Métodos de estudo de proteínas Flashcards
(13 cards)
1
Q
Métodos de separação de proteínas
A
Cromatografia e eletroforese
2
Q
Cromatografia
A
- Baseia-se na interação diferencial que os componentes estabelecem com uma fase móvel e estacionária
- Dependendo do parâmetro, existem vários tipos (troca iónica, exclusão de tamanho e afinidade)
3
Q
Eletroforese
A
- Migração de moléculas sob influência de um campo elétrico
- Utiliza SDS-PAGE (PolyAcrylamide Gel Electrophoresis)
- Poliavrilamida: forma uma malha porosa e atrasa a migração das proteínas maiores
- SDS: detergente que confere carga negativa às proteínas e as desnatura
4
Q
Métodos de identificar proteínas
A
- Relação anticorpo-antigénio
- Anticorpos monoclonais
5
Q
Anticorpo-antigénio
A
Baