Circulation Flashcards
(78 cards)
1
Q
Quel est le but de la circulation ?
A
La circulation est l’ensemble des étapes de préparation du tissu fixé afin de pouvoir l’inclure
dans un matériau rigide qui permettra d’en faire des coupes observables au microscope
2
Q
La déshydratation contien combien de bain d’ethanol ?
A
5
3
Q
Quels sont les pourcentage des bain d’ethanol dans la déshydratation ?
A
- Ethanol 70%
- Ethanol 95%
- Ethanol 100%
- Ethanol 100%
- Ethanol 100%
4
Q
Combien est-ce qui a de bain pour l’eclairssicement ?
A
2
5
Q
Combien est-ce qui a de bain pour l’impregnation ?
A
3
6
Q
Quel est le but de la déshydratation ?
A
Enlever l’eau et le liquide fixateur des tissus
7
Q
Les 2 premier bain d’ethanol doivent etre changer apres son utilisation
Vrai ou faux
A
Vrai
8
Q
Ils faut enlever le dernier bain d’ethanol et en rajouter un nouveau de 100% au debut de ceux de 100% (comme les filters d’aquarium)
Vrai ou Faux
A
Vrai
9
Q
De longues périodes d’attente dans un alcool dilué n’endommage pas la pièce car celle-ci peut être entreposée dans l’alcool 70% si fixée dans un fixateur intolérant
Vrai ou Faux
A
Vrai
10
Q
Quel est la durée minimal de chaque bain de la déshydratation ?
A
Durée minimale de chaque bain dépend de la taille et du type de la pièce
11
Q
Quels sont les étapes de la circulation ?
A
1.Déshydratation
2.Éclaircissement
3.Imprégnation
12
Q
_________________________
mis dans le dernier bain comme indicateur de la présence d’eau dans le bain (fait seulement dans certains laboratoires)
A
sulfate de cuivre anhydre
13
Q
Le sulfate de cuivre (blanc) retire l’eau de l’alcool →_______________________________
A
accélère la déshydratation et prolonge la durée de vie de l’alcool
14
Q
Le changement de couleur du sulfate de cuivre (blanc → bleu) indique_______________________
A
qu’il faut remplacer le bain d’alcool et le sulfate de cuivre.
15
Q
Le volume d’alcool doit être __________fois supérieur à celui de la pièce
A
20 a 50 fois
16
Q
Éthanol (C2H5OH)
- « Le plus courant »
- Non toxique
- Miscible à l’eau
- Action rapide → ne pas laisser trop longtemps
- Concentration croissante → empêche rétraction tissu
- Inflammable
- Précipitation des sels de phosphate dans le tissu si 1ier bain alcool plus
concentré que 70%
A
17
Q
agents déshydratants
_______________________
- « Le plus courant »
- Non toxique
- Miscible à l’eau
- Action rapide → ne pas laisser trop longtemps
- Concentration croissante → empêche rétraction tissu
- Inflammable
- Précipitation des sels de phosphate dans le tissu si 1ier bain alcool plus
concentré que 70%
A
Éthanol (C2H5OH)
18
Q
agents déshydratants
___________________
- Rarement utilisé → peut être un substitut à l’éthanol
- Toxique
- Miscible à l’eau
- Action rapide → ne pas laisser trop longtemps
- Inflammable
A
Méthanol (CH3OH)
19
Q
agents déshydratants
________________________
- Le meilleur substitut à l’éthanol → rétracte/durcit moins
- Pas bon pour inclusion avec celluloïdine (insoluble)
- Légère irritation nez, yeux, gorge
- Toxique si ingéré
- Inflammable à des concentrations de 10% et plus
- Ne peut pas être utilisé pour préparation solution éosine
A
Alcool isopropylique (CH3CHOHCH3)
20
Q
agents déshydratants
________________________
- Le meilleur substitut à l’éthanol → rétracte/durcit moins
- Pas bon pour inclusion avec celluloïdine (insoluble)
- Légère irritation nez, yeux, gorge
- Toxique si ingéré
- Inflammable à des concentrations de 10% et plus
