CHAP 4; extraction d'ADN et dosage Flashcards
décrire l’objectif principal de ce chapitre
procéder à la purification des fragments générés après digestion enzymatique de Pst1 et Sal1, puis à leur dosage
que veut-on dire par purification
nos fragments sont pris dans le gel d’agarose; on veut l’enlever/le fondre pour aller chercher uniquement l’ADN
**fragment de GFP et de pUC19
comment va-t-on ensuite purifier les fragments
on va profiter de l’affinité de l’ADN pour les billes de silice, en présence de sels à pH neutre;
une fois l’ADN lié à la membrane de silice, on peut laver l’ADN avec solution d’éthanol
décrire le principe du marqueur massruler express et comment il est utilisé pour interpréter les bandes
l’intensité de fluorescence de chaque bande d’ADN qu’il contient est proportionnelle à la quantité d’ADN qui le compose;
donc si a la mm intensité qu’une bande du marqueur, a la mm masse en ng d’ADN dans cette bande
des fois, les puretés sont questionnables
cmt peut améliorer la concentration des ADN extraits
précipiter les échantillons permettrait de se défaire de la contamination des matières organiques et améliorer la concentration
heuresement, grands volumes et les tampons vont compenser
