clonage des gènes 3 Flashcards
transf des C procaryotes par transf chimique ?
peu efficace
→ Ca++ modifier les charges de la bicouche mbr
problématique 1 clonage, sélection de la C hôte ?
efficacité de la transf :
→ besoin de sélectionner et d’identifier des bactéries ayant intégré un plasmide
comment sont def les antibiotiques ?
comme étant des substances chimiques, produites par des micro-organismes et capables, à faible concentration, d’inhiber la croissance d’autres micro-organisme ou m̂ de les détruire
où peuvent agir les antibio ?
à ≠ nv de la Ȼ procaryote
qu’inhibent les antibio bactériostatiques ?
inhibent la croissance et la division des bactéries, mais ne les tuent pas. Les agents bactériostatiques doivent collaborer avec le syst immu pour évincer les micro-orga du corps
qu’entrainent les antibio bactéricides ?
la lyse des bactéries
les 5 modes d’action des antibiotiques ?
1) inhibition de la $ de la paroi bactérienne
2) inhibition de la $ de la mb cytoplasmique
3) inhibition de la $ protéique
4) inhibition de la $ de l’ADN
5) inhibition de la transcription
sur quoi repose la méthode du test blanc-bleu ?
méthode de sélection qui repose sur la présence d’un gène particulier sur le plasmide : le gène lacZ
pour quoi code le gène lacZ ?
pour la β-galactosidase
que contient la seq codante du gène lacZ ?
le site multiple de clonage (SMC) qui est une région insérée artificiellement dans une partie du gène lacZ.
→ sert à faciliter le clonage de fragments d’ADN en offrant pls sites de restriction dans une région non essentielle, permettant d’insérer facilement un frag d’ADN sans perturber les autres fonctions de plasmides
⚠️ tous les plasmides n’ont pas le gène lacZ
avec quoi réagit l’enzyme β-galalactosidase ?
réagit avec son substrat le X-Gal pour donner un précipité bleu (2X + 2GAL)
nom et formule du X-Gal ?
formule brute : C14 H15 Br C I N O6
nom : 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside
pourquoi couleur bleu dans test bleu-blanc ?
principe : l’insertion du fragment d’ADN conduit à une interruption du gène lacZ responsable de la couleur bleue.
les bactéries ayant incorporé un plasmide recombinant n’auront pas le gène lacZ fonctionnel → pas de dégradation du X-gal → colonie blanche
qu’auront les plasmides ayant incorporé un plasmide non-recombinant ?
auront le gène lacZ fonctionnel → dégradation du X-Gal → colonie bleue
stratégies pour ↑ l’efficacité du clonage des gènes ?
1) déphosphorylation du vecteur ouvert
2) ouverture du vecteur par é enzymes de restriction ≠
sélection des bactéries transf grâce ?
grâce au marqueur antibiotique du vecteur
ouverture du vecteur par 2 enzymes de restriction ≠. Doubles effet ?
1) éviter le vecteur plasmide de se refermer sur lui-même
2) orienter l’insertion du gène d’intérêt
que permet l’utiliser de deux enzymes lors d’un clonage ?
permet d’orienter le sens du clonage de l’insert d’ADN
cas d’ seul enzyme pour orientation du clonage et cas de deux enzymes ?
1 enzyme : le frag peut être orienté dans les 2 sens (bidirectionnel)
2 enzymes : le frag peut être orienté dans une seul sens (unidirectionnel)
que peut faire le frag du SMC ?
peut se religaturer avec le plasmide digéré et rentrer en compétition avec le frag à cloner
quels sont éléments qui ne permettent pas de produire la somatotropine ?
transcription, traduction :
- promoteur
- UTR
- intron
à partir de quoi est obtenu l’ARN ?
à partir de lignées Cr, de tissus ou d’organismes entiers
→ chaque type Cr exprime un lot donné de gènes donc pour un organisme multiCr, les ARNs sont ≠ pour chaque type Cr
qu’auront les ADN complémentaires obtenu avec ces ≠ types Cr après purification de l’ARN + rétro-transcription ?
auront des ADNc en commun (gènes de ménage) et des ADNc ≠
par quoi est produite la somatotropine ?
par les C hypophysaires