- Ne peut pas être utilisé pour préparation solution éosine
A
Alcool isopropylique (CH3CHOHCH3)
21
Q
agents déshydratants
_______________________
- Capacité déshydratante faible
- Pénètre lentement le tissu
- Bon pour tissus ayant besoin déshydratation longue comme les tissus
délicats - Moins de rétraction et de durcissement que l’éthanol
- Miscible à la paraffine → pas besoin d’éclaircissement
- Odeur forte
A
Alcool butylique
22
Q
agents déshydratants
_______________________
- Rapide → déshydrate vite mais pénètre lentement
- Très volatile → besoin d’une très grande quantité
- Retrait des lipides
- Tissus deviennent friables et rétractés si trop longtemps
- Inflammable
- Flash point de -17°C
A
Acétone (CH3COCH3)
23
Q
agents déshydratants
______________________
- Solvant universel : miscible avec l’eau, l’éthanol et la paraffine → déshydrate et éclaircit en même temps
- Distorsion des tissus avec des cavités
- Plus rapide qu’éthanol mais besoin d’une très grande quantité
- Prix très élevé
- Très toxique et toxicité cumulative (inhalée ou absorbée par la peau)
- Odeur forte
- Très inflammable
A
Dioxyde de diéthylène
(Dioxane)
24
Q
agents déshydratants
________________________
- Solvant universel : miscible avec l’eau, le xylène, letoluène et la paraffine fondue
- Odeur forte
- Dispendieux
- Tendance à se solidifier à la température de la pièce
- Inclusion à la paraffine : 1er bain doit être moitié-moitié avec paraffine
A
Butanol tertiaire
25
agents déshydratants
____________________
- Solvant universel : miscible avec l’eau, le xylène, le toluène et la paraffine fondue (et acétone, éther,
chloroforme, benzène)
- Propriétés ressemblent à celles de Dioxane mais toxicité non cumulative
- Rapide
- Tolérant et rétrécit peu les tissus
- Très utile pour les tissus où on doit reprendre la déshydratation et l’éclaircissement
- Très volatile
- Flash point de -14,5°C
- Odeur forte
- Moins toxique que Dioxane
- Exposition prolongée → dommage au foie et au rein
Tétrahydrofurane ou THF
(CH2CH2CH2CH2O)
26
Quel agents déshydratants est le meilleur solvant universelle
Tétrahydrofurane ou THF
(CH2CH2CH2CH2O)
27
Quels sont les facteurs qui influencent la déshydratation ?
Concentration
Volume
Agitation
Durée
Temperature
Vide partiel
Sulfate de cuivre
Taille/ consistance tissu
28
Comment la concentration influencent la déshydratation ?
Bains croissants → moins de stress au tissu
3 derniers bain : 100%
29
Comment le volume influencent il la déshydratation ?
20 à 50X
Renouveler les bains souvent → dilution de la solution.
30
Comment l’agitation influencent il la déshydratation ?
Augmente la vitesse de déshydratation
31
Comment la Durée influencent il la déshydratation ?
Assez long pour retirer toute l’eau du tissu
Attention au rétrécissement et au durcissement
32
Comment la temperature influencent il la déshydratation ?
Augmente la vitesse de déshydratation
33
Comment le vide partiel influencent il la déshydratation ?
Dépend des auteurs…
Augmente vitesse de déshydratation (retire air emprisonné)
34
Comment la sulfate de cuivre influencent il la déshydratation ?
Indique la présence d’eau dans le dernier bain d’alcool
35
Comment la taille/consistance tissu influencent il la déshydratation ?
Tissu gros, fibreux, denses → plus difficile à déshydrater.
36
_____________________
- Retirer l’agent déshydratant pour le remplacer par l’agent éclaircissant (qui sera
remplacé ensuite par la paraffine).
