Exercice 10-ligation of restriction fragments of genomic DNA and plasmid vector Flashcards
(5 cards)
que se passe pendant la ligation? quel liaison est formée
la ligation produit une liaison phosphodiester entre le 3’-OH et le 5’-P de 2 molécules d’ADN
quelle enzyme effectue la ligation
ADN ligase
4 composantes qui sont requises pour une bonne réaction de ligation
1) 5’-P et 3’-OH adjacents
2) Mg2+
3) ATP
4) conditions d’incubations adéquats
comment le ratio insert:vecteur affecte la réaction de ligation et les produits de ligation
plus que la concentration en I est grande, plus il y a de probabilités d’interaction avec le vecteur. Aussi, il est plus probable de former une ligation I+V quand la concentration de I est plus grande que celle de V
que peut arriver si la concentration de I est trop grande par rapport au V
il y aura une formation de molécules recombinantes qui contiennent plus qu’un insert ( concatamers)
