Exam 2 Flashcards
(144 cards)
1
Q
Quelle bactérie :
cocci gram + ;
catalase positive ;
coagulase sur lame et en tube négative ;
furazolidone sensible ;
novobiocine sensible
A
probable Staphylococcus epidermidis
2
Q
Quelle bactérie :
cocci gram + ;
catalase positive ;
coagulase sur lame et en tube positive ;
furazolidone sensible ;
novobiocine sensible
A
Staphylococcus aureus
3
Q
Quelle bactérie :
cocci gram + ;
catalase positive ;
coagulase sur lame et en tube négative ;
furazolidone sensible ;
novobiocine résistante
A
Staphylococcus saprophyticus
4
Q
Quelle bactérie :
cocci gram + ;
catalase positive ;
coagulase sur lame et en tube négative ;
furazolidone résistante ;
novobiocine sensible
A
Micrococcus sp
5
Q
Test de l’Oxydase principe et réaction
A
Principe : Détecter enzyme cytochrome oxydase (chaine respiratoire aérobie, transporteur d’é)
Réaction : incolore –> bleu (oxydé) par la présence de cytochrome oxydase
réactif : tetraméthyl-p-phénlylènediamine rxn cytoc
6
Q
Oxydase types de résultats
A
(+) bleu : Non-entérobactérie aérobie ou ana falcultative (Pseudomonas, Neisseria, Moraxella, Vibrio…)
(-) : Entérobactéries anaérobie stricte (E. coli, Salmonella, Klebsiella) ou Staph, Micrococcus, Strep ß-hémo…
7
Q
Quels contextes rend le test de l’oxydase invalide ?
A
Attention* :
Invalide si MAC/SS (faux +) à cause de couleur colonie (doit utiliser GS ou chocolat)
Invalide si milieu + GLU (faux -) car inhibe cytoc
Détecte surtout bacilles gram (-)
8
Q
Test catalase détecte quoi ? Identifie quelles bactéries ?
A
Principe : Détecter enzyme catalase décompose le H2O2 (léthal si accumulé dans la bactérie) en H2O et en O2
Différencie :
Cocci gram + : Strep VS Entero (catalase -) VS Staph VS Micro (catalase +
Bacilles gram - : Corynbacterium, Bacillus, Listeria (catalase +) VS Lactobacillus (catalase -)
9
Q
Test de la catalase implique quelle réaction chimique ? Quels résultats possibles ?
A
Réaction : Le peroxyde 3% (ou 15% pour bactérie anaérobie) sur 3-5 colonies étalées (smear) sur une lame
(+) bulles < 30 sec :
Staphylococcus : (S. aureus, S. saprophyticus, S. epidermidis) ou
Microccus (ex. Micrococcus sp.)
(-) : pas ou très peu de bulles < 30 sec
Streptococcus (espèce selon le groupage)
10
Q
Qu’est-ce qui rend le test de la catalase invalide ?
A
Attention* :
Bactérie catalase faible (peu de bulles) < 30 sec est quand même catalase (-) mais oriente Enterococcus
Ne pas frotter GS car sinon probable catalase (+)
Ne pas utiliser anse de métal –>bâton de bois
Réactif périmé ou vieilles colonies : faux (-)
Pour Neisseria besoin de H2O2 30% (test de superoxol)
11
Q
Coagulase liée vs libre, quelle est la différence en termes de réaction avec la bactérie ?
A
Coagulase liée = fixée à la paroi bactérienne → provoque agglutination rapide (test sur lame avec billes de latex).
***Fixe directement le fibrinogène du réactif (souvent sur des billes de latex)
Coagulase libre = enzyme extracellulaire → forme un caillot dans le plasma (test en tube, 4-24h).
***Réagit indirectement avec le fibrinogène via la prothrombine :
La coagulase libre (présente dans le sérum) se lie à la prothrombine pour former une substance semblable à la thrombine. Ce complexe staphylothrombine, convertit le fibrinogène en fibrine et forme le caillot. Processus lent.
12
Q
Quelles bactéries on peut identifier avec les tests de coagulases liée/libre ?
A
(liée/libre):
(+) (+) : S. aureus (possible autre tho)
(+) (-) : S. lugdunensis
(-) (-) : SCN (S. saprophyticus, S. epidermidis
13
Q
Qu’est-ce qui rend les tests de coagulase invalides ?
A
Attention* :
Invalide si rxn d’agglutination avec le contrôle latex – vérifie puretée de la souche, maybe auto-agglutine
Toujours confirmer coag avec coag libre ! (prévaut sur liée)
Si staphylokinase = faux (-)
Plasma de lapin contient EDTA et ne peut être citraté – va coaguler si bactéries dégrade citrate (faux +)
14
Q
Sensibilité furazolidone (100 µg) , principale fonction/principe
A
Définition : Différentiation présomptif de Staphylococcus et Micrococcus
Principe : Bactérie inhibe ou résiste (antibio sur tapis de 0,5 MF), mesure le diamètre d’inhibition
15
Q
Quelles bactéries on peut identifier avec la sensibilité au furazolidone
A
≥ 15 mm (S) Staphylococcus… ex. S. aureus, S. epidermidis ; S. saprophyticus
≤ 14 mm (R) Micrococcus
16
Q
Sensibilité novobiocine (5 µg), principale fonction/principe
A
Définition : Différentiation présomptive de Staphylococcus saprophyticus
Principe : Bactérie inhibe ou résiste (antibio sur tapis de 0,5 MF), mesure le diamètre d’inhibition
17
Q
Sensibilité novobiocine (5 µg), quelles bactéries on peut différencier ?