- Plus d’un bain (bains multiples)
- L’agent éclaircissant doit être miscible autant avec l’alcool qu’avec la paraffine.
- L’agent éclaircissant doit agir vite (retirer l’agent déshydratant des tissus) sans les
durcir.
- Le volume de liquide doit être 10 fois supérieur au volume du tissu
L’ éclaircissement
37
L’éclaircissement est aussi une étape nécessaire lors de la coloration. Enlève la paraffine et rend le tissu transparent.
Vrai ou faux
Vrai
38
Les agents éclaircissants qui sont________________________sont appelés agents éclaircissant universels
miscibles avec l’eau et la paraffine
39
Quels sont les Critères pour choisir un agent éclaircissant ?
1. Retrait rapide de l’agent déshydratant
2. Facilité à remplacer l’éclaircissant par la paraffine fondue
3. Dommage minimal aux tissus
4. Inflammabilité
5. Toxicité
6. Coût
40
agents éclaircissants
______________________
- Excellent éclaircissant → rend tissus translucides
- Intolérant
- Durcit surtout : tissu fibreux, musculaire, SNC, cartillage
- Si reste de l’eau → solution avec aspect laiteux
- Rapide → 5 mm épaisseur en 30 à 60 minutes
- Rétracte les tissus
- Inflammable et volatile
- Très miscible à la paraffine
Xylène (C6H4(CH3)2
41
agents éclaircissants
______________________
- Semblable au Xylène
- Durcit moins que le Xylène (moins dommageable à long terme)
- Tolérant → 12 heures ou « overnight » sans trop de durcissement
- Vapeur toxiques et narcotiques
Toluène (C6H5CH3)
42
agents éclaircissants
______________________
- Rapide
- Pas de durcissement excessif comme le xylène
- Durcit tout de même (mais moins que toluène) : tendon, muscle, utérus
- S’évapore rapidement du bain de paraffine → donc pas besoin de faire une rotation des bains de paraffine
- Hautement cancérigène et toxique
- anémie aplasique par inhalation ou contact cutané
- Fortement déconseillé de nos jours
Benzène (C6H6)
43
agents éclaircissants
________________________
- Plus lent que xylène mais rend tissus moins cassants
- Utérus, muscle, tendon → mieux que xylène
- Rétracte très peu
- Densité spécifique élevée (1,49) → pièces flottent lorsqu’elles sont éclaircies
- Difficile à enlever par la paraffine
Chloroforme (CHCl3)
44
agents éclaircissants
______________________
- Tolérant (peut rester dans solution indéfiniment)
- Ne cause pas de rétrécissement
- Peu d’évaporation
- Odeur intense
- Doit être enlevé par le xylène
- Dispendieux
- Lent
- Bon pour tissus durs : peau, muscles, utérus, tendons
- Visqueux → imprégnation à la paraffine très lente
Huile de cèdre
(Huiles essentielles)
45
agents éclaircissants
_____________________
- Produit substitut
- Composé aliphatique (alcane)
- Considéré plus sécuritaire que le xylène
- Pas d’évaporation (pas de vapeurs)
- Peut être neutralisé pour en disposer
- Très lent pour enlever la paraffine
- Se contamine facilement par l’eau (humidité)
SlideBrite™
46
agents éclaircissants
______________________
- Substitut au xylène
- Moins de durcissement
- Considéré plus sécuritaire que le xylène (il y a 10 ans)
- Irritant
- Odeur forte et citronnée
- Difficile à utiliser dans les colorations (décollement)
- Doit changer la paraffine souvent (contamination par limonene)
Limonene™
47
Quels sont les facteurs qui influencent l’éclaircissement ?
Concentration
Volume/nombre de bains
Agitation
Durée
Température
Vide partiel
Taille/consistance des pieces
48
Comment la concentration influencent elle l’éclaircissement ?
Idem à déshydratation
Le dernier bain doit être pur (rotation des bains).
