clonare una porzione di DNA di cui devo conoscere i nucleotidi iniziali e terminali. Procedimento ciclico che dura qualche minuto
(Duplicazione DNA in vitro)

Question 15

Di cosa ha bisogno la PCR per funzionare?

Answer 15

• acqua e sali minerali
• campione di DNA
• primers : sequenza di prima e dopo della parte che voglio duplicare
• DNA polimerasi: batterico che resiste ad alte temperature TAQ
• nucleotidi aggiuntivi

Question 16

Come funziona la PCR?

Answer 16

1 a 95 gradi denaturazione dell’elica di DNA (naturalmente lo farebbe l’elicasi)
2 a 50 gradi i primers si appaiano e la DNA polimerasi batterica inizia la duplicazione
3 a 60-70 gradi c’è la sintesi dei filamenti e poi riparte facendo in modo che i primers e la dna polimerasi si distacchi rilasciando il filamento sintetizzato

Question 17

Quali sono 5 applicazioni pratiche della PCR?

Answer 17

1 clonaggio molecolare
2 analisi espressione genica
3 medicina legale e indagini
4 test diagnostici di malattie genetiche
5 diagnosi infezioni virali e batteriche (Covid)

Question 18

A cosa serve l’elettroforensi?

Answer 18

Per dividere/ripulire il DNA

Question 19

Come funziona l’elettroforensi?

Answer 19

In gelatina metto dei campioni di DNA e la faccio attraversare da corrente così da essere forzato ad andare al polo positivo. L’attrice con il gel isola i frammenti di diverse dimensioni

Question 20

A cosa serve il sequenziamento secondo il metodo Sanger?

Answer 20

Ha lo stesso funzionamento della PCR, ma serve per scoprire quali basi ci sono, così scopro come è sequenziato il DNA. Ci sono dei nucleotidi marcati senza il gruppo 3’-Oh per bloccare la DNA polimerasi in quel punto così da sapere che base. Non serve la ligasi