A
> 16 mm (S) Staphylococcus coagulase (-) autre que saprophyticus (ex. S. epidermidis coag (-) MAN (+))
≤ 16 mm (R) S. saprophyticus
18
Q
Groupage de Lancefield
A
Test d’agglutination Streptococcus (préalablement cocci gram + catalase -, colonies ß hémolytiques)
Basée sur la nature antigénique des polysaccharides de leur paroi cellulaire, appelés antigènes de groupe C.
Comment ? latex Ac qui réagit avec Ag extrait de bactérie (2 gtte de R1, 5 colonies, R2, R3, puis mix A, C, G, etc)
19
Q
Tests pour étude du métabolisme des glucides
A
GLUCOSE = principale source d’énergie bactérie
Grande ∆ métabo glucides (Glu, maltose, sucrose, lactose, etc, un ou plusieurs)
ex. le genre Neisseria
Pour différencier le métabo glucides = sert comme test d’ID (Les tests de Glu c’est pour les entérobactéries (BGN))
20
Q
Un Bouillon + glucide, ça détecte quoi ?
A
Détecte les acides organiques et gaz due à dégradation du sucre à l’étude (glucose, lactose, maltose…)
21
Q
Un Bouillon + glucide, le milieu contient quoi ?
A
- [le glucide* à l’étude] bouillon = 1%
- Indicateur pH (1 des 3 exemples ici) :
Rouge phénol (rouge)
Bromocrésol pourpre (poupre)
Bleu de bromothymol (vert) - Tube de Durham (bout de flacon en verre pour voir si bactérie peut produire gaz CO2 ou H2)
22
Q
Que signifie un bouillon glucide entièrement jaune ?
A
Fermentation du glucide → production d’acides organiques (pH acide).
23
Q
Que signifie un bouillon glucide rouge, pourpre ou vert selon l’indicateur ?
A
PAS de fermentation → le milieu devient ou reste alcalin (souvent dû à l’utilisation de peptides avec production NH3).
24
Q
Si des bulles sont présentes dans le tube de Durham mais pas dans le bouillon glucide, que peut-on conclure ?
A
il y a production de gaz → la bactérie est gaz +.
25
Quelle interprétation si bouillon glucide, que signifie une trace de jaune seulement en surface du bouillon ?
Fermentation uniquement en conditions aérobies → production d’acide en présence d’oxygène.
26
Milieu Kigler, différencie quelles bactéries ? Le milieu contient quoi ?
Définition : Différencier les entérobactéries selon leur métabo du Glu, Lac, gaz et H2S
Milieu contient :
* Glu 0,1%
* Lac 1% (10x + que Glu pour forcer bactérie a utiliser + rapidement Lac)
* Peptones (dérivés de protéines) utilisés si la bactérie n’utilise pas le Lac
* Indicateur : Rouge de PHÉNOL
* Citrate ferrique et thiosulfate de Na
27
4 critères pour Kigler TOUJOURS (essaye de respecter l’ordre aussi). Scénarios possibles et ex. de bactéries :
Culot/pente/gaz/H2S :
- Jaune/Jaune/gaz+/H2S- (ex. E. coli)
- Jaune/Jaune/gaz-/H2S- (ex. Klebsiella)
- Jaune/jaune/gaz-/H2S+ (ex. Proteus vulgaris)
- Jaune/rouge/gaz-/H2S+ (ex. Salmonella, Proteus mirabilis)
- Rouge/Rouge/gaz-/H2S- (ex. Shigella, Pseudomonas)
28
V ou F. La bactérie dégrade autant le lactose que le glucose
F. Bactérie mange toujours le Glu tjrs avant le Lac ! et si aucun des deux elle va utiliser les Pep
H2S dégradé = Glu+ PAR DÉFAUT
29
Pourquoi une bactérie Glu+ pourrait avoir un culot Kligler rouge ?
Si Glu+, le milieu devient jaune au complet, mais si incapable de chercher le lactose, elle va utiliser des peptones (en aérobiose!!) = alcaliniser milieu = revire au rouge de départ Lac- (car neutralise l’acide causé par dégradation de Glu)
30
Comment distinguer une bactérie Glu+ Lac- d'une bactérie Glu- Lac- si les deux peuvent avoir un culot rouge/ pente rouge si la bactérie Glu+ utilise les peptones ?
un test supplémentaire de glucose (OF-glucose; bouillon glucose) ou de lactose (MAC, ONPG) pour confirmer si la bactérie fermente le glucose vs lactose.
