examen final Flashcards

(54 cards)

1
Q

Quelle est la formule reliant la vitesse apparente à la mobilité électrophorétique et électroosmotique ?

A

v_app = v_ep + v_eo

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2
Q

Pourquoi utilise-t-on un composé neutre en électrophorèse ?

A

Pour déterminer la mobilité électroosmotique (v_eo), qui permet ensuite de calculer la mobilité électrophorétique (v_ep).

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3
Q

Quelle est la relation entre la mobilité électrophorétique et les propriétés d’un composé ?

A

Elle est proportionnelle au rapport charge/rayon.

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4
Q

Que représente la mobilité électrophorétique (μ_ep) ?

A

La vitesse de migration d’un ion sous l’effet du champ électrique, liée au rapport charge/rayon de l’ion.

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5
Q

Pourquoi faut-il faire attention à la structure des acides aminés dans les exercices ?

A

Parce que leur charge varie selon le pH, ce qui influence leur comportement en électrophorèse.

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6
Q

Quelle est l’unité typique de la mobilité électrophorétique ?

A

m²/V·s (mètre carré par volt seconde)

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7
Q

Comment différencier v_ep et v_eo expérimentalement ?

A

En utilisant un composé neutre pour déterminer v_eo, puis soustraire pour trouver v_ep.

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8
Q

Pourquoi l’électroosmotisme existe-t-il dans les capillaires ?

A

À cause de la charge négative des parois internes en silice qui attirent les cations de la solution.

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9
Q

Qu’arrive-t-il si l’on change le pH du tampon dans une électrophorèse ?

A

La charge des analytes change, ce qui modifie leur mobilité.

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10
Q

Que faut-il bien vérifier lors de l’analyse d’un chromatogramme ?

A

Il faut prêter attention aux chiffres significatifs et à l’identification correcte des pics.

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11
Q

Quelle est la précision requise pour les mesures de volumes en chromatographie ?

A

Pipette de 1,000 mL et ballon jaugé de 10,00 mL (grande précision nécessaire).

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12
Q

Que doit-on observer sur un chromatogramme ?

A

Les temps de rétention, les hauteurs de pics, les aires sous les courbes, et les unités utilisées sur les axes.

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13
Q

Quelle erreur fréquente doit-on éviter lors du traitement des données ?

A

Négliger les chiffres significatifs dans les calculs finaux.

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14
Q

Quelle information peut-on extraire d’un chromatogramme ?

A

Le temps de rétention, la résolution, la surface des pics (proportionnelle à la concentration), et l’efficacité.

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15
Q

Quelle est la formule de la résolution entre deux pics chromatographiques ?

A

Rs = (t_R2 - t_R1) / ((w1 + w2)/2)

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16
Q

Que signifie un pic asymétrique sur un chromatogramme ?

A

Mauvais équilibre de phase, problème de colonne ou d’injection.

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17
Q

Quelles sont les conditions pour qu’une molécule soit fluorescente ?

A

Un système π délocalisé, une structure multicyclique, et une forte rigidité.

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18
Q

Pourquoi l’ADP a-t-elle un faible rendement quantique ?

A

À cause de la relâche d’énergie par des mécanismes non-radiatifs.

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19
Q

Quelle est la règle de Kasha ?

A

Peu importe la longueur d’onde d’excitation, l’émission est centrée sur la même longueur d’onde.

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20
Q

Quelle est la longueur d’onde d’émission de la tyrosine ?

A

Environ 274 nm (transition π→π* du cycle aromatique).

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21
Q

Que signifie la formule I_f = 2,3 Rq P ε c l ?

A

Elle donne l’intensité de fluorescence en fonction de la concentration et de l’absorbance.

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22
Q

Quelles longueurs d’onde sont liées à l’excitation et à l’émission ?

A

Excitation : 350 nm ; Émission : 450, 530, 600 nm selon la molécule.

23
Q

Pourquoi la tyrosine est-elle fluorescente ?

A

À cause de sa chaîne latérale aromatique permettant des transitions π→π* à 274 nm.

24
Q

Pourquoi une molécule rigide est-elle plus fluorescente ?

A

Moins de vibrations = moins de perte d’énergie non radiative.