49
Comment le volume/ nombres de bain influencent elle l’éclaircissement ?
Idem à déshydratation
50
Comment l’agitation influencent elle l’éclaircissement ?
Idem à déshydratation
51
Comment la durée influencent elle l’éclaircissement ?
Dépend de l’agent éclaircissant utilisé.
Attention à la tolérance / intolérance
52
Comment la temperature influencent elle l’éclaircissement ?
Augmente la vitesse d’éclaircissement.
Mais durcit, rétracte
Mieux sans chaleur
53
Comment le vide partiel influencent elle l’éclaircissement ?
Pas vraiment de changement
Retire l’air emprisonné.
54
Comment la Taille/consistance des pièces influencent elle l’éclaircissement ?
Idem à déshydratation
55
______________________
-Fournir un support interne au tissu;
- Saturation complète du spécimen par le médium qui sera utilisé lors de l’inclusion;
- Retrait complet du xylène et remplacement par la paraffine.
L’imprégnation
56
Combien y a de bain pour l’éclaircissement ?
2
57
Combien y a de bain pour l’impregnation ?
3
58
Dans la méthode de l’impregnation, le Séjour est ________pour tissus denses (os, peau, système nerveux central)
Plus long
59
Dans la methode de l’impregnation, le Séjour est_________ pour tissus mous (foie, muscles, tissus fibreux)
Plus cour, car tendance à durcir si trop longtemps dans la paraffine
60
Dans les bain de l’impregnation, Paraffine doit être _________°C plus élevé que le point de fusion
2 à 3°C
61
Dans la méthode de l’impregnation,
Rotation des bains de paraffine → car dilution du premier bain avec le xylène
Avec huile de cèdre, chloroforme, tétrachlorure → augmenter durée car plus difficilement remplacés par la paraffine
Vrai ou faux
Vrai
62
agents d’imprégnation
_____________________
- Mélanges d’hydrocarbures solides
- Substances organiques
- Paraffines molles et dures : points de fusion différents (55 à 58°C → le plus courant)
- Durcissent à la température de la pièce
- Pas utilisées pures → mélangées avec cire d’abeille, plastique, caoutchouc, lard
- Si pures → assèchement des blocs → coupe difficile → pas assez élastique;
- Permet obtenir de plus belles coupes et une meilleure adhérence à la lame.
- Rétraction du tissu de 10% quand paraffine refroidie;
- Si tissu mal déshydraté :
1- fondre paraffine
2- xylène ou toluène → faire fondre paraffine
3- éthanol 100% → déshydrater complètement
4- xylène ou toluène
5- paraffine liquide
6- imprégnation → faire un nouveau bloc
Paraffines
63
agents d’imprégnation
________________________
- Paraffine pure + polymère de plastique
- Point de fusion = 56 à 57°C
- Donne blocs plus uniformes
- Coupes plus faciles, moins de craquelures → Paraplast plus élastique
Paraplast™
64
agents d’imprégnation
_______________________
- Polyéthylène-glycol
- Miscible à l’eau → ne pas exposer à l’humidité
- Peut imprégner immédiatement après la fixation, pas besoin de déshydratation ou d’éclaircissement
- On ne peut pas étaler les coupes sur un bain d’eau
- Meilleur support que la paraffine
- Lipides conservés → pas dissout par autres étapes de la circulation
- Pourquoi non utilisé :
- Entreposage des blocs dans milieu absolument sec
- Étalement des coupes sur la lame est difficile
Carbowax™
Cires solubles à l’eau
(hydrosolubles)
65
Quels sont Les facteurs qui influencent l’imprégnation ?
Taille/consistance
Agent éclaircissant utilisé
Volume total de paraffine/nombre de bains
Température
Agitation
Vide partiel
66
Comment la taille/consistance des pieces influencent elle l’impregnation ?
Plus long pour les tissus gros, denses et durs
67
Comment l’Agent éclaircissant utilisé influencent elle l’impregnation ?
