Examen 2 Flashcards
(177 cards)
1
Q
Qu’est-ce que la compétence d’une bactérie?
A
La compétence d’une bactérie est sa capacité à incorporer l’ADN étranger du milieu environnant dans son milieu intracellulaire
2
Q
Qu’est-ce qui peut influencer la compétence de bactéries ainsi que la transformation?
A
Les conditions physico-chimique
- Stade de croissance
- Valeur nutritive du mileu
- Degré d’aérobie
- Présence de cations divalents
3
Q
Dans quel stade de croissance doive se trouver les bactéries pour une transformation obtinmale?
A
Croissance exponentielle
4
Q
Quel type de transformation a-t-on effectué dans le laboratoire?
A
Transformation par choc thermique
5
Q
Comment est définie la méthode du choc thermique?
A
Elle est définie comme une méthode chimique mais elle comprend un paramètre physique : les changement rapide de température
6
Q
Quelle méthode est uniquement physique pour la transformation?
A
L’électroporation
7
Q
Qu’est-ce que l’électroporation?
A
Elle consiste à l’imposition brève d’un courant électrique aux bactéries, ce qui modifie les propriétés électriques de leur paroi, ce qui permet de créer des pores
8
Q
Quelle est l’espèce bactérienne de choix pour la transformation?
A
E. Coli
9
Q
Que permet un marqueur de sélection?
A
Permet de savoir quelle cellules bactériennes ont incorporé une copie du vecteur de clonage
10
Q
Quel marqueur de sélection a été employé lors du laboratoire?
A
Gène de résistance à l’ampicilline
11
Q
Quelle protéine code le gène de résistance à l’ampicilline?
A
b-Lactamase
12
Q
À quoi sert le gène de criblage?
A
PErmet de différencier les cellules seulon le types de vecteurs qu’elles ont intégré. Selon une caractéristiques, souvent la couleur
13
Q
Quelle est la méthode de criblage utilisé lors du laboratoire?
A
Par le système de complémenttion de la b-galactosidase
14
Q
Comment fonctionne le système de complémenttion de la b-galactosidase?
A
- La souche de bactéries utlisé possède une mutation dans le génome pour le gène LacZa de l’opéron Lac, ce qui rend inactif l’enzyme b-galactosidase.
- Pour réactiver l’enzyme, leplasmide doit pouvoir fournir le peptide a qui est défectueux
- Par contre, quand on insère un gène dans SCM, ça brise la transcription du gène
15
Q
Quel est le substrat de l’enzyme b-galactosidase?
A
X-gal
16
Q
Quels sont les 2 types de colonies que l’on a pu voir sur les géloses?
A
Blanches : ont un vecteur qui contient l’insert
Bleues : ont un vecteur qui ne contient pas l’insert
17
Q
Pourquoi faire une incubation avant le choc thermique de la transformation?
A
PErmet de s’assurer que les cellules bactériennes soient en phase exponentiell
18
Q
En quoi consiste le choc thermique?
A
30-45 sec dans le bain marie à 42C puis 5 minutes sur glace immédiatement après
19
Q
À quelle température se trouve le bain marie pour le choc thermique?
A
42
20
Q
Qu’est-ce que le bouillon SOC
A
C’est un milieu de culture riche utilisé pour favoriser la récupération des bactéries après le choc thermique
21
Q
À quel moment doit être utilisé le bouillon SOC?
A
Suite au choc thermique pour permettre aux bactéries de se remettre du choc
22
Q
QU’est-ce que l’étape de la préparation d’ADN?
A
Il s’Agit de l’extraction de l’ADN plasmidique d’une population de bactéries
23
Q
Quelles sont les 3 différentes techniques de l’extraction de l’ADN plasmidique?
A
- Mini-préparation
- Midi-préparation
- Maxi-préparation
24
Q
Quelles est la majeure différence entre les différentes techniques de préparation de l’ADN plasmidique?
A
La quantité de bactéries au départ de l’extraction et du volume de réactifs utilisés
25
Qu'est-ce que la RNAse et quel est son rôle?
Permet la dégradation d'ARN de petite taille
26
Pourquoi il est important de dégrader les molécules d'ARN?
Car elles peuvent cacher des fragments d'ADN sur un gel d'agarose
Elles nuisent à l'analyse des plasmides
27
Dans quel tampon se trouve la RNase?
