E.Coli como célula huésped Flashcards

(33 cards)

1
Q

¿Cómo se ocupa E. Coli?

A

Como hospedero para propagación y manipulación de DNA recombinante

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2
Q

¿Cuál es el principal beneficio de E.Coli?

A

Su alta velocidad de crecimiento

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3
Q

¿Cuál es la E.Coli original?

A

E.Coli K-12, provenie de un paciente con difteria

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4
Q

E.Coli B

A

Se derivan cepas como REL606 y BL21

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5
Q

E.Coli C

A

diferencias morfológicas

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6
Q

E.Coli W

A

Aislada por Selman Waksman

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7
Q

recA, recB, recC, recD

A

Recombinación

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8
Q

rpsL(Str r)

A

Resistencia a estreptomicina

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9
Q

lacI q

A

Mutación constitutiva

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10
Q

Propiedades Generales de hospederos para clonación

A

Imposibilidad, Fertilidad, Sistemas de Modificación metilación-restricción, Sistemas de recombinación, sistemas de alfa-complementación

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11
Q

Imposibilidad

A

Se genera codón STOP. ambar (UAG), ocre (UAA)

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12
Q

Fertilidad

A

En celulas HFR, el factor F causan transferencia. Mutacion en tra provoca transferencia. Las cepas con factor F generan pili.

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13
Q

Sistemas de modificación-restricción

A

Evita intercambio genético, destruyendo ADN foráneo

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14
Q

Sistema de ADN metilasa

A

Metila residuos de C/A evitando degradación

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15
Q

Dam

A

metila residuos de A en GATC

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16
Q

Dcm

A

metila residuos de citosina en CC(A/T)GG

17
Q

Que cepas siempre son dam+

18
Q

¿Qué podría causar Dam o Dcm?

A

Afectar digestión de DNA clonado, afectar eficiencia de transformación, ocasionar mutagénesis

19
Q

hsdR- resulta en?

A

fenotipo de restricción y metilación negativo

20
Q

hsdS

A

deficientes en metilación

21
Q

hsdR

A

codifica endonucleasa

22
Q

hsdM

A

codifica metilasa

23
Q

hsdRMS

A

subunidad del sitio reconocimiento

24
Q

McrA, McrB

A

cortan metilcitosinas

25
Mrr
Corta metiladenina
26
Si utilizas metilasas de citosina en clonación
ADN recombinante debe ser transformado en mcrA-, mcrBC- para que no haya restricción de Mcr
27
Recombinación
Mutaciones pueden mantener integridad de DNA clonado
28
Vías de recombinación de E. Coli
recBCD, recE, recF
29
recA-
reduce recombinación hasta 1000 veces
30
recBC- y recd-
buenos hospederos para estabilizar palindromes de vector lambda
31
RecBCD
degradan ADN concatamerico lineal entonces ocupar recBC, sbcB-, recD-
32
Mutaciones en mutD provoca
Mutaciones espontaneas
33
Mutagénesis al azar
Mantener a plásmidos en mutD- y luego transformar en mutD+