E.Coli como célula huésped Flashcards
(33 cards)
¿Cómo se ocupa E. Coli?
Como hospedero para propagación y manipulación de DNA recombinante
¿Cuál es el principal beneficio de E.Coli?
Su alta velocidad de crecimiento
¿Cuál es la E.Coli original?
E.Coli K-12, provenie de un paciente con difteria
E.Coli B
Se derivan cepas como REL606 y BL21
E.Coli C
diferencias morfológicas
E.Coli W
Aislada por Selman Waksman
recA, recB, recC, recD
Recombinación
rpsL(Str r)
Resistencia a estreptomicina
lacI q
Mutación constitutiva
Propiedades Generales de hospederos para clonación
Imposibilidad, Fertilidad, Sistemas de Modificación metilación-restricción, Sistemas de recombinación, sistemas de alfa-complementación
Imposibilidad
Se genera codón STOP. ambar (UAG), ocre (UAA)
Fertilidad
En celulas HFR, el factor F causan transferencia. Mutacion en tra provoca transferencia. Las cepas con factor F generan pili.
Sistemas de modificación-restricción
Evita intercambio genético, destruyendo ADN foráneo
Sistema de ADN metilasa
Metila residuos de C/A evitando degradación
Dam
metila residuos de A en GATC
Dcm
metila residuos de citosina en CC(A/T)GG
Que cepas siempre son dam+
recA-
¿Qué podría causar Dam o Dcm?
Afectar digestión de DNA clonado, afectar eficiencia de transformación, ocasionar mutagénesis
hsdR- resulta en?
fenotipo de restricción y metilación negativo
hsdS
deficientes en metilación
hsdR
codifica endonucleasa
hsdM
codifica metilasa
hsdRMS
subunidad del sitio reconocimiento
McrA, McrB
cortan metilcitosinas