Fixação Flashcards
(40 cards)
Para que serve?
Etapa fundamental que serve para preservar os tecidos
Principios Gerais: Imobilização de células e tecidos
A partir do momento em que o tecido é retirado, a autólise das células deixa de ser evitada e as enzimas começam a digerir as membranas proteicas.
Assim queremos que a fixação promova a máxima semelhança entre o tecido visto ao MO e in vivo
Principios Gerais: Inibição da Autólise Celular
Começa a haver uma autodigestão enzimática; Leva a instabilidade da membrana lisossómica e à rutura das membranas. Isto provoca uma libertação enzimática e assim à destruição.
O grau de autólise depende do órgão e do seu conteudo enzimático.
Efeitos ao MO –> áreas de necrose
Principios Gerais: Inibição da putrefação tecidular
É a destruição dos tecidos por ação microbiana, através de toxinas e enzimas bacterianas.
Orgãos com flora normal abundante são os mais sujeitos (intestino, estômago, vesícula)
Efeitos ao MO –> coloração difusa, vacuolização
Principios Gerais: Solidificação do material coloidal
Fixação induz a formação de novas ligações o que leva à solidificação.
Quistos ficam transformados em geis e não solidificam.
Principios Gerais: Endurecimento
É desejável e permite a manipulação das peças sem as danificar
Principios Gerais: Modificação dos indices de refração
Fixação muda o indice de refração de forma não uniforme e por isso permite distinguir certos detalhes celulares mesmo antes da coloração
Principios Gerais: Modificação do Volume
Varia consoante a quantidade de água que constitui o tecido e a PO entre fixador e tecido.
É de evitar que haja distorção do tecido.
Principios Gerais: Insolubilização dos constituintes celulares
As substancias devem ser insoluveis no fixador para que não se percam.
Há fixadores específicos para cada tipo de substancias. Por exemplo: Fixadores alcoolicos preservam melhor o glicogénio do que qualquer outro.
Principios Gerais: Modificação de afinidades tinturiais
A fixação pode ter um efeito:
Positivo - separa ácidos nucleios das histonas e permite a sua deteção e estudo
Negativo - fixação longa extrai os ácidos nucleicos e anula o seus estudo. Há basofilia nuclear.
Métodos de Fixação Físicos: Frio
A congelação do tecido é a forma de fixação e conservação.
Métodos:
Congelação instantânea por imersão em isopentano
Criodissecação ou Liofilização (uso de nitrogénio líquido; conserva estrutura antigénica)
Criosubstituição: rápida; tecidos imersos em acetona e etanol
Cortes de Congelação
Usados para: Estudos de lípidos Estudos histoenzimáticos Estudos de imunoflorescencia (deteção de antigénio) Exames Temporâneos
Métodos de Fixação Físicos: Calor
Faz alterações profundas nos tecidos, maioritariamente irreversíveis;
Usa-se quando se querem acelerar as reações
É usado o microondas
Serve apenas para biópsias pequenas; é necessária a utilização de solução de NaCl a 0,9%; há preservação de antigénios
Métodos de Fixação Químicos: Vapores
Aquece-se o fixador e coloca-se o tecido a fixar por cima deste. Libertam-se vapores que levam à fixação.
Usado em:
Tecidos preservados por criodissecação; imunocitoquímica; estudos de flurescencia; demosntração de enzimas hidrolíticas; estudos ultraestruturais em ME
Quais os fixadores usados para estudos ultraestruturais na ME?
Formaldeído, Glutaraldeído; Tetróxido de ósmio;
Métodos de Fixação Químicos: Perfusão
Injeta-se reagente fixador no sistema circulatório e permite um estudo in vivo (só usado na experimentação)
Usa-se em AP pseudo-perfusão que é usada para estudo da árvore bronquica. É uma técnica ex vivo
Métodos de Fixação Químicos: Imersão
Contacto direto do fixador com o tecido;
A fixação ocorre de fora para dentro
É o método mais utilizado
Fatores que influenciam a fixação por imersão
Intervalo entre a colheita e a fixação deve ser o mais curto possível Rapidez Volume do fixador Espessura do material biológico Consistencia dos tecidos Tempo de fixaçao Concentração do fixador Temperatura pH Lavagens pós-fixação PO Tipo de fixador
Situações especiais de fixação de órgãos:
Pulmão - pulmão está cheio de ar e por isso flutua. Faz-se pseudo-perfusão pela árvore bronquica e coloca-se gazes embebidas em formalina na superficie do pulmão para este ficar totalmente submerso.
Mama - tem tecido adiposo e por isso tendencia a flutuar e é um tecido dificil para o fixador penetrar. Fazem-se cortes seriados paralelos para aumentar a superficie de contacto. Coloca-se gaze embebida entre os cortes e em cima
Intestino e estomago - colocar gaze no lumen de forma a não enrolar ou então estica-se numa placa.
Rapidez de penetração do fixador
Dependo do tipo de agente quimico;
É uma propriedade intrinseca de cada fixador.
Ordem (+rápido 1º) - ácido acético; acido tricloroacetico; formalina 10%; etanol 95%; cloreto de mercurio; Ácido pícrico; bicromato de potássio; tetróxido de ósmio.
Volume do fixador
Influencia diretamente a rapidez;
Volume deve ser suficiente para deixar a peça totalmente submersa
Espessura do material
Quanto menor a espessura mais rápida e eficiente é a fixação;
Espessura máxima - 5mm
Consistencia dos tecidos
Mais denso, mais dificil a penetração
Duração da fixação
Varia consoante: Espessura das peças Volume das peças Volume de fixador Temperatura Tipo de fixador (há fixadores que atuam de forma mais rápida e outros de forma mais lenta)