31
Milieu OF-glucose : principe du tube OF-Glu et ça différencie quoi ? Et que contient le milieu
Définition : Différencier bactéries oxydatives des fermentatives selon leur métabo/dégradation de glucose en tube (VS tube contrôle sans glucose, only peptones)
Le milieu contient :
* Glu 1%
* Peptones (< 0,2%!!) pour que produits alcalins ne neutralisent pas acides de dégradation sucres
* Indicateur de pH (Bleu de bromothymol)
32
OF-Glucose, résultats possibles à l'oeil :
- Jaune (Acide) = dégradation Glu (après dép si en surface vs tout le milieu)
- Vert = dégrade ni peptone ni glucose
- Bleu (Alcalin) = dégradation Peptones (QU’EN AÉROBIOSE!!! Jamais en ana!!!)
33
V ou F. La couleur bleue dans le tube OF-Glucose, obtenue grâce au bleu de bromothymol, indique un environnement anaérobie où la dégradation des peptones ne nécessite pas d'oxygène.
Le Bleu ne se produit qu’en aérobie (dégradation peptones needs O2), jamais en anaérobie !! donc impossible d'avoir par ex. milieu jaune dans le tube et bleu en surface. !
Bleu de bromothymol = jaune si pH acide, vert à pH neutre et bleu à pH alcalin
34
Quelle interprétation pour un tube OF-Glucose jaune en surface ?
Jaune (+) = oxydation du glucose
Résultat : (O+F-) = Oxydatif, non-fermenteur, strictement oxydative
Ex. Pseudomonas
35
Quelle interprétation pour un tube OF-Glucose jaune au complet ?
Oxydation ET fermentation glucose
(O+F+) Fermenteur facultative, car utilise le Glu aé/ana)
Ex. Enterobacteriaceae (souvent aéro-ana facult)
36
Quelle interprétation pour un tube OF-Glucose vert et/ou avec une surface bleue ?
Ni Glu Ni peptones = all vert (Dégrade peptones si top bleu)
Résultat : (O-F-) Inerte, car Incapacité dégrader Glu, donc survit mais difficile
Ex. Moraxella (tout le tube vert)
Ex. Alcaligenes (utilise peptones en aéro, donc top bleu bottom vert
37
Les types respiratoires des bactéries
1- Aérobie strict (18-21 % d’O2)
2- Anaérobie strict (O2 < 1 %)
3- Anaérobie facultatif (optimal si O2)
4 - Anaérobie aérotolérante (optimal sans O2)
5 - Microaérophile (nécessite minimum O2 : 3-9 %)
38
Milieu TSI (Triple Sugar Iron Agar, principe et contenu
Principe : Identifier les entérobactéries selon leur métabo de Glu, Lac, Sucrose(Saccharose), gaz et H2S
Milieu contient :
* Sucrose 1%
* Lactose 1%
* Glucose 0,1%
Note : besoin d'un milieu complémentaire pour distinguer si fermenter sucrose ou lactose
39
Quelle utilité du milieu TSI ? Quels résultats possibles ?
Ça aide à retracer une contamination alimentaire ; distinguer bactérie patho vs commensales
- Pente jaune (acide) : Lac+ et/ou Sucrose+ (MAC complémentaire pour conclure si lac ou sucrose!!)
- Pente rouge (alcaline) : Lac- et/ou Sucrose-
40
Épreuve Voges Proskauer (VP) ou VITEK ; principe et contenu/réactifs du milieu :
Mettre en évidence production d’acétoïne (intermédiaire métabo) suite à fermentation glucose
- Peptone
- Glucose
Ajout de 2 réactifs DANS L’ORDRE pour détecter acétoïne
* Alpha-naphtol
* KOH 40%
41
Quelle réaction produit l'acétoïne ? avec quel test est-il détecté ?
Glucose –-> Ac. pyruvique --> acétoïne (lequel s’oxyde en diacétyle et réagit avec créatinines --> rouge-rose)
Test VP :
VP+ (rouge-rose) = Ex. Klebsiella
VP- (incolore) = Ex. E. coli
42
qu'est-ce qui rend le test VP invalide ? ou risques d'erreurs ?
- T incubation insuffisant ou mauvais pH
- mauvais ordre réactif (KOH avant l'acide alpha-naphtol)
- colonies trop vieilles
- contamination métabo alcalin
43
Épreuve ONPG, quelle différence avec le lactose ?
orthonitrophényl-galactopyranoside = analogue du Lac !
L'ONPG peut pénétrer la cellule sans perméase!
44
Quelles enzymes sont nécessaires pour que le lactose pénètre la cellule et soit scindé en monosaccharides ?
ß-galactoside-perméase : permet au lactose de pénétrer dans la cellule
ß-galactosidase (intracellulaire) : scinde le Lac --> Glu + Galactose --> Libère ortho-nitrophénol (jaune)
45
À quoi sert le test ONPG ?
Pour confirmer si LAC + ou LAC – ou LAC « lente » (en complément avec une MAC)
46
V ou F. Le test ONPG fait intervenir la ß-galactosidase et non pas la ß-galactosidase perméase
V
47
Quels résultats qu'il est possible de voir avec le tube ONPG ?