Dans le premier tampon
28
Qu'est-ce que le détergent dodécylsulfate de sodium (SDS)?
Un détergent qui permet de solubiliser la paroi cellulaire
29
Dans quel tampon se trouve le SDS?
Dans le deuxième tampon
30
Qu'est-ce que l'hydroxyde de sodium et son rôle?
- NaOH
- AUgmente de pH, ce qui permet de dénaturer l'ADN chromosomal et aide à la lyse des bactéries
31
Dans quel tampon se trouve l'hydroxyde de sodium?
Dans le deuxième tampon
32
Qu'est-ce que l'acétate d'ammonium?
SEL qui provoque la précipitation des protéines et de l'ADN chromosomal
33
Dans quel tampon se trouve l'acétate d'ammonium?
Dans le troisième tampon
34
Qu'est-ce que le chlorhydrate de guanidine?
Utilisé pour isoler l'ARN gràce à sa capacité d'inhiber les RNases, à dénaturer les protéines et les nucléoprotéines
Utilisé dans la préparation pour faciliter la liaison de l'ADN plasmidique au support en siclice ou en fibre de verre
35
Dans quel tampon se trouve le chlorhydrate de guanidine?
Dans le troisième tampon
36
Qu'est-ce que la silice ou la fibre de verre?
Utilisé pour lier sélectivement l'ADN plasmidique ou autre acides nucléiques
37
Qu'est-ce qui est utilisé pour faire lier l'ADN à la silice?
Une solution à foirte concentration en sels
38
Quel est le rôles des alcools dans la préparation?
L'éthanol est utilisé pour la préparation du tampon de lavage de l'ADN, retenu par adsorption sur la colonne de silice
39
Comment se déroule la mini-préparation?
1) mise en culture d'une suspension bactérienne
2) Lyse bactérienne dans un tampon alcalin de SDS et de RNase
3) Ajout d'une solution saline qui précipite les composantes cellulaires à l'exception du plasmide
4) Récupération du plasmide et purification
40
Pourquoi mettre les échantillons dans le tampon S1?
Le milieu S1 permet resuspendre le culot bactérien et maintenir l'intégrité cellulaire avant la lyse
41
De quoi est composé le tampon S1?
Tris-HCl
EDTA
RNases
42
Qu'est-ce que la solution S2?
Solution de lyse qui contient du NaOH et du SDS
43
Qu'est-ce que la solution S3?
Tampon de neutralisation qui contient de l'acétate d'ammonium et du chlorhydrate de guanidine
44
Quelles sont les 3 grandes étapes de la préparation?
1. Lyse alcaline des bactéries et élimination des débris cellulaires
2. Absorption de l'ADN sur la colonne de silice
3. Lavage et élution de l'ADN (purifié et concentré)
45
Qu'est-ce que la solution de lavage?
Solution qui permet d'éliminer les impureté restantes. Composé d'éthanol, de Trs-HCl ou EDTA et de Sel
46
Qu'est-ce que la solution d'élution?
SOlution qui permet de récupérer l'ADN plasmidique fixé sur la membrane de silice de la colonne
Composé d'eau, de Tris-HCl et d'élution buffer
47
Qu'est-ce que le blanc lors d'un dosage?
C'est la mesure de la densité optique du liquide dans lequel sosnt suspendu ce qui est à dose, dans notre cas les bactéres
48
Quel est la solution utilisé pour le blanc de la mini-préparation?
La solution SE (élution buffer)
49
À quel procédé naturel la technique utilisé pour la recombinaison artificielle de l'ADN ressemble?
La recombinaison par transposition
50
Quel type de clonage a été fait lors du laboratoire?
Clonage unidirectionnel
51
L'ADN est chargé comment a pH neutre?
Négativement à pH neutre
52
Comment fonctionne le gel d'agarose?
L'agarose forme une matrice qui ralentit les molécules selon leur taille et selon leur forme topologiques
53
Dans quel ordre migre les différentes forme d'ADN?
Super enroulé - linéaire - relâché
54
Qu'est-ce que le SYBR Safe?
Agent intercalant qui s'intercale entre les deux brins d'une molécules d'ADN
55
Quel tampon est utilisé pour la digestion enzymatique?
Le tampon cutsmart 10X NEB
56
Que contient le tampon cutsmart 10X NEB?