Miscibilité à la paraffine
Plus rapide si l’éclaircissant est plus miscible (et si plus volatile)
68
Comment le Volume total de paraffine/nombre de bains influencent elle l’impregnation ?
Mieux avec plusieurs bains
69
Comment la temperature influencent elle l’impregnation ?
57 à 60 °C
Dépend des types de paraffine utilisés.0
70
Comment l’agitation influencent elle l’impregnation ?
Souhaitable (plus efficace)
71
Comment le vide partiel influencent elle l’impregnation ?
Évacue les bulles d’air plus vite
Évacue l’agent éclaircissant
La paraffine est un média visqueux, le vide permet de la faire entrer dans le tissu plus vite.
72
La majorité des problèmes rencontrés dans la circulation sont du type :
1. Tissu sur traité (overprocessed)
2. Tissu sous traité (underprocessed)
Vrai ou faux
Vrai
73
Les problèmes rencontrés dans les étapes de la circulation seront moins sévères si le tissu est bien fixé.
Vrai ou faux
Vrai
74
Quel est le problèmes possibles de la circulation ?
Apparence: Présents dans tissu (microtomie difficile)
Cause: Utilisation de formol-zinc ou formol tamponné avec phosphate et déshydratation débutée avec alcool plus de 70% Aussi : pH formol-zinc plus de 7
Prévention: Débuter déshydratation avec alcool 60-65% (70%)pH formol-zinc doit demeurer sous 7
Retrait/correction: Retrait précipités en rinçant chambre et tubulures avec acide acétique 5%
Présence de précipités dans la chambre et les tubulures du circulateur
75
Quel est le problèmes possibles de la circulation ?
Apparence: lissy seche, cassant, poudreux Se présente sous forme de « microchatter » sur les bords du tissu
To chatter : to vibrate rapidly in cutting
Correction :Tremper le bloc dans un bain d'eau avec glace avant la coupe au microtome. Réduire le temps de déshydratation. Attention à la température
Tissu en "terre désséchée" Cellules de taille réduite
Correction :Réduire le temps de déshydration Attention à la température
Prévention : Temps de déshydratation adéquat Adhérer au protocole en place en ce qui a trait à l'utilisation de la chaleur.
Déshydratation excessive
76
Quel est le problèmes possibles de la circulation ?
Apparence: Vu surtout sur colo. HE → colo. nucléaire pauvre ou absence colo. de certains noyaux.
Cause: La + fréquente : reste eau dans tissu quand va dans éclaircissement donne éclaircissement et imprégnation insuffisante (inadéquate)
Causé par autres :
1- Présence d’agent éclaircissement dans paraffine
2- Utilisation trop de chaleur pendant le cycle
3- Problèmes mécaniques avec le circulateur
Prévention: S’assurer d’aucune condensation dans circulateur (fixateur ou alcool)
S’assurer que l’alcool 100% est pur
S’assurer que pas de problèmes mécanique
S’assurer d’une cédule adéquate
Chaleur seulement pour paraffine
Circulation inadéquate
77
Quel est le problèmes possibles de la circulation ?
Apparence: éponges pour pas que la petite biopsie passe a travers les trous de la cassette
Cause: Utilisation des éponges : Trop de pression entre les éponges Séparation du tissu de l’éponge
Prévention: S’assurer que tremper les éponges dans le fixateur avant de mettre le fragment.
Artéfact d’éponge
78
Quel est le problèmes possibles de la circulation ?
Apparence: Visible lors de l’enrobage et sous forme de bloc (microtomie)
Cause: Tissu laissé à l’air libre pendant la circulation. Rare de nos jours car plus de circulateur ouvert
Correction: But : recouvrer le plus de morphologie possible pour sortir un rapport Enlever le plus de paraffine possible (Blot off) Placer tissu dans solution réhydratante : eau, alcool 100, carbonate
sodium aqueux
Dessiccation (assèchement) accidentel du tissu