Jaune = LAC(+) : ß-galactosidase perméase + ß-galactosidase, intégrer Lac + scinde en monosaccharides
Incolore = LAC(–) : absence de ß-galactosidase
Jaune, donc LAC(+), mais MAC LAC(-) = LAC « lente » : ß-galactosidase perméase (-), dégradation mais PLUS LONG
48
Quels situations pourraient rendre un test ONPG invalide ?
- ONPG expiré
- Mauvaise T incubation pour la ß-galactosidase
- culture bactérienne trop vieille
- etc
49
Protéolyse de la gélatine - méthode de Frazier - Principe
Détecter la gélatinase (enzyme exocellulaire, sécrétées par bactérie dans l’enviro)
Protéines de la gélatine est scindée --(enzymes exocellulaires)--> a.a (soluble = zone claire)
Milieu contient :
Gélatine
Ajout du Réactif révélateur (HgCl2 + HCl) après incubation (pénètre pendant 20 min)
50
Résultats possibles de voir avec la méthode de Frazier (protéolyse de la gélatine)
- Zone claire autour de la croissance (+): gélatine hydrolysée en acides aminés = gélatinase(+)
- Zone opaque autour de la croissance (-): gélatine non-hydrolysée = gélatinase(-)
51
Cause d'erreurs d'un test de Frazier
Ensemence pastille au lieu d’une strie ! Et tjrs contrôle positif, et cause d’erreur si trop short incubation
Dans la galerie API = technique KOHN donc charbon végétal dans disques de gélatine, si dégradé = devient noir! pas la même réaction
52
Les décarboxylases, quelles enzymes on évalue ?
Lysine (LDC)
Ornithine (ODC)
Arginine (ADH)
53
Principe du test des décarboxylases (réaction)
Décarboxylase agit sur le groupement carboxyle des protéines:
- Si COOH est attaqué, le groupement NH2 restant donne pH alcalin! et Libère du CO2
Lysine –(LDC)--> cadavérine
Ornithine –(ODC)--> putrescine
Arginine –(ADH)--> ornithine
54
Que contient le milieu de test des décarboxylases ?
Milieu (bouillon de Moeller contient :
- Glu
- a.a (Lysine ou ornithine)
- Bromocrésol pourpre
55
Quels résultats possibles de voir avec le test des décarboxylases ? ex. avec bromocrésol pourpre comme indicateur
- Violet (pH alcalin) : LDC+ ou ODC+ (Glu dégradé jaune, mais enzyme dégrade a.a donc redevient violet)
- Jaune (pH acide) : LDC- ou ODC- (Glu dégradé donc jaune)
- Violet MAIS LIMPIDE : Réaction invalide à contrôler (mauvais ensemencement/ pas de croissance)
56
Qu'est-ce qui rend le test des décarboxylases invalide ? ou risques d'erreurs ?
Non-respect des conditions anaérobies :
Rxn en anaérobiose !! donc ajout d’huile minérale à la surface du tube
57
Les désaminases comportes 2 tests, lesquels ? Sur quel principe reposent-ils ?
test PAD
Test TDA
test de l’indole est un test distinct de dégradation du TRP
Principe : Désaminase agit sur le gr amine des protéines
Si NH2 est attaqué, le groupement COOH donne pH acide ! Mais Nécessite ajout de réactifs selon le test !
58
Explique le test PAD (distingue quelles bactéries, nécessite quels réactifs, quels résultats on peut obtenir)
Distingue :
entérobactéries (-) VS autres (ex. Proteus) (+)
Milieu contient : Phe + ajout FeCl3 après incubation
Si bactérie possède Phe désaminase :
Phénylalanine –(PDA)--> acide phénylpyruvique
Chamois = PDA(-)
Vert = PDA(+)
59
Explique le test de l'indole (distingue quoi, nécessite quels réactifs, quels résultats on peut obtenir)
Si le Trp a été dégradé par la tryptophanase = le Kovac/James se lie à l'indole produit et produit anneau de surface couleur ROSE :
Anneau Rouge en surface = indole(+)
Incolore ou anneau jaunâtre/brun = indole (-)
60
Différence des réactifs dans les tests de désaminases PDA et indole
Dans le test PDA désaminase, le FeCl3 se lie à l'acide phénylpyruvique et passe du chamois au verte, tandis que dans le test de l'indole désaminase, le Kovac/James se lie à l'indole et passe du jaune/brun au rose
61
Qu'est-ce qui rend le test de l’indole invalides ? ou risques d'erreurs ?
Attention pour l'indole : si lecture trop tardive ou si milieu +Glu ou +NO3 inhibe indole !! = faux (-)
Dans les deux tests : Rxn en aérobiose !! Ensemence la pente !!