Il contient du BSA, du Tris-acétate, de l'acétate de potassium et de magnésium
57
Quel est le rôle du tris-acétate dans le tampon pour la digestion enzymatique?
Permet de maintenir le pH optimal pour les enzyme
58
Quel est le rôle de l'acétate de potassium dans le tampon pour la digestion enzymatique?
Permet de stabiliser l'enzyme
59
Quel est le rôle de l'acétate de magnésium dans le tampon pour la digestion enzymatique?
Cofacteur essentiel pour l'activité de l'enzyme de restriction
60
Qu'est-ce que le TCD?
Tampon de chargement qui permet la visualisation et la migration de l'ADN sur le gel
61
De quoi est composé le TCD?
- Colorant (bleu de bromophenol)
- Glyécrol
- EDTA
62
À quoi sert l'EDTA?
Inhibe les DNases en chélant les ions Mg2+
63
À quoi sert le glycérol?
Alourdit l'échantillon pour qu'il coule dans le puit du gel
64
À quoi sert les colorants?
Permet de suivre la migration du front
65
Pour extraire l'ADN du gel d'agarose, quelle caractéristique de l'ADN est utilisé?
Son affinité pour les billes de silice en précence d'une concentration élevée à pH neutre
66
Qu'est ce que le tampon de solubilisation (QG)?
tampon composé de thiocyanate de guanidine qui permet de solubiliser l'agarose du gel, à l'ADN de se lier à la membrane de la silice
67
Pourquoi ajouter de l'isopropanol aux échantillons lors de l'extraction de l'ADN?
Permet d'augmenter le rendement de fixation de l'ADN sur la colonne de silice en réduisant la solubilité de l'ADN et faciliter l'interaction entre l'ADN et la silice
68
Que contient le tampon de lavage PE?
Il contient de l'éthanol 96-100%, du tris-hcl et de l'EDTA
69
Quel est le rôle du tampon de lavage PE?
Éliminer les sels du tampon QC et les impuretés
70
Quel ratio a été affecté par l'agarose lors de l'extraction de l'ADN du gel?
Les ratios 260/230
71
Qu'est-ce que le tampon TBE 1X?
Tampon de migration sur gel d'agarose
72
De quoi est composé le tampon TBE?
Tris, Acide borique et EDTA
73
À quoi sert la ligase d'ADN?
Elle permet de lier des bouts d'ADN pour obtenur des molécules d'ADN recombinantes
74
Que nécessite la ligase pour fonctionner efficacement?
La présence d'ATP et de Mg2+
75
À quoi sert le Mg2+ pour le fonctionnement efficace de la ligase?
PErmet de favoriser l'extension des groupements phosphates de l'ATP
76
Quel est le ratio molaire qui est utilisé dans le laboratoire pour la ligation?
1:3
77
Quel est la formule pour déterminer la quantité d'ADN requis pour respecter le ratio molaire?
Qte insert = (qte vecteurX taille insert)/ taille vecteur X ratio (1:3)
78
De quoi dépend le ratio molaire?
la taille de l'Insert -) si insert plus petit que 800pB on augmente le ratio
79
Que contient le tampon ligase?
- ATP
- Ions Mg2+
80
Combien de temps dure l'incubation pour la ligation et à quelle température?
16C pendant 16h
puis 10 min à 65C pour inactiver
81
Qu'est-ce que le bouillon SOC?
Bouillon qui permet au bactéries de se remettre du stress de a transformation et à exprimer les plasmides avant d'être soumis à une sélection
82
Pour l'induction de protéine à partir des bactéries transformées, quelle colonie doit être utilisé?
On prend une colonie qui se trouve surl la gélose sans IPTG et X-gal et qui est blanche et fluo
83
Le DO des bactéries doit se trouvé entre quelle valeur?
entre 0,3 0,5 - limite de 0,7
84
QUe contient le tampon de lyse utilisé lors de l'induction de protéine?
- Tris-HCL
- SDS
- 2-mercaptoéthanol
- Glycérol
- Bleu de bromophénol
- Eau déionisée
85
Quel est le rôle du SDS dans le tampon de lyse?
Lyse les membrane et agit comme détergent anionique pour s'associer aux protéines et leur donner une charge négative et les dénaturer
86
Quel est le rôle du 2-mercaptoéthonol?
Agent réducter qui brise les ponts disulfures
87
Quelles sont les étapes expérimentales de la technique de western blot?
