Clonage Des Genes 2 Flashcards
que a faire la méthylation des bases de restriction ?
va empêcher l’enzyme de restriction de couper le site
qu’a chaque enzyme de restriction (ER) ?
sa propre méthylase qui ait sur la même seq d’ADN
comment coupent les ER ?
coupent les deux brins au site de restriction.
→ coupure avec formation de bouts francs ou bouts collants ou extrémités cohésives
sur quoi est basée la complémentarité entre 2 extrémités générées par coupure avec une enzyme de restriction ?
basée sur une complémentarité parfaite de seq
carte de restriction d’un fragment d’ADN ?
l’emplacement des sites de restriction sur le fragment en respectant la distance qui les séparent
qu’est-ce que l’on voit sur gel ?
profil de migration des fragments d’ADN après coupures par une pu pls enzymes de restriction
propriété d’un vecteur de clonage ?
- doit posséder une origine de réplication → réplication autonome dans une C hôte donnée (mini K)
- doit présenter un syst de sélection → résistance aux antibiotiques
- doit posséder u polylinker ou un site multiple de clonage (SMC ou MCS)
type de vecteur et taille de ADN cloné en kb ?
taille max approximative du fragelnt ADN qui peut être cloné dans chaque vecteur :
- plasmide = 20
- Phage 𝜆 = 25
- cosmide = 45
- Phage 1 = 100
- BAC = 300
- YAC = 1000
comment sont les plasmides bactériens ?
- extraKq, circulaires et capables de réplication autonome
- ils portent le gène de résistance à un antibiotique
comment est l’origine de réplication : Ori (Ori C pour E. coli) ?
→ 1-100 copies/ C baté
→ petite taille
→ réplication indépendante du K bactérien
→ répartition aléatoire
comment sont les plasmides dans les bactéries ?
les plasmides dans les bactéries sont à l’état naturel où ils jouent des rôles variables en fonction des gènes qu’ils portent
que portent les plasmides métaboliques ?
portent des gènes permettant l’utilisation de certains nutriments.
Chez E. coli, l’utilisation du citrate comme source de carbone…
qu’hébergent les bactéries pathogènes ?
les bactéries pathogènes hébergent très souvent des plasmides qui portent des gènes codant des facteurs de virulence
que codent les plasmides de bactériocine ?
ces plasmides codent pour 2 protéines, la bactériocine, toxine extraCr qui est létale pour les types de bactéries de types ≠ et une 2e protéine intraCr de résistance à cette toxine
les plasmides de résistances ?
résistance à une grande variété d’antibiotiques, résistance aux métaux lourds, mercure, cadmium, nickel, cobalt, zinc, arsenic…
comment agit l’ampicilline ?
agit comme un inhibiteur de la transpeptidase, une enzyme indispensable aux bactéries pour la $ de leurs parois Cr.
→ empêche la $ des parois de la bactérie, ce qui provoque la lyse de la bactérie
résistance à l’ampicilline ?
le gène ampR code pour une enzyme (la β-lactamase) capable d’inactiver les antibiotiques de la famille des pénicillines en clivant une liaison du noyau β-lactame
→ mécanisme d’hydrolyse de la pénicilline par la β-lactamase
que fait le “polylinker” ?
“polylinker” ou site de multiplication de clonage sur plasmide facilite le clonage
qu’est-ce que le polylinker ?
courte seq d’ADN sur un plasmide qui contient plusieurs sites de reconnaissance pour ≠ enzymes de restriction, permettant l’insertion facile de fragments d’ADN
propriété de la ligase ?
c’est une enzyme qui est capable de lier de façon covalente deux molécules d’ADN en une
→ seul le fragment 𝛼 est lié à 𝛼’ (ligase a lié le fragment d’ADN 𝛼 à un autre fragment complémentaire 𝛼’, mais pas avec d’autres fragments éventuels présents. frag 𝛼 et 𝛼’ = svt extr cohésives, qui s’apparient grâce à leur bases.)
comment est la liaison par la ligase ?
la ligase lie de façon covalente deux molécules ayant des extr compatibles.
que catalyse la ligase ?
catalyse la formation de liaison phosphodiester entre 3’OH d’une extr d’ADN et 5’P de l’autre
que signifie le fait que le codage de l’information génétique est universel pour une molécule hybride ?
la molécule hybride peut être fonctionnelle en théorie dans n’importe quel organisme
avantages procaryotes comme C hôte ?
multiplication rapide, facile à manipuler, facile à transformer
