Méthode d'étude des acides nucléiques Flashcards
Par quelle méthode se fait l’extraction de l’ADN ?
se fait par centrifugation.
Comment se déroule l’extraction des ADN ?
- récupération des lymphocyte et monocytes
- ajout de phénol : création 2 phase
- précipitation avec éthanol + NaCl
- ADN séché et conservé dans l’eau à -20°C
Qu’es la méthode de synthèse d’ADN complémentaire ?
Permet de transformer une molécule d’ARN en ADN double brin.
Quels enzyme permet la synthèse de l’ADN complémentaire ?
transcriptase réverse ou transcriptase inverse
Comment fonctionne la transcriptase réverse ?
- s’amorce à partir d’une amorce constitué d’oligodT et s’hybride sur queue poly A
- l’enzyme va allonger l’amorce en ajoutant des désoxyribonucléotides
Quels sont les deux sites de l’enzyme : transcriptase ?
- ADN poly ARN dépendant
- RNase : dégradation de l’ARN
A quoi sert la méthode PCR ?
Permet d’amplifier un fragment d’ADN en utilisant 2 amorces spécifique du fragment à amplifier.
Quels sont les éléments nécessaires pour réaliser un PCR ?
- 4 désoxyribonucléases
- ADN poly thermorésistante
- tampon avec Mg
- amorce complémentaire des brins étudiés
- matrice ADN double brin
Quels sont les 3 étapes de la méthode PCR ?
- dénaturation par chauffage : rupture des liaison hydrogène.
- hybridation des amorces ( entre 50 et 60°C )
- élongation = polymérisation de l’ADN à partir des amorces ( t°: 72°C pendant 2 min )
A partir de combien de cycles les fragment d’intérêts sont-ils à la bonne taille ?
Après 30 ou 35 cycles les fragments d’intérêts sont à la bonne taille.
A quoi sert l’électrophorèse de l’ADN ?
Permet de déterminer la taille de l’ADN.
Par quel colorant l’ADN est-il détecté dans l’électrophorèse ?
Il est révélé par le BET qui est un intercalant de l’ADN, fluorescent au rayon UV.
Que permet de déterminer le BET ?
détection du front de migration
