Laboratorio 1

Question 1

¿Qué debo saber/ definir antes de iniciar una colecta?

Answer 1

1. Definir el método de colecta y preservación más adecuado, según sea el fin (cualitativo o medición de características cuantitativas relativa a poblaciones).
2. Conocer el artrópodo: hábitat, comportamiento, preferencia de alimentación.

Question 2

Métodos de colecta para artrópodos que producen infestaciones

Answer 2

Raspado de piel (sarnas), extracción mecánica del artrópodo (miasis), cortado de pelos (Anoplura y Mallophaga), uso de redes entomológicas (moscas picadoras).

Question 3

¿Qué es un artrópodo antropofílico?

Answer 3

Organismo especialmente adaptado para parasitar o infectar al hombre.

Question 4

¿Para qué fines se hace una colecta entomológica?

Answer 4

1. Colecciones de referencia (tiempo): permiten realizar comparaciones entre material colectado recientemente con respecto a ejemplares referenciados o previamente identificados.
2. Proyecto de investigación (objetivos: análisis genéticos, moleculares y microbiológicos).
3. Vigilancia entomológica de rutina (rápido, dinámico): no almacenaje.
4. Colonias: se debe mantener vivos los ejemplares o descendencia.

Question 5

Preservación según información deseada

Answer 5

1. En seco: morfología y color; añadir protección contra hongos/artrópodos.
2. En láminas: vista al microscopio; previo al montaje en alcohol.
3. Vivos/muertos a temperatura viable: detección de patógenos, cultivo de bacterias/virus, obtención de parásitos.
   *Virus ARN(dengue) tiene rápida degradación.

Question 6

Ejemplos de colecta

Answer 6

1. Trampa CDC (Mosquitos): recolecta en seco.
2. Etanol y formalina: montaje en lámina, pcr.
3. Colecta viva en criadero.
4. Colecta poco selectiva: manta blanca y luz.
5. Colecta directa de ectoparásitos.

*Inspección y búsqueda directa

Question 7

¿Qué es una colección entomológica, y qué utilidad tiene?

Answer 7

Colección tipo museo: preservación óptima que logre identificación, uso de referencia o análisis posteriores.

Question 8

Tipos de preservación en colección entomológica/referencia

Answer 8

1. En seco: alfiler entomológico o minuten, cajas de transporte.
   *Artrópodos tamaño grande, mediano, pequeños
   (mosquitos).
2. Lámina
   *Artrópodos pequeños y microscópicos.
3. En vial: fluido preservante
   *No insectos; crustáceos, arácnidos, miriápodos, formas
   inmaduras (larvas, huevos), artrópodos de cuerpo suave.

Question 9

¿Cuáles son los pasos generales para el montaje de colecciones de referencia?

Answer 9

Muerte, fijación, aclaración, montaje, rotulación, identificación

Question 10

Opciones para muerte de artrópodos

Answer 10

1. Muerte por asfixia en Cámara de muerte: sustancia volátil (cloroformo, alcohol, acetona) que tiene la capacidad de propiciar una atmósfera asfixiante.
2. Muerte por inmersión en solventes: etanol 70% o formalina 10%.
3. Inmersión en agua hirviendo
4. Congelación: requiere de tiempo.
5. Inyección de anestésicos o sustancias letales: inhalables o inyectables, artrópodos grandes (cangrejos, langostas).

Question 11

Desventajas y ventajas de muerte por inmersión en solventes

Answer 11

Ventajas: Fácil, versátil, fijador, permite colectar grandes cantidades de material, alcohol 70% favorece la conservación del material para estudios histológicos o la extracción de ADN.
Desventajas: pérdida de colores y deshidratación.

Question 12

¿Para qué estadio/artrópodo se usa la muerte por inmersión en agua hirviendo, mencione su ventaja?

Answer 12

Larvas de mosca, evita que se pongan negras y contraigan.

Question 13

¿La muerte por inmersión en agua hirviendo también cumple el paso de fijación?

Answer 13

Sí, desnaturaliza proteínas.

Question 14

Ventajas de la muerte por congelación de artrópodos

Answer 14

1. Viabilidad para análisis moleculares.
2. Se mantienen casi en seco.
3. Útil para cuando no se puede montar en el momento. Almacenar por días o meses.
4. Útil cuando no se tiene cámara de muerte.

Question 15

¿Qué es la muerte “Procedimiento de 2 pasos”?

Answer 15

Primer paso busca dejar a artrópodo en estado de latencia (evita estrés); seguidamente se da muerte (cambio de Cn, cámara de muerte, temperatura)

Opciones para latencia
1. Anestésicos a baja concentración
2. Hipotermia: temperatura 4ª
3. Etanol diluido (5-10%): 15 min

Question 16

¿Por qué es necesaria la fijación y en cuáles tipos de montaje se usa?

