Génie génétique

Question 1

enzyme de restriction

Answer 1

• produite par les bactéries
• coupenet l’ADN à une séquence spécifique
  - > défense contre bactériophages : ADN viral coupé lors de l’infection.

le chromosome et plasmide bactérien de sont pas affecté pcq possèdent des groupements CH3 et donc elles sont protégé par enzyme de restriction

Question 2

extrémité cohésive

Answer 2

produit par enzyme de restriction
coupe en escalier.

• grâce à cest bout, lorsque coupé, on peut ajouté du nouveau matériel génétique ce qui est seulement possible avec bout cohésif pcq il sont complémentaire.

Question 3

vrai ou faux ?

le plasmide ainsi que l’ADN coupé par la même enzyme de restriction sont complémentaire.

Answer 3

VRAI !

il y a seulement complémentarité lorsque cest coupé par la même enzyme

Question 4

ADN recombiant

Answer 4

insertion d’ADN dans un autre

Question 5

plasmide recombinant

Answer 5

insertion d’ADN dans un plasmide

Question 6

clonage génétique

Answer 6

1. isolement de l’ADN du plasmide ( vecteur de clonage) et d’un ADN d’intéret
2. coupage du plasmide et de l’ADN d’intéret par le même enzyme
3. prod. plasmide recombiant entre ADN d’intéret et plasmide coupé
4. transformation des bactérie par le plasmide produit.
5. sélection des bactérie avec plasmide recombinant recherché
6. identification de la bactérie contenant le plasmide recombinant.
7. prod. massive des gènes recombinants ou des protéines associé

Question 7

1. isolement de l’ADN

Answer 7

choix du vecteur de clônage ( plasmide)

généralement un plasmide contenant 2 gènes de sélection

1. résistance au antibiotique
2. site de polyclonage

Question 8

site de clonage

Answer 8

section de l’ADN pouvant être découpé par différente enzyme de restriction, où un gène sera inséré

Question 9

2. découpage des ADN

Answer 9

utilisation de la même enzyme de restriction

• coupe vecteur de clonage et ADN d’Intérêt
• crée bouts cohésif complémentaire

Question 10

3. plasmide recombinant

Answer 10

• mélange du vecteur et ADN d’intérêt
• lié par ADN ligase
• produit 3 type de plasmide possible
  • > pas recombiné
  • > 2 plasmide recombiné dont un contient le gène d’intérêt

Question 11

4. transformation des plasmides

Answer 11

intégration du plasmide dans la bactérie

la bactérie doit tjrs avoir les attributs contraire des gènes de sélection. sinon on ne peut rien détecter

4 combinaisons de bactérie transformé

Question 12

multiplication des bactéries et sélection des récombinante.

Answer 12

en utilisant les gène de sélection !!!!!

—> gélose sélective

Question 13

6. identification du clone comportant le gène d’intérêt

Answer 13

si le gène donne une caractéristique à la bactérie

• mesurer sur bactéries recombinantes
• ex. gène d»’invasion, fission binaire

si caractéristique non mesurable

• autoradiographie
• PCR

Question 14

autoradiographie

Answer 14

chaque point sur la membrane correspond à un puit ou se trouve une bactérie clône différente

• clône transférer sur une membrane de nilon
• bactérie sont lysée et monocaténaire
• ajout ADN sonde radioactive complémentaire au gène d’intéret
• pellicule radioactive mit sur la membrane de nilon
• clone qui ont le gène d«,intéret apparaisse sur la pellicule

SEULEMENT SI ON CONNAIT LE GÈNE

Question 15

PCR

Answer 15

au départ les deux gènes sont monocaténaire.

les amorce servent de barrière donc elles copie seulement ce qui se trouve entre. par ADN polymérase réplication de lADN dirigé.

apres on fait l’électrophorèse ou on met un colorant qui détecte ADN.

Question 16

mutagénèse

Answer 16

étude de la fonction d’un gène
introduire mutation de manière précise ou aléatoire

si c’est avec un transposon cest
aléatoire: on veut savoir ou le transposon c’est placer dans le gène si il est dans le gène celui-ci perd sa fonction ou une de ses fonctions.

gène muté : protéine avec fonction modifié
on peut donc trouver la fonction initial d’un gène en mesurant ce qui à été modifié

Question 17

mutagénèse pas transposon

Answer 17

transposon saute d,un endroit à l’autre dans l’ADN = mutation

1. on met plasmide avec gène d’intérêt ensemble = plasmide muté–> on transforme bactérie avec plasmide
2. on sélectionne bactérie avec transposon pour savoir si il c’est placé à l’intérieur du gène ou à l’extérieur ou soit plasmide reste intacte

si on veut sélectionner plasmide avec juste un transposon on doit ajouter un gène de sélection . sélection des clone
les plus long on le transposon et reste plus en haut du gel
l,amorce fait que même si transposon à l’extérieur il a la même longueur.

3. PCR pour choisir bactérie ayant transposon dans le gène d’intérêt.
   on mesure un changement dans une bactérie ayant un plasmide muté = indentification de la fonction du gène d’intérêt

Question 18

thérapie génique

Answer 18

introduction d’un gène dans un cellule humain

potentiel thérapeutique élevé : traitement contre le cancer , diabète , traitement contre le VIH …

Question 19

principe thérapie génique

Answer 19

on modifie le viruse de sorte qu’il ne puisse plus se répliquer = inoffensif

on intègre le gène a transmettre dans le virus

on l’intègre au cellules humain le virus infecte cellule et transfert matériel génétique avec gène qu’on lui a implanté.

Question 20

plante transgénique

Answer 20

1. on isole plasmide Ti de l’Argrobactérium tumefociens
2. gène de sélection ADN T ou se trouve le site de restriction
3. g:ene d’intérêt vient s’inséré sur le gène de sélection entre le site de restriction
4. plasmide recombiné peut être introduit dans dans l’ADN chromosomique des plantes = prod de plantes contenant nouveau caractère.