Laboratorio N°2: Extracción de DNA de tejidos

Question 1

Las muestras de tejido (biopsias) utilizadas para estudio molecular pueden
encontrarse en:

Answer 1

1. Fresco contenidas en suero fisiológico

2. Fijadas y embebidas en parafina

Question 2

Para que se utilizan las muestras de tejidos fijadas en parafina

Answer 2

Se utilizan para el almacenamiento del espécimen a largo plazo y al representar un material biológico específico de una enfermedad, permiten establecer correlación entre aspectos moleculares, patogénesis, pronóstico clínico y tratamiento.

Question 3

Cuales son las desventajas de utilizar tejidos fijados para la aplicación de técnicas moleculares

Answer 3

presentan algunas limitantes en el proceso de amplificación de ADN mediante PCR debido a que esta es afectada por el tipo de fijador y los tiempos de fijación empleados.

Question 4

Nombre ejemplos de fijadores utilizados en la clinica

Answer 4

1. Etanol 70%
2. Formalina ácida (10% v/v)
3. Formalina buffer (formalina ácida 10% tamponada con buffer fosfatos, pH 7.0)
4. Formal-Fixx
5. Fijador zinc

Question 5

Con que son fijados rutinariamente los especímenes procesados

Answer 5

Fijados en formaldehido al 10 % y son posteriormente embebidos en
parafina

Question 6

Cual es la desventaja que se presenta al utilizar formaldehido para fijar tejidos

Answer 6

Se ha demostrado que el formaldehído produce entrecruzamiento entre ácidos nucleicos hidrolizando puentes fosfodiéster del ADN provocando fragmentación y generando así problemas en la obtención de un material genético de buena calidad, disminuyendo posteriormente el rendimiento de la amplificación por PCR

Question 7

Que fijadores son recomendables para mantener las estructuras intactas de los tejidos

Answer 7

Fijadores basados en formaldehído tamponado

Etanol

Question 8

Que factores son los que afectan la calidad del ADN

Answer 8

Tipo de tejido, 
Agente fijador (naturaleza, concentración, temperatura, pH), 
Tipo y tiempo de almacenamiento

Question 9

Cual es el primer paso a realizar para la extracción de ADN de una muestra fijada

Answer 9

Deben ser previamente desparafinadas lo cual se logra a través de su inmersión en xilol a 55 °C como agente removedor de parafina

Question 10

Que se debe realizar en la segunda etapa de extraccion de ADN una vez aplicado el xilol

Answer 10

La muestra debe ser rehidratada a través de una serie de lavados con etanol en concentraciones decrecientes

Question 11

Que es el cultivo celular

Answer 11

Es una técnica que permiten el crecimiento y mantenimiento de las células in vitro, conservando al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas

Question 12

Cual es el cultivo celular que mas se utiliza

Answer 12

El cultivo celular primario es uno de los más utilizados y corresponde al cultivo de células, tejidos u órganos obtenidos directamente de un organismo, puesta a crecer directamente en un medio artificial.

Question 13

Cual es la diferencia entre el crecimiento de cultivo en monocapa o en suspension

Answer 13

El cultivo en monocapa es el método más utilizado para la mayoría de las células,
no así el cultivo en suspensión, el cual se aplica normalmente para células hematopoyéticas, células madre, líneas celulares transformadas y células tumorales.

Question 14

Las líneas celulares tienen una vida finita que, según el tipo de célula, se puede prolongar entre

Answer 14

Entre 20 y 100 generaciones, Superado ese límite, las células entran en una etapa que se denomina senescencia en la que pierden su capacidad de proliferar y mueren

Question 15

Que ocurre con las celulas tumorales

Answer 15

evitan la senescencia y dan lugar a líneas celulares continuas, que crecen y se multiplican indefinidamente; estas pueden surgir de forma espontánea o de forma inducida y son el resultado de un cambio genotípico denominado transformación.

Question 16

En el año 1952 se obtuvo la primera línea celular continua de origen humano, la cual fue extraída a partir de

Answer 16

un tumor de cuello del útero de una paciente afroamericana que se llamaba Henrietta Lacks y en su honor fueron denominadas como “células HeLa”

Question 17

Las líneas celulares tienen diversas aplicaciones en investigación básica, dentro de las que se encuentran el estudio de:

Answer 17

Actividad intracelular
Flujo intracelular de biomoléculas:
Interacciones celulares
Genómica y proteómica:

Question 18

Que investiga la actividad intracelular

Answer 18

transcripción de DNA, síntesis de proteínas, metabolismo

energético, ciclo celular, diferenciación, apoptosis, etc.

Question 19

Que investiga el flujo intracelular de biomoléculas

Answer 19

Procesamiento del ARN, el movimiento del ARN desde el núcleo hacia el citoplasma, el movimiento de las proteínas hacia diversos orgánulos, el ensamblaje y desensamblaje de los microtúbulos, etc.

Question 20

Que estudia las Interacciones celulares:

Answer 20

Morfogénesis, proliferación celular, adhesión celular, interacciones con la matriz, invasión celular, etc

Question 21

Que estudia la genomica y la proteomica:

Answer 21

Análisis genético, infección, transformación celular, inmortalización, senescencia, expresión génica, rutas metabólicas, etc.

Question 22

En que áreas de investigación aplicadas son utilizadas las líneas celulares

Answer 22

Virologia, Biotecnologia, Inmunologia, Farmacologia, Ingenieria de tejidos, Toxicologia, Investigación y diagnóstico del cáncer, Estudios para el diagnóstico de enfermedades asociadas a anomalías genéticas

Question 23

Para que se utilizan las lineas celulares en el area de virologia

Answer 23

Detección de infecciones virales, cultivo de virus y el estudio de
vacunas en las fases iniciales de los ensayos clínicos, antes de pasar a las pruebas
en humanos.

Question 24

Que se investiga en biotecnologia

Answer 24

: producción industrial de fármacos en biorreactores (interferón,
insulina, hormona de crecimiento, etc.)

Question 25

Cual es el area de investigacion de la inmunologia

Answer 25

Producción de anticuerpos monoclonales, señalización,

fenómenos de inflamación.

Question 26

Que estudia la farmacologia

Answer 26

Efecto de diversos fármacos, interacciones con el receptor,

fenómenos de resistencia, etc.

Question 27

En que se enfoca la Ingeniería de tejidos

Answer 27

Producción de tejidos artificiales (piel, cartílagos) para el
tratamiento de grandes quemados, injertos o autotransplantes, etc.

Question 28

Que se realiza en el area de investigacion y diagnostico de cancer

Answer 28

Generalmente se generan líneas celulares a partir de una muestra de tejido del tumor de un paciente, se cultivan en el laboratorio y sirven como modelo de estudio para dicha enfermedad.
Se estuidan cambios en la secuencia de ADN tales como mutaciones, deleciones o inserciones pueden constituir el inicio de una célula tumoral. A su vez, estudios
moleculares de líneas celulares tumorales permiten la detección de genes activados y silenciados determinando si corresponden a células de origen
pulmonar, ovárico, epidérmico etc. y así conocer el origen de un cáncer en
pacientes con metástasis.