La culture cellulaire

Question 1

Besoins nutritifs pour tous types le cellules

Answer 1

SAV (service après vente)
Sel 
sucres 
vitamines 
acide aminés 
(=milieu commerciaux de base)

Question 2

Besoins nutritifs pour cellules eucaryotes

Answer 2

VACOSS

• sels minéraux (Na, Cl, K, P, Mg …&raquo_space; maintien Potentiel mbnR , maintien de la balance Osmotique , cofacteur des Réaction biochimique (POR))
• sucres (sucre en C6&raquo_space; apport NRJ)
• Oligo-éléments (fer, zinc …)
• Acides aminés (&raquo_space; croissance cellulaires)
• vitamines (&raquo_space; vitB, biotine, acide folique, nicotinamide
• choline, inositol

Question 3

Apports du sérum de veau fœtal

Answer 3

SAC-T(hlm

• Sels minéraux, nutiments, oligo-éléments, vitamines, cholestérol, acide gras
• Facteurs d’Attachement : laminine, fibronectine
• Hormones et facteurs de Croissance : insuline, PDGF, EGF, FGF (fin tjs GF + PD(e)F )
• Protéines diverses pour le Transport des Hormones, Lipides et Minéraux

Question 4

Avantages du sérum de veau foetal

Answer 4

• agent mitogène important
• protection contre paramètres physiques (choc, viscosité, osmolarité)
• protection contre paramètre chimiques ( ex : inhibiteurs de protéases)

Question 5

Inconvénient sérum de veau foetal

Answer 5

• composition pas bien déterminée
• variabilité
• difficile d’approvisionnement
• possibilité de présence de virus et autres pathogènes
• présence d’immunoglobuline

Question 6

Composants de la matrice extra-cellulaire

Answer 6

G Pas Cpris La Faille

• glycosaminoglycane
• protéoglycane
• collagène
• laminine
• fibronectine

Question 7

Besoins cellulaires physiologiques :

• qL T° ?
• qL pH ?
• taux de CO2
• tampon (but et en présence de quoi ?)
• avc quoi est ajustée l’osmolarité ?
• taux d’humidité et pk humidité ?

Answer 7

• 37°C
• 7,2 < pH < 7,4
• 5% CO2 ( et aussi besoin de bicarbonate)
• en présence d’HEPES , évite brusques variations de pH
• Na et Cl ( osmolarité )
• humidité : 90-95% , évite variations de pressions osmotiques dû à l’évaporation de l’eau

Question 8

Equilibre bicarbonate/acide carbonique obtenu avec le CO2 en phase … ?

Answer 8

Equilibre bicarbonate/acide carbonique obtenu avec le CO2 en phase GAZEUSE

Question 9

expl de cellules en suspensions

Answer 9

cellules sanguines

Question 10

expl de cellules adhérentes

Answer 10

fibroblastes

majorité des cellules sont adhérentes

Question 11

nature du support utilisé pour l’adhérence in vitro ?

Answer 11

chargé négativement !!

en général plastique ou polystyrène qu’on traite pour que charges négatives

Question 12

méthodes de clonage (2)

Answer 12

• clonage par micromanipulation à partir de colonies
  obtenues en milieu semi solide
• clonage par dilution limite

Question 13

modes de séparation cellulaire

Answer 13

(SES) game
- Séparation sur des paramètres physiques
&raquo_space; gradient de densité
&raquo_space; adhérence
- Séparation à l’aide de marqueurs spécifiques
- Enrichissement d’une population à l’aide de facteurs de croissance spécifiques

Question 14

Caractéristiques des cellules pérennisées (4)

Answer 14

• Cellules qui se divisent indéfiniment
• pouvoir multiplicatif important
• Peuvent avoir un nombre de chromosomes anormal
  (souvent hétéroploïdie)
• Morphologie souvent différente des cellules normales

Question 15

Comment on obtient une lignée pérennisée ? (4)

Answer 15

• événement spontané à partir de culture primR (rare)
• prélèvement d’une tumeur (cellules tumorales sont pérennisées)
• hybridation de cellules (ex:hybrydome)
• induction par de virus transformants (EBV ou SV40), agents physiques ou chimiques

Question 16

T° azote liquide ?

Answer 16

-196°C

Question 17

expl d’agent cryorotecteurs

Answer 17

• DMSO (di.méthyl.sulf.oxide)

- glycerol

Question 18

Quels sont les vecteurs utilisés pour la transfection ?

Answer 18

Les plasmides

Question 19

Cb de plasmides par cellule ?

Answer 19

plusieurs 100N

Question 20

Pour transférer un gène dans une cellule

eucaryote nous avons besoin :

Answer 20

VTC

• vecteur avec le gène d’intérêt
• cellules hôte
• une technique

Question 21

ADN plasmides ?

Réplication plasmides ?

Answer 21

circulaire, bicaténaire

réplication épisomiale

Question 22

Quelles sont les différentes méthodes pour faire entrer un gène dans une cellule eucaryote ? (6)

Answer 22

• Injection direct dans noyau
• infection par virus modifié
• électroporation
• précipitation au phospate de calcium (qui est endocyté)
• fusion par des liposomes
• cplx avc le dae dextran (puis endocyté)

Question 23

Qu’est ce qu’est le DEAE DEXTRAN ?

Answer 23

il a des charges positives et va donc se fixer sur les charges négatives du plasmide. Le cplx formé le fixe ensuite au cherge négatives de la mb p, puis est endocyté.

Question 24

Qu’est ce qu’est l’électroporation ?

Answer 24

choc électrique fait un trou/pore transitoire dans la mb

Question 25

avec une transfection transitoire, les cellules filles expriment-elles la protéine ?

Answer 25

Non, perte du plasmide lors de la division cellulaire

ce n’est pas le cas pour transfection stable > p- tjs exprimée

Question 26

Transfection transitoire : cb de tps s’exprime la protéine ?

Answer 26

24 à 48h

donc 72 à 96h après ajout du plasmide

Question 27

transfection transitoire : après cb de temps s’exprime la protéine ?

Answer 27

après 24 à 48h

Question 28

gène de résistance antibiotique pour transfection transitoire ou stable ?

Answer 28

stable