62
Comment détecter la présence d’une lécithinase
Une gélose aux œufs détecte la léthicinase qui dégrade la léthicine
63
La gélose aux jaunes d'oeufs, principe et résultat possible
Contient de la léthicine), triglycérides et lipoprotéine
Si bactérie possède léthicinase : Léthicine –(léthicinase)-->diglycérides
*Diglycérides = insolubles dans le milieu = précipité autour de strie sur gélose : léthicinase (+)
64
65
Test de réduction des nitrates, principe
Définition : Détection de l’enzyme nitrate-réductase en vérifiant si nitrates sont réduits en nitrites
Principe : Nitrate NO3 –(nitrate reductase) --> Nitrite NO2 –(dénitrification) --> Azote N2
66
Quels sont les réactifs relatifs au test de nitrates
Tubes avec 2 réactifs :
Acide sulfanilique (RA)
Alpha-naphtylamine (RB)
Step 1 : RA + RB
Si produit incolore =
Step 2 : Poudre de Zn
67
Écris moi la couleur des composés possibles dans les étapes 1 et 2 du test de nitrates
Step 1 : options
NO2⁻ présent + RA + RB = Rouge (+)
NO3⁻ présent = incolore
N2 présent = incolore
Step 2 : options
NO3⁻ présent + Zn = NO2- +RA +RB = rouge (-)
N2 présent + Zn /+RA +RB = incolore (+)
68
Concernant le test de nitrates, interprète un tube Rouge AVANT la poudre de Zn
1. Rouge avant le Zn = nitrate-réductase (+)
69
Concernant le test de nitrates, interprète un tube incolore qui devient Rouge après le Zn
2. Rouge après le Zn = nitrate encore présent → la bactérie n’a PAS réduit les nitrates, le Zn a travaillé pour la bactérie → nitrate-réductase (-)
70
Concernant le test de nitrates, interprète un tube qui reste incolore même après poudre de Zn
2. Incolore après le Zn = nitrate-réductase (+), car tout viré en N2
Le Zn ne peut pas faire le travail que la bactérie a fait trop vite haha
71
Qu'est-ce qui rend le test de réduction des nitrates invalide ? ou un risque d'erreurs ?
Il Ne faut pas ajouter de Zn pour les diplocoques Gram (-)
Fie-toi uniquement à la première étape (réactifs A et B), car l’ajout de zinc fausserait l’interprétation du test pour ces espèces spécifiques. (Elles sont nitrate reductase positive mais ne produisent pas de nitrites)
72
Test de Citrate de Simmons
Définition : Teste capacité bactérie à utiliser le citrate comme seule source de carbone (entérobactéries)
Principe : Si utilise le citrate = produits alcalins donc pH vert (neutre) --> pH bleu (alcalin)
73
Résultats possibles suite au test de citrate de Simmons
Pente bleue + croissance : Citrate + (ex. Klebsiella)
Vert + absence de croissance : Citrate – (ex. E.coli)
74
Qu'est-ce qui rend le test de réduction de citrate de Simmons invalide ? ou un risque d'erreurs ?
Rxn en aérobiose sur la pente (ne pas piquer jusqu’au fond) / Bleu de bromothymol vert si neutre
Ne pas racler le milieu lorsque prélève des colonies ni trop gros inoculum (faux +)
75
Hydrolyse de l’urée, principe et le milieu contient quoi ?
Principe : Capacité à dégrader l’urée en NH3 (produit alcalin) et en CO2 via uréase (urée + 2H20 2NH4 + CO32-
Le milieu :
- urée
- sels nutritifs
- un indicateur de pH (rouge phénol)
76
Le test d'hydrolyse de l'urée identifie quelles bactéries ? On peut voir quels types de résultats ?
Identifie : Bactérie possèdant uréase (souvent entérobactéries comme Proteus, ou identifier H. pylori)
pH acide --> alcalin (rouge phénol --> Fuschia) : uréase (+) (ex. Proteus, Klebsiella, Helicobacter pylori)
pH Inchangé --> couleur chamois : uréase – (ex. E. coli)
77
Test de DNase, quel principe et le milieu contient quoi ?
Évalue capacité à dégrader ADN ou pas
Milieu avec ADN et indicateur vert de méthyle (l’indicateur est un cation qui se lie à ADN(-))
78
Le test de DNase sur gélose, ça identifie quelles bactéries ? Quels résultats il est possible de voir ?
Identifie les bactéries possèdant désoxyribonucléase qui produit de l'ADN(-) dégradé en nucléotides qui ne lie pas le vert de méthyle = zone claire autour de la strie sur la gélose
Zone claire : DNase (+) (ex. S.aureus, Serratia marcescens, Enterobacteriaceae, Moraxella catarrhalis)
Zone opaque : DNase (–)
79
Hydrolyse de l’esculine en présence de bile (milieu BEA), principe et que contient ce milieu
Définition : Évalue capacité à dégrader l’esculine (glycoside) en esculetine et Glu en présence de 40% de bile
Milieu contient esculine + sels biliaires + fer
80
L'hydrolyse de l’esculine permet d'identifier quelles bactéries ?
Soit les bactéries qui peuvent hydrolyser l’esculine en présence de bile (sels biliaires) :
- Bactéries entériques
- Streptococcus groupe D (possède l’esculinase (autre nom : ß-glucosidase)
Réaction :
1. Esculine --> Esculetine + glucose
2.1 Esculetine + fer --> précipité noir = Esculine (+)
2.2 Si pas de ∆ de couleur milieu/précipité = Esculine (-)
Donc même si croissance, mais pas de noir = esculine (-)
81
Hydrolyse de l’hippurate, principe et que contient le milieu ?
