examen 1, micropip et spectro

Question 1

nommer les 2 types de spectrophotomètre utilisé

Answer 1

biophotometer; pour mesurer les bactéries et les acides nucléiques

nanodrop one; pour mesurer les acides nucléiques

Question 2

à quoi sert le monochromateur ajustable du spectrophotomètre

Answer 2

il laisse passer une seule longueur d’onde;

programmable pour ajuster la bande passante, en fonction des propriétés de la matière utilisée

Question 3

sur quoi est basée la spectrophotométrie UV-visible

Answer 3

sur la mesure de l’interaction entre une matière qu’on veut étudier et la lumière qui la frappe

Question 4

comment sont mesurés les acides nucléiques

Answer 4

par leur propriété d’absorption des photons de 260 nm

Question 5

comment l’absorbance d’une solution d’ADN ou d’ARN varie

Answer 5

elle varie selon sa concentration;

plus sa concentration est élevée, plus son absorbance à 260nm est élevée

Question 6

sur quelle propriété se base-t-on pour mesurer les bactéries en suspension dans un échantillon

Answer 6

elles sont mesurées en tenant compte de leur propriété de faire dévier les photons d’une longueur d’onde précise (600nm)

on mesure la réduction de la transmittance causée par la déviance des photons (donc la densité optique à 600nm)

Question 7

comment la quantité de lumière atteignant le détecteur d’une suspension de bactéries varie

Answer 7

plus la densité bactérienne de la solution est élevée, moins de lumière atteindra le détecteur

Question 8

en quoi se spécialise le nano-drop

Answer 8

en l’analyse de petits volumes d’échantillons;

il peut analyse aussi peu que 1,5 ul de préparation d’ADN ou d’ARN

Question 9

qcq le zero/blanc/blank du nanodrop

Answer 9

l’appareil, avant de faire la mesure d’acides nucléiques dans l’échantillon, mesure la DO du liquide dans lequel sont resuspendus les acides nucléiques pour les échantillons inconnus, avant des les analyser

Question 10

que va afficher le nanodrop one

comment calcule-t-il cela

Answer 10

il va afficher la concentration nette en acides nucléiques (en ng/ul)

la machine le calcule à partir de la DO à 260nm et après avoir soustrait la valeur du blanc, appliquant la loi de Beer-lambert

Question 11

le nanodrop, en plus de la concentration nette, va aussi afficher les ratios de pureté

quels sont ces ratios

Answer 11

260/280 et 260/230

Question 12

le biophotometer est jugé versatile comme spectrophotomètre

pourquoi

Answer 12

pcq il permet de mesurer les acides nucléiques d’un échantillon autant que la densité de suspensions bactériennes

Question 13

à la fin de la lecture du biophotometer visant l’évaluation des acides nucléiques, que va afficher l’appareil

Answer 13

il va afficher la DO à 260 nm et la DO à 230 nm et la DO à 280 nm

Question 14

comment trouve-t-on la concentration d’acides nucléiques à l’aide du biophotometer

Answer 14

il affiche slmt la DO, donc il faut utiliser cette mesure et appliquer la loi de beer-lambert afin de trouver la concentration d’acides nucléiques à laquelle cette DO correspond

Question 15

pk le biophotometer affiche la DO à 230 nm également

Answer 15

il veut évaluer la proportion de composés organiques dans l’échantillon

comme:

phénol,
EDTA
isothiocyanate de guanidine
alcools
glycoprotéines
protéoglycans

Question 16

pk le biophotometer affiche la DO à 280 nm également

Answer 16

pour évaluer la proportion de protéines dans l’échantillon

Question 17

comment l’absorbance à 260 nm varie selon la loi de beer-lambert

Answer 17

elle varie de facon proportionnelle à la concentration d’acide nucléique

Question 18

nommer la loi de beer-lambert ainsi que chacun de ses composants

Answer 18

A = e c l

A= absorbance à 260nm
e= coefficient d’extinction
c= concentration (ng/ml)
l= trajet optique en cm

Question 19

quel est le coefficient d’extinction pour l’ADN double brin

Answer 19

e = 0.020 (ng-1/ml-1)*cm-1

Question 20

quel est le coefficient d’extinction pour l’ARN

Answer 20

e = 0.025 (ng-1/ml-1)*cm-1

Question 21

quel est le coefficient d’extinction pour l’ADN simple brin (comme ADNc)

Answer 21

e = 0.027 (ng-1/ml-1)*cm-1

Question 22

comment évalue-t-on la proportion de:

matière organique par rapport aux acides nucléiques

dans un échantillon d’ADN

Answer 22

on calcule le ratio DO 260/DO 230

pour que l’échantillon soit considéré pur et libre de molécules organiques et que l’ADN soit utilisable pour des procédures de biomol, le ratio doit être entre 2,0 et 2,2