1) migration des échantillones protéiques via SDS-PAGE
2) TRansgert des protéines du gel d'acrylamide vers la membrane de nitrocellulose
3) Hybridation des anticorps et détection des protéines recherchées
88
Qu'est-ce que la GADPH?
Protéine structurale utilisé pour la normalisation
89
De quoi dépend la migration dans un électrophorèse?
De la friction du milieu et de la densité de charge de la molécule
90
Dans le gel d'électrophorèse, quel est le rôle du SDS?
C'est un dénaturant ionique chergé négativement, qui se lie aux protéines pour les dénaturer et leur conférer une charge négative
91
Dans le gel d'électrophorèse, quel est le rôle du mercaptoéthanol?
Utilisé pour réduire les ponts disulfures de résidus cystéine des protéines
92
Que permet l'utilisation du SDS et du mercaptoéthanol quant à la migration des protéines?
Permet que la séparation se fasse uniquement en fonction de la masse molaire
93
Quels sont les 2 réactifs qui catalysent la polymérisation du gel de polyacrylamide du gel d'électrophorèse?
- Persulfate d'ammonium (APS)
- TEMED
94
De quoi dépend la concentration en acrylamide et en méthylène bisacrylamide?
De la tailles des protéines à séparer
95
Qu'est-ce que l'acrylamide et le bis-acrylamide?
Acrylamide : monomère formant le polyméere appelé polyacrylamide
Bis-acrylamide : s'intègre aussi au polymère, mais il peut relier 2 chaines voisines en s'y intégrant -) agent réticulant
96
Quel est le rôle du TEMED dans le gel de polyacrylamide?
Catalyseur de la réaction de polymérisation
97
Quel est le rôle du persulfate d'ammonium (APS) dans le gel de polyacrylamide?
Catalyseur et avec le TEMED favorise la formation de radicaux qui accélèrent la polymérisation
98
Quel est le rôle de la glycine dans le gel de polyacrylamide?
Anion qui transporte le courant électrique
99
Que contient le tampon de migration à pH de 8,3?
- Tris base
- Glycine
- SDS
100
Quels sont les types de gels dans la migration sur gel de pH discontinue?
- Gel de compression
- Gel de résolution
101
De quoi est composé le gel de résolution?
- Eau déionisée
- Mix d'acrylamide
- Tris
- SDS
- APS
- TEMED
102
Quel est le pH du gel de résolution?
8,8
103
De quoi est composé le gel de compression?
- Eau déionisée
- Mix d'acrylamide
- Tris
- SDS
- APS
- TEMED
104
Quel est le pH du gel de compression?
6,8
105
Quel gel a la plus grande concentration en acrylamide?
Le gel de résolution
106
Expliques comment les protéines peuvent se condenser dans le gel de compression.
- Au départ, les ions Cl- prennent de l'avance et laissent un vide ionique dans lequel les protéines n'avance pas beaucoup.
- Les ions glycines non chargés avancent un peu, mais moins vite, leur front de migration ce qui pousse les protéines à former une bande
- À l'arrivée au deuxième gel, les ions glycines se chargent négativement et deviennent plus mobiles et les front d'ions dépasse les protéines
- Cela permet aux protéines de se séparer selon leur poind moléculaire
107
Qu'est-ce que la membrane de nitrocellulose?
Matrice chargée négativement qui lie les protéines de façon hydrophobe et électrostatique
108
Que permet un rouge de Ponceau?
Permet de s'assurer que l'électrophorèse et le transfert ont fonctionnés
109
Quels sont les buts du blocage?
- Bloquer la membrane
- Saturer la membrane pour éviter les bruits de fond
110
Quelles solutions de blocage peut être utilisées?
- BSA
- Protéines autres comme hémoglobine, gélatine
- Lait non gras
- Lait en poudre
111
De quoi est composé le tampon de transfert?
- Tris
- Glycine
- Méthanol
112
Quel est le rôle du méthanol dans le tampon de transfert?
- Enlève le SDS des protéines pour augmenter leur affinité pour la membrane
113
Qu'est-ce que le TBST?
C'est un tampon de lavage de la membrane
114
Que permet le TBST?
- Élimine les anticorps non spécifiquement liés, réduit le bruit de fond et préserve les interactions spécifiques anticorps-antigène
115
De quoi est composé le TBST?