25
Que signifie un "rendement quantique faible" ?
Faible proportion des photons absorbés qui sont réémis en fluorescence.
26
Quelle différence entre spectre d’absorption et d’émission ?
Le spectre d’émission est toujours à des longueurs d’onde plus grandes (moins d’énergie) que celui d’absorption – décalage de Stokes.
27
Pourquoi diminue-t-on ε dans l’équation de la fluorescence pour étudier une molécule ?
Pour diminuer l’absorbance et éviter l’extinction interne ou l’auto-absorption.
28
Quelles sont les principales techniques d’ionisation en spectro de masse ?
EI (impact électronique), ESI (électrospray), et MALDI.
29
Quelle est la différence entre ESI et MALDI ?
ESI fonctionne à pression atmosphérique avec désolvatation douce, MALDI utilise une matrice et un laser sous vide.
30
Qu’est-ce que la méthode MALDI-TOF ?
Analyse par temps de vol avec réflectron, utilisée pour les grandes molécules.
31
Quelle est l’abondance naturelle du 13C ?
1.08 %, décalage de masse de 1.0034 Da par rapport au 12C.
32
Quelle est la différence entre les ions b et y ?
Les ions y conservent la charge sur le C-terminal, les ions b sur le N-terminal.
33
Comment calcule-t-on la masse d’un peptide modifié ?
En ajoutant les masses des extrémités (H et OH) et des modifications (sulfate, phosphate...).
34
Pourquoi la digestion trypsique est-elle utile ?
Elle coupe aux résidus K/R, facilitant l’identification des fragments.
35
Quelle information donne le rapport m/z ?
Il indique la masse divisée par la charge de l’ion, utilisé pour identifier les composés.
36
Quelle est la particularité de l’EI ?
Utilisée pour les molécules volatiles, elle provoque une fragmentation riche.
37
Quelle est la particularité de l’ESI ?
Elle permet l’ionisation de grandes molécules avec peu de fragmentation, à pression atmosphérique.
38
Que permet le MALDI-TOF ?
La détection de macromolécules par temps de vol, utilisant une matrice et un laser.
39
À quoi sert la matrice dans MALDI ?
Elle absorbe l’énergie du laser, facilite la désorption et le transfert de protons.
40
Comment interpréter une enveloppe isotopique ?
En observant les pics et leur intensité relative, on peut déduire la composition isotopique.
41
Quels éléments ont des profils isotopiques distincts ?
Le chlore (asymétrique 3:1) et le brome (symétrique 1:1).
42
Quelle est la masse d’un peptide non modifié donné ?
1326,5727 Da
43
Pourquoi ajouter H et OH lors du calcul de masse ?
Pour compléter la masse de la molécule en tenant compte des extrémités du peptide.
44
Quel est l’intérêt du séquençage MS/MS ?
Permet de déterminer précisément la séquence d’un peptide par fragmentation.
45
Combien d’acides aminés sont suffisants pour identifier une séquence peptidique ?
Environ 3 à 4 acides aminés.
46
Quel est le rôle du réflectron dans un TOF ?
Corriger les différences d’énergie cinétique entre ions pour améliorer la résolution.
47
Comment est généré un ion en ESI ?
Par application d’un champ électrique à une solution contenant des espèces pré-ionisées → formation de gouttelettes, évaporation du solvant, puis libération d’ions.
48
Pourquoi ESI est dite « douce » ?
Elle préserve les ions intacts sans fragmentation significative.
49
Comment la tension appliquée dans un quadripôle influence-t-elle la séparation ?
Elle agit comme filtre : seuls les ions d’un certain m/z ont un trajet stable et sont transmis.
50
Pourquoi EI génère-t-il de nombreux fragments ?
L’énergie de 70 eV utilisée casse les liaisons covalentes, formant des radicaux et ions secondaires.
51
Quelle différence fait-on entre un ion monoisotopique et un ion moyen ?
Monoisotopique = masse de l’isotope le plus abondant. Moyenne = pondérée selon les abondances naturelles des isotopes.
52
Que se passe-t-il si on détecte un ion [M+2H]²⁺ à m/z = 540,2 ?
La masse molaire est de 1079,4 (car 2 charges → m/z × 2).
53
Quelle masse faut-il ajouter pour une extrémité peptidique complète ?
Ajouter H (1,0078) et OH (17,0027), soit ≈ 18,0105 Da.
54
Quelle est la fonction d’une cellule de collision dans un MS/MS ?
Fragmenter l’ion précurseur en ions produits (fragments) pour séquençage.