Question 23

comment évalue-t-on la proportion de:

protéines par rapport aux acides nucléiques

dans un échantillon d’ADN

Answer 23

on calcule le ratio DO 260/DO 280

pour que l’échantillon soit considéré pur et libre de protéines et que l’ADN soit utilisable pour des procédures de biomol, le ratio doit être entre 1,75 et 2,1

Question 24

à quelle longueur d’onde évalue-t-on les suspensions bactériennes

Answer 24

à 600 nm

Question 25

nommer les étapes d'évaluation de densité de suspension bactérienne à l'aide de sa DO600

Answer 25

-on fait d'abord le zéro-blanc-blank en remplissant le fond d'une cuvette de milieu de culture utilisé pour l'ensemencement bactérien (1mL pour que le faisceau de photons y passe bien à l'intérieur) -on allume le spectrophotomètre et l'ouvre à D0600 -on fait la lecture de la cuvette du milieu en indiquant de faire la lecture blanc/blank; l'appareil se calibra pour que la valeur mesurée soit soustraitre de la valeur de chaque suspension suivante -on mélange la 1ere suspension bactérienne à analyser et on prélève l'aliquot qu'on met dans une cuvette propre; 1 mL -sans attendre que les bactéries sédimentent vers le fond de la cuvette, on fait la lecture DO600 de l'aliquot, en indiquant à l'appareil que c'est un inconnu -l'appareil affichera la valeur nette de DO600 des bactéries en suspension, après avoir soustrait le blanc

Question 26

quelles sont les valeurs de DO d'un aliquot bactérien qui constituent des bactéries de la culture bactérienne liquide EN PHASE LOGARITHMIQUE DE CROISSANCE

Answer 26

DO600 située entre 0.3 à 0.8 (0,9 passable)

Question 27

qcq cela signifie si la DO600 de l'aliquot bactérien est inférieure à 0,3

Answer 27

la densité de culture bactérienne liquide est INSUFFISANTE pour permettre le rendement minimal requis pour les applications on remet la culture bactérienne liquide dans l'incubateur avec agitation pour qu'elle poursuive sa croissance, afin d'ensuite prélever un aliquot à DO600 de la valeur voulue

Question 28

qcq cela signifie si la DO600 de l'aliquot bactérien est supérieure à 0,8-0,9

Answer 28

la suspension bactérienne peut être adéquate pour des applications telles que les extractions d'ADN plasmidique, mais trop dense pour de la transfo bactérienne on doit donc diluer la préparation bactérienne liquide d'un facteur minimale de 2, après on remet la culture dans l'incubateur avec agitation et on remet l'aliquot à mesurer jusqu'à atteinte de la valeur voulue

Question 29

quelle est la capacité d'une micropipette p-20

Answer 29

20 uL

Question 30

quelle est la capacité d'une micropipette p-200

Answer 30

capacité de 200 uL

Question 31

quelle est la capacité d'une micropipette p-1000

Answer 31

capacité de 1000 uL

Question 32

nommer les 4 formats de micropipettes

Answer 32

0,5 - 5mL 0,25 - 2,5 mL p1000: 100 - 1000 uL p200: 20-100 uL p2,5: 0,1-2,5 uL p20: 2-20 uL

Question 33

si le mm volume peut être mesuré par 2 micropipettes différentes, laquelle est plus judicieuse

Answer 33

celle qui aura le volume plus au centre de sa plage de volumes cela sera plus exact

Question 34

quelle est la plage d'exactitude des micropipettes bien calibrées

Answer 34

elles sont exactes entre 10% et 100% de leur maximum

Question 35

que signifie des résultats exacts de volume

Answer 35

le volume correct est délivré

Question 36

que signifie des résultats précis de volume

Answer 36

il y a une variation minimale entre les volumes livrés successivement pour un mm réglage

Question 37

quels embouts utilise la p2.5

Answer 37

les embouts incolores

Question 38

quels embouts utilise les p20 et p200

Answer 38

les embouts de couleurs jaunes

Question 39

quels embouts utilise la p1000

Answer 39

les embouts bleus

Question 40

comment appuyer sur le piston pour remplir

Answer 40

on appuie jusquau premier arrêt

Question 41

comment appuyer sur le piston pour expulser

Answer 41

on appuie jusqu'au deuxieme arret

Question 42

à quel point faut-il enfoncer l'embout

Answer 42

d'une profondeur de quelques millimètres dans la solution à transférer

Question 43

que faire pour avoir des transferts d'exactitude et de précision optimal

Answer 43

maintenir la micropipette à moins de 20 degrés de l'axe vertical pdnt tt son utilisation donc rester droit lors des manips

Question 44

que faut-il faire avant de relacher le piston après expulsion

Answer 44

il faut retirer la pipette et l'embout du tube

Question 45

à quoi sert l'écart-type

Answer 45

il sert à calculer une mesure de la répartition de l'ensemble des données dans les mm unités que les données