- TRis Base
- NaCl
- Tween 20
116
Quel est le rôle du NaCl dans le TBST?
Maintient l'osmolarité et les interactions ioniques
117
Quel est le rôle du Tween 20 dans le TBST?
Détergent doux qui empêche les liaisons non spécifiques
118
DAns la machines de transfert, les protéines migrent dans quelle direction?
De la cathode (en haut) vers l'anode (en bas)
119
Dans quel ordre doivent être installé le sandwich pour le transfert?
- Haut de la cassette
- papier filtre
- gel
- membrane
- papier filtre
- Bas de la cassette
120
Quelle solution est utilisé pour décolorer la membrane après le Ponceau?
Le TBST
121
Suite au Ponceau, quelle étape importante il faut effectuer?
Le blocage de la membrane avec du TBST et du lait
122
Quelle technique est utilisée pour détecteur des protéines spécifiques sur la membrane?
Immunomarquage
123
Que détecte le premier et le deuxième anticorps?
Premier : reconnait l'épitope linéaire de la protéine d'intérêt
Second : reconnait l'anticorps primaire (immunoglobuline de l'espèce animale de l'anticorps primaire)
124
QUe reconnait spécifiquement l'anticorps secondaire?
Reconnait la portion Fc des anticorps de souris
125
Quelle est la particularité de l'anticorps secondaire?
Il est lié de manière covalente à l'enzyme phosphatase alcaline
126
Quel est le substrat de l'enzyme phosphatase alcaline?
BCIP/NBT
127
Quelle est la couleur du produit formé par la réaction avec l'enzyme phosphatase alcaline?
Bleu violet
128
Que contient l'ARN total?
- ARN messager
- ARN de transfert
- ARN ribosomal
129
Pourquoi l'ARN est plus difficile à analyser que l'ADN?
Car elle est plus vulnérable aux ribonucléases A (RNases A) et à la chaleur
130
Comment est effectuer la lyse de la membrane cellulaire dans les techniques d'isolation de l'ADN?
Les cellules sont homogénéisées dans un tampon qui contient un détergent puissant à haute concentration, un agent dissociant, une solution tampon et un agent réducteur à haute concentration
131
Quels sont les 2 buts du premier tampon pour la lyse?
1) inhiber les RNases endogènes
2) Dénaturer les acides nucléiques et dissosier les protéines qui pourraient y être fixées
132
Qu'est-ce que le TRIzol?
Réactif prêt à lUsage qui permet d'isoler l'ARN total de haute qualité
Solution monophasique
133
De quoi est composé le TRIzol?
- Phénol
- Isothiocynate de guanidine
- Autres composates
134
Que permet de faire le TRIzol?
- Maintient l'intégrité des ARN (inhibition RNases)
- rupture de cellules et dissolution des composants cellulaire
135
Quel est le rôle du phénol dans le TRIzol?
Dénature les protéine et aide à spéparer les phases
136
Quel est le rôle du phénol dans le TRIzol?
Lyse les cellules
Dénature les protéine
Favorise la séparation des phases
137
Quel composé est ajouté après le TRIzol?
Chloroforme
138
Pourquoi il faut ajouter du chloroforme suite au TRIzol?
Pour provoquer la séparation en trois phases
139
Quelles sont les 3 phases qui sont créées et que contiennent-elles?
Phase aqueuse : Contient l'ARN
Phase intermédiaire : Contient l'ADN
Phase organique : contient les protéines et lipides
140
Comment est extrait l'ARN de la phase aqueuse?
Par l'ajout d'isopropanol
141
Qu'est-ce que l'eau DEPC?
Composé organique capable de réagir spécifiquement avec les résidus histidines des protéines (RNases) pour les inhiber
142
Quels composés doivent être utilisés sous la hotte?
- TRIzol
- Chloroforme
143
Dans la purification par colonne, pourquoi utiliser de l'éthanol 95%?
Pour aider la liaison des acides nucléiques à la sicile de la colonne
144
Que contient le tampon de lavage d'ARN?
- Éthanol
- Sel
- Tris
145
Que contient le mélange réactionnel DNase 1?
- DNase
- Tampon DNase
- Mg2+
- Ca2+
- Eau RNase-free
146
Que contient le tampon de prélavage d'ARN?
- Sels chaotropes
- Éthanol
- Tris
- Détergent doux
Favorise la fixation de l'ARN et nettoye les impuretés avant le lavage final
147
Dans quelle ordre sont ajouté les différents tampons dans la purification sur colone?