Answer 16

Evita pudrición y permite preservación de estructuras
Para: montaje en lámina, vial (colección húmeda), en seco (exclusivamente ejemplares grandes o con abdomen abultado)

Question 17

¿Cuál es el objetivo de la fijación y cómo se realiza?

Answer 17

Tiene como objetivo preservar estructuras de interés para
la identificación y análisis morfológico, por medio de la desnaturalización proteínas.

Uso de: etanol, agua hirviendo, xilol-alcohol, bouin, formalina.

Question 18

¿Para qué tipo de montaje es indispensable la aclaración y por qué?

Answer 18

Para aquellos montados en lámina, permite generar transparencia y ablandamiento de ejemplares de cutícula esclerosada; y con esto que la luz atraviese el espécimen y se pueda ver su estructura.

Question 19

¿Se deben aclarar los ejemplares para el montaje en vial (colección húmeda)?

Answer 19

No.

Question 20

¿Qué sustancias se utilizan para el aclarado, y cuáles son sus ventajas o desventajas?

Answer 20

1. Lactofenol: permite el montaje directo desde medios acuosos (sin lavados), no suaviza la cutícula, se usa a temperatura ambiente, dura aprox. 24h
2. KOH 10%: excelente aclarador, rápido 2-3 min.
   *Requiere calor (no ebullición), se debe controlar el tiempo (quemar), requiere lavados (agua (10/5), etanol (10)).

Question 21

Si posterior al aclarado no puedo realizar el montaje, cómo puede conservar mi espécimen?

Answer 21

Se puede almacenar en vial con etanol hasta el momento de su montaje.

Question 22

¿Para una colección entomológica siempre es necesario el montaje?

Answer 22

Sí, también el paso de muerte y rotulación e identificación.

Question 23

Tipos de montaje

Answer 23

1. Alfiler: procedimiento de preferencia para el mantenimiento de material a largo plazo el cual será utilizado como referencia, ideal para adultos >2cm.
2. Lámina.
3. Vial: requiere recambio constante de los líquidos, método más utilizado para transporte. **alcohol 70%, isopropanol 80 % o
   formalina 10%.

Question 24

Recomendaciones para montaje en alfiler

Answer 24

1. Deben ser ejemplares frescos, congelación o en etanol (no alas suaves o aquellos que busque preservar el color).
2. Colocar alfiler central en mesotórax y artrópodo en posición de reposo o simétrica con alfileres extra.
3. Dorso del ejemplar a un tercio bajo la cabeza del alfiler
4. Formalina 10% 0,5ml artrópodos con abdomen abultado.
5. Utilizar minuten o triángulo de papel para ejemplares pequeños.

Question 25

¿En qué consiste una cámara húmeda?

Answer 25

Similar a cámara de muerte, se agrega agua y formalina. Permite generar un ambiente húmedo, útil en ejemplares muy rígidos.

Question 26

¿Cómo puedo ubicar el mesotórax?

Answer 26

Con el segundo par de patas o primer par de alas.

Question 27

¿En qué lugar va el alfiler central en los hemípteros y en los coleópteros?

Answer 27

Hemípteros=escótelo (hacia la derecha)
Coleóptero= Línea media del élitro derecho.

Question 28

¿En qué estructura se coloca o atraviesa el triángulo de papel/minuten?

Answer 28

Minuten: tórax o pleura de tórax
Papel: parte ventral o en mesopleuras.

Question 29

¿Por qué el montaje en lámina no es tan útil para identificación de mosquitos?

Answer 29

Debido a que es necesario ver manchas, patrones de colores, etc..deben montarse en minuten o triángulo de papel.

Question 30

Tipos de montaje en lámina y sus características

Answer 30

1. Permanente: requiere permeabilización y deshidratación del ejemplar (alcohol 70/80/90/100, tolueno, xilol), se usan resinas (montaje Permount o bálsamo Canadá)
2. Semipermanente: no requiere deshidratación, utiliza medios acuosos (Hoyer, glicerina, alcohol polivinílico) , se puede montar directamente de etanol o lactofenol.

Question 31

¿Qué característica positiva tiene el medio Hoyer?

Answer 31

Permite completar él procesos de aclaración, debido a sus componentes (hidrato de coral).

Question 32

¿Los ácaros deben aclararse para su montaje en lámina?

Answer 32

No. Algunos huevos de mosca, mosquitos o piojos tampoco, si se montan con Hoyer.

Question 33

¿Qué pasos se deben seguir posterior a colocar el cubreobjetos en el montaje en lámina?