Détecter bactérie capable de décomposer hippurate de Na en glycine et ac. benzoïque via hippurase
Bactéries types : Streptococcus groupe B, enterococcus, etc.
1. Hippurate de sodium + H₂O –(hippurase)→ Acide benzoïque + Glycine
2. Glycine + nihydrine --> NH3 + CO2 libéré
3. Si présence de NH3 --> ∆ couleur pourpre
82
V ou F. Le milieu de l'hydrolyse de l'hippurate contient intialement de l'hippurate de Na et de la ninhydrine
F. Milieu contient hippurate de Na et c'est après incubation ajoute ninhydrine !
83
Quels sont les résultats possibles avec le test de l'hydrolyse de l'hippurate
Pourpre : Hippurate hydrolysée en glycine qui est détectée par ninhydrine = Hippurase (+)
Incolore ou Aucun changement de couleur = Hippurase (-)
84
C'est quoi une galerie API 20E ?
La galerie API 20E est un système d'identification biochimique utilisé pour les bactéries entérobactéries (Enterobacteriaceae) et certaines autres bactéries à Gram négatif et autres bacilles non-fastidieux (20 microtubes)
85
V ou F. il ya 20 tests dans la galerie API 20E
F. 20 tubes et 23 tests biochimiques
- GLU = 2 tests (fermentation + gaz)
- H2S/IND = 2 tests
- Le reste = 1 test chacun
86
Sous quelle forme est le substrat de chaque test dans la galerie API 20E
- Série de microtubes contenant substrat déshydraté qui sera reconstitué avec la suspension bactérienne (et déposé préalablement dans un bain d’eau).
87
V ou F. La gélose chocolat ne pousse jamais en aérobie
V. Pour la choco = CO2 et en ana (autrement dit, en environement anaérobie, il y a du CO2) !! la gélose chocolat il n’a rien qui pousse en aérobiose !!
88
V ou F. Une bactérie capnophile peut pousser en ana, que ce soit sur choco ou GS
V. Une bactérie capno peut pousser en ana car il y a du CO2 (que ce soit GS ou choco)
Mais une bactérie en ana peut pas être nécessairement capnophile !!
89
Stérilisation
Destruction de toutes formes de vie microbienne : Bactéries et spores bactériennes
90
Désinfection
Élimination des agents pathogènes végétatifs présents sur un support inerte (objet)
Utilisation d’agents chimiques ou physiques (rayons UV, vapeur ou eau bouillante)
Les spores ne sont pas détruites
91
Décontamination
Élimination des agents pathogènes végétatifs sur un support inerte ou sur les tissus
Utilisation d’agents chimiques
Avant une ponction veineuse (nettoyage antiseptique)
Décontamination de votre place de travail (PreEMPT)
92
Asepsie :
Mesures qui empêchent l’apport de microorganismes exogènes
Travailler près de la flamme
Flamber l’ouverture des tubes
Ne pas parler au-dessus des boîtes de Pétri ouvertes !!
Manipuler le matériel dans une hotte biologique
93
Antisepsie :
Élimination des agents pathogènes sur les tissus vivants
Avant une ponction veineuse par exemple
94
Bactéricide
Agent qui détruit les bactéries
Produit utilisé pour décontaminer votre surface de travail
Savon pour le lavage des mains
95
Bactériostatique
Agent qui empêche la multiplication des bactéries sans les tuer
Action de certains antibiotiques
96
Différence entre Fongicide,
Virucide, Sporicide
Fongicide: agent qui détruit les champignons
Virucide: agent qui détruit les virus
Sporicide: agent qui détruit les spores
97
Conditions affectant l’efficacité des agents microbiens VIP
1. Concentration initiale des microorganismes et durée de l’exposition
2. Composition de la population microbienne
3. Concentration de l’agent antimicrobien
4. Température et pH
5. Environnement local
98
Destruction des microorganismes par procédés physiques (4) :
1. La chaleur
2. Le froid (pas le meilleur moyen)
3. La filtration
4. Les rayonnements
99
Procédés physiques par la chaleur (4 procédés)
- Autoclave (cocotte is best)
- Four Pasteur
- Ébullition+ébouillantage
- Pasteurisation
100
Différences entre l'autoclave et le four pasteur
Autoclave = Chaleur humide sous forme de vapeur sous pression
Four Pasteur = Chaleur sèche
Autoclave = 121 °, 15 lbs de pression de vapeur, Détruit tout microbe, incluant spores, en dénaturant protéines : pour déchets bio, matériel et milieux
Four pasteur = 160˚ 2h : pour objet, verre, poudre, huile
101
Indications de sécurité et de bon fonctionnement de l'autoclave :
- Ne peut être utilisé pour: Matériel thermolabile (plastique, caoutchouc) ; métallique qui rouille ; Subs thermolabiles (urée, sucres)
- Ne pas surcharger / min dist
- Bouchons dévissés !