- Tampon de lavage
- Tampon DNases 1
- Tampon de prélavage
- Tampon de lavage
148
Comment est élué l'ARN de la colone?
AVec de l'eau DEPC
149
Dans quoi sont conservé les échantillons d'ARN?
De l'eau-DEPC
150
De quoi est composé le tampon d'échantillon (SB) lors de l'analyse de l'intégrité sur gel d'agarose?
- Formamide
- Formaldéhyde
- MOPS
- Eau-DEPC
151
Quel est le rôle du formamide et du formaldéhyde?
Permet de protéger l'ARN contre l'activité hydrolytique de RNase et agit comme agent dénaturant
152
Qu'est-ce qu'il faut aussi faire pour dénaturer les protéines en plus des agents dénaturants?
Chauffer les échantilons
153
Quel est le rôle du MOPS
Tampon pour la pH
154
Que contient le tampon de chargement?
- Bleu de bromophénol
- Glycérol
- EDTA
155
À quelle valeur devriat théoriquement se situer le ration d'intensité entre l'ARN 28S et 18S?
2 ou plus car le 28S est environ 2 fois plus grand que le 18S
156
Quelles enzymes effectuent la transcription inverse?
Transcriptase inverse
157
Comment sélectionner uniquement les ARN messager dans un mélange d'ARN total?
On effectue une rétrotranscription à l'aide d'amorces complémentaires à la queue poly-A que seul les ARNm ont
158
Qu'est-ce qui doit être mis dans une réaction de rétrotranscription?
- Oligo dT
- dNTOs
- Enzyme de transcriptase invers
159
Comment les oligos dT peuvent se lier aux ARNs?
En effectuant un temps dans un bain maire à 65c les oligos dT peuvent se lier aux queues poly-A
160
Que contient un tampon pour la transcriptase inverse?
- Tris-HCl
- Kcl
- MgCl2
- DTT
- RNase inhibitor
- dNTP
161
Quel est le rôle du DTT?
RÉduit les ponts disulfures pour stabiliser l'enzyme
162
Qu'est-ce qui est nécessaire à la réaction de PCR?
- ADN
- Deux amorces (sens et anti-sens)
- Taq polymérase
- 4 nucléotides
163
Pourquoi est-ce qu'il faut des amorces sens et anti-sens dans un PCR?
- pour permettre de copier les deux brins de l'ADN qui sont de sens opposés
164
Qu'est-ce qu la Taq polymérase?
C'est une ADN polymérase thermorésistante qui provient d'une bactérie
165
Quelle est la température optimale d'action de la Taq polymérase?
72c
166
Quels sont les 4 nucléotides nécessaire à la réaction de PCR?
- dGTP
- dATP
- sTTP
- dCTP
167
En quoi consiste la réaction PCR?
Une trentaine de cycles qui comprend :
- Dénaturation de l'ADN par la chaleur
- Hybridation des amorces avec leur séquence complémentaire
- Élongation ou synthèse d'ADN dont la séquence est complémentaire
168
À quelle température se fait la dénaturation de l'ADN par la chaleur?
94
169
À quelle température se fait l'hybridation des amorces avec leur séquence complémentaire
58
170
À quelle température se fait l'élongation ou synthèse d'ADN dont la séquence est complémentaire
72
171
Que se passe-t-il lors de la dénaturation?
Les ponts hydrogènes entre les bases azotées complémentaires sont rompus et les deux brins se séparent
172
Que se passe-t-il lors de l'hybridation?
Les amorces reconnaissent leur séquence cible sur les brins d'ADN et s'y collent
173
Que se passe-t-il lors de l'élonguation?
La Taq polymérase se lie au niveau des sites d'ADN double-brin (amorces) et ajoute des nucléotides de 5' vers 3' pour faire une molécule double-brin
174
De quelle quantité l'ADN augmente-t-elle à chaque cycle?
Elle double à chaque cycle
175
Pourquoi a-t-on effectué une PCR sur le mélange d'ARN?
Pour vérifier s'il y avait de la contamination d'ADN génomique
176
Que contient le Master mix pour le PCR?
- Eau-DEPC
- Tampon PCR
- MgSO4
- dNTPs
- Amorces sens
- Amorces anti-sens
- Taq polymérase
177