Answer 33

Dejar secar por varios días a 37ª o más, anillar (evita rehidratación).
No pasar paños húmedos.

Question 34

Describa la técnica de montaje “Por inversión”

Answer 34

Se coloca el ejemplar en el centro de la lámina, se coloca una gota de Hoyer, quitar burbujas, invertir sobre cubreobjetos, dar la vuelta.

*Cantidad de medio depende del ejemplar.
*No se debe estripar el cubre.

Question 35

¿Cómo se colocan los artrópodos comprimidos, deprimidos, larvas y pupas en el portaobjetos?

Answer 35

Comprimidos (pulga): patas arriba, cabeza derecha.
Deprimidos (piojos, garrapata, mosquito): abdomen arriba, cabeza abajo.
Larvas: posición horizontal.
Pupas: diagonal

Question 36

¿Cómo es el mantenimiento de ejemplares en alfiler y cómo se ordenan?

Answer 36

Cajas entomológicas, insecticidas o repelentes (naftalina, tiras fumigantes), deshumificador (gel sílica), excelente ventilación, limpieza regular, continua revisión de los ejemplares para verificar su limpieza y curación.
*Se ordenan preferiblemente por clasificación taxonómica.

Question 37

¿Cómo es la rotulación e identificación en alfiler?

Answer 37

Etiqueta superior: sitio de colecta, hospedero, fecha de colecta, colector
Etiqueta inferior: orden, familia, especie, sexo o estadio, año de identificación/identificador. Subfamilia o Suborden si es necesario.

Question 38

¿Cómo es la rotulación e identificación en lámina?

Answer 38

Etiqueta izquierda: sitio de colecta, hospedero/ambiente/naturaleza, fecha de colecta, colector.
E. derecha: orden, familia, especie, sexo o estadio, año de identificación**/identificador. Subfamilia o Suborden si es necesario.

*Siempre debe incluirse

Question 39

¿Cómo es la rotulación e identificación en vial?

Answer 39

Dos etiquetas independientes, escritas a un único lado, tinta resistente a alcohol o impresiones láser, papel normal.

Question 40

¿Cómo funciona la identificación molecular de especies?

Answer 40

Gen citocromo oxidasa 1, PCR, secuenciación, Gene Bank (análisis de blast), identificación y relaciones filogenéticas.

Question 41

Grupo de artrópodos según mayor a menor cantidad

Answer 41

Coleopteros, Lepidoptera, Hymenoptera, Diptera.

Question 42

Ventajas y desventajas de la identificación molecular

Answer 42

Ventajas: útil, exacto, ampliamente utilizado en investigación.
Desventajas: tiempo, recursos, conocimiento experto.

Question 43

¿Qué son las claves (llaves dicotómicas) y cuáles son sus características?

Answer 43

Herramientas de identificación taxonómica

1. Análisis de características fenotípicas mediante criterios de presencia y ausencia.
2. Características son mutuamente excluyentes.
3. Sistema organizado de números (o letras), referencia dicotómica nueva.
4. Existen claves dirigidas a diferentes niveles de organización taxonómica (órdenes, familias, géneros, especies, etc…)

Question 44

¿Qué requerimientos suponen el uso de claves dicotómicas?

Answer 44

1. Conocimiento de la terminología entomológica.
2. Verificación de características (microscopio, estetoscopio, lupa).
3. Decisión sobre la condición dicotómica.

Question 45

Si se persigue la medición de características cuantitativas relativas a las poblaciones, qué debo tomar en cuenta:

Answer 45

Debe existir un criterio de muestreo estadístico y la elección del método de colecta (Cebos humanos/Animales, CDC, aspiradoras de espalda) tiene que ser cuidadosa para poder garantizar resultados confiables

Question 46

¿Qué son las cajas de transporte y cuál es su utilidad?

Answer 46

Método de preservación temporal el cual es favorable para el envío de ejemplares del campo al laboratorio. Consiste en cajas de plástico o cartón, preservante (naftalina, paradiclorobenceno) , niveles o divisiones.

Question 47

¿Qué reactivos contiene la solución de lactofenol y en qué envases se almacena?

Answer 47

A. láctico, agua destilada y fenol en cristales.
Envases color ámbar.

Question 48

¿Cómo preparo una solución acuosa de Hidróxido de potasio 10% p/v y en que envases debo almacenarla?

Answer 48

KOH 22,5g diluidos en 225mL de agua destilada. Envases plásticos.

Question 49

¿Qué reactivos tiene el medio Hoyer y cuáles recomendaciones debo seguir para su preparación?

Answer 49

Agua destilada, Goma arábica granulada, hidrato de coral, glicerina. Se deben agregar reactivos en este orden bajo calor moderado y en agitación, solución debe filtrarse con gasa.