- Ballon 2/3 max, respect 18 min 500 ml et 3 min +500 ml
102
Les CQ de l'autoclave vs four Pasteur
CQ autoclave :
Vérification de la température et de la pression (enregistrées pendant le cycle) :
1. Contrôle chimique : Un papier adhésif qui change de couleur à 121 °C
2. Contrôle biologique : Spores de Bacillus stearothermophilus (résiste chaleur) qu'on fait pousser après --> si aucun pousse = succès
CQ four pasteur :
Contrôle de qualité: Bacillus subtilis (contrôle biologique seulement) !
103
Causes d’un échec de stérilisation à l'autoclave
* Température < 121° C
* Pénétration incomplète de la vapeur dans la chambre
* Évacuation incomplète de l’air de la chambre
* L’entassement du matériel
104
Destruction microbes par le procédé physique par le froid, avantages et inconvénients
- Congélation kills many microorganismes
- Ne peut être utilisé comme moyen de destruction des bactéries
- Les virus survivent bien à une basse température telle que – 600C
105
Destruction microbes par le procédé physique par la chaleur par Ébullition et ébouillantage, avantages et inconvénients
- Utilisé pour détruire les bactéries pathogènes végétatives, la plupart des virus/mycètes en 10 minutes
- Ne garantit pas la stérilisation
- Pour des virus de l’hépatite (30 min) et pour certaines endospores (20h…)
106
Destruction microbes par le procédé physique par la chaleur par Pasteurisation, avantages et inconvénients
- Utilisé pour détruire les agents pathogènes présents dans les produits laitiers
- Ne détruit pas les spores bactériennes
Comment ?
- Un chauffage rapide suivi d’un refroidissement
- Chauffage à 72 °C /15 sec
- Refroidissement à 10 °C
107
Différence entre four Pasteur et pasteurisation
Le four de Pasteur est un appareil de stérilisation à chaleur sèche utilisé en labo, tandis que la pasteurisation est un procédé de conservation des aliments par chauffage modéré (suivi de refroidissement) sans détruire tous les microbes (non stérile)
108
Destruction microbes par le procédé physique par La filtration
Éliminer les microorganismes plus gros que les pores du filtre utilisé:
A. Filtre millipore
B. ESB
109
Avantages et inconvénients de la filtration (destruction physique des microbes)
- Stériliser produits thermolabiles en solution (urée et sucres ajoutés aux milieux de culture)
- Laisse passer les petits microorganismes (Mycoplasma, Chlamydia, virus)
110
Avantages principaux des ESB en termes de protection
- éch potentiellement contaminés
- filtres HEPA bloque particules de 0,3 µm
- Protection tech + enviro
- TOUS les spécimens biologiques potentiellement infectieux sont manipulés dans EBS
- Certaines EBS protègent également le matériel à l’intérieur
111
Types d'ESB
- protect user + enviro : I [pas de filtre HEPA pour le matériel, pas de rideau d’air, mais air sortant filtré]
- protect user + enviro + matériel II :
A1 (pas use prod chimic volatil)
A2 (ptite qté prod chimic/radioactif)
B2 (prod chimic/radioactif) [filtre HEPA qui créé un rideau d’air et filtre pour l’air sortant]
- travail patho de GR4 : III [filtre HEPA + gant milieu hermétique]
112
Les groupes de risques (relatifs au niveau de confinement)
Groupe de risque 1 (faible pour individu/communauté, peu susceptible d’infecter)
Groupe de risque 2 (risque modéré individu et faible pour communauté)
Groupe de risque 3 (risque élevé pour individu et faible pour communauté
Groupe de risque 4 (risque élevé pour individu et élevé pour communauté) ESB III
113
Destruction des microorganismes par procédés physiques par Les rayonnements
- Rayons UV (longueur d’onde 260 nm))
- Rayons gamma (Radiation ionisante (Cobalt 60))
114
Avantages et inconvénients des Rayons UV (longueur d’onde 260 nm))
* Action sur l’ADN
* Très létales mais ne pénètrent pas bien le verre, la poussière, l’eau
* Les spores résistent
* Utilisé pour la désinfection des surfaces de ESB et des salles d’opération
* Ex. infections nosocomiales résistantes en CH on utilise rayonnement aussi !
115
Avantages des Rayons gamma (rayon gamma Cobalt 60)
* Action sur l’ADN
* Excellent agent de stérilisation ; bonne pénétration dans les objets
* Utilisé pour stériliser : antibiotiques, médicaments, matériel médical (seringues, fil)
116
Les agents chimiques utilisés pour détruire les bactéries pathogènes sur les objets inanimés sont appelés :
a) fongicides
b) désinfectants
c) antiseptiques
d) antibiotiques
e) agents bactériostatiques
b) désinfectants
117
Parmi les techniques de stérilisation suivantes, laquelle recommande-t-on pour la préparation des solutions de glucides ?
par la filtration (car thermolabiles)
118
V ou F. Un ESB assure la protection de l’usager et de l’échantillon et possède essentiellement les mêmes spécifications qu’une hotte à produits chimiques
V
119
1- Quel agent peut être incorporé à un milieu de culture afin de permettre l’inhibition de la croissance bactérienne d’un bacille Gram négatif et de faciliter l’isolement d’une bactérie Gram positif ? a. pénicilline b. peptone c. violet de cristal d. sels biliaires e. colistine
Colistine !! (pense à CNA)
120
Une bactérie qui a des colonies incolores sur MAC et une pente/culot acide sur TSI fermente quoi ?
lac - car mac incolore
GLU + et SUCROSE +
121
Quel milieu utilise le HgCl2+HCl et lequel utilise le FeCl3 ?
La méthode de Frazier (HgCl2 + HCl)
Le test de PAD (FeCl3)
122
Quels milieu présentent un changement de couleur sans avoir d'indicateur ?
oxydase
catalase
coagulase
sensibilité aux antibio
test groupage
ONPG (ortho-nitrophénol)
Métho de Frazier (HgCl2+HCl)
Test TDA (indole) (kovac)
Gélose oeufs
Nitrates (acide sulfanilamide rxn nitrites et a-napthol rxn avec nitratres)
Esculine (fer + esculetine = noir)
Hippurate (nihidrine)
123
Les bactéries produisant l'enzyme phenyl decarboxylase décarboxyle le phenylalanine en...
acide phénylpyruvique (qui réagit avec FeCl3 pour donner couleur verte)
124
Dans quelle test on utilise l'hydroxyde de potassium ?
dans le test du VP
a-naphtol
KOH 40%
125
quel test utilise l'a-naphtol et quel test utilise l'a-naphtylamine
a-naphtol = VP
a-naphtylamine = Nitrites !
126
Quelle enzyme est repsonsable de la conversion de Phe en acide phénylpyruvique ?
PDA (Phe décarboxylase)
127
Quel réactif vérifie si les nitrates sont réduits en nitrites ?
acide sulfanilique (réagit avec les nitrites)
... et lorsque mixed avec alpha-naphtylamine ça fait rouge !
128
Quels sont les concentrations en sucres dans le TSI ?
1% LAC
1% Sucrose
0,1% Glu
129
Indicateur pH dans le test de l'uréase
Rouge de phénol (rxn avec NH3 et CO2)
130
Dans quels milieux une réaction alcaline = résultat (+) ?
LDC-ODC-ADH
Uréase
Citrate de Simmons
131
V ou F. Impossible de voir le résultat culot rouge et H2S+ dans un tube Kligler
V
132
Tous les énoncés suivant sont vrai à propos de l'oxyde d'éthylène sauf 1 :
a) gaz stérilisant
b) mode action oxydation lipides membranes
c) stérilise boite de pétri
d) toxique
e) détruit spores
il n'oxyde pas les lipides
133
Quel désinfectant est habituellement recommandé pour décontaminer les endroits du virus de l'hépatite B ?
Solution d'hypochlorite ou PreEmpt
sinon : alcool 70%
en général, les plus forts aussi fonctionnent on s'entend
134
L'iode et le chlore sont quoi ?
des halogènes
135
À quelle fréquence doit être renouvelée la solution d'hypochlorite en laboratoire ?
chaque semaine
136
La stérilisation du matériel dans un four Pasteur se fait généralement à 160˚ pendant...
120 min
137
Un flacon de 1000 mL de gélose doit être stérilisée à l'autoclave à... T˚-temps
121˚ pendant 21 minutes (18 min + 3 min supp)
138
La meilleure façon de stériliser les glucides ou les solutions d'urée c'est comment ?
par filtration (millipore)
139
les agents chimiques utilisés pour détruire les bactéries sur les objets inanimés sont appelés...
désinfectants
140
Quelle utilité des composés phénolés en laboratoire ?
Mycobacterium tuberculosis
141
Lors d'un déversement d'un bouillon de bactéries on privilégie l'alcool 70% ou une solution d'hypochlorite 1% ?
Hypochlorite 1% pendant 30 min ! ou PreEmpt 5 min
142
V ou F. des colonies isolées rendent le test de sensibilité aux antibiotiques invalide
V
143
Pourquoi un tube OF-Glucose tout vert ne veut pas nécessairement prouver que la bactérie est inerte ? (pas de fermentation de Glu ni de pep)
Tout vert = aucune acidification → O⁻ F⁻.
Vert avec surface bleue = aussi O⁻ F⁻, le bleu est artéfactuel (pas lié au glucose).
un tube uniformément vert peut laisser croire à une lecture trop rapide ou un test mal fait, alors que le bleu en surface confirme que l'oxygène est bien présent, donc que le test est valide.
144
Explique test de TDA et PDA
TDA (test de la tryptophane désaminase)
Substrat : Tryptophane
Produit : Acide indolypyruvique
Réactif : FeCl₃
Résultat positif : Brun-rouge
PDA (test de la phénylalanine désaminase)
Substrat : Phénylalanine
Produit : Acide phénylpyruvique
Réactif : FeCl₃
Résultat positif : Vert (vert foncé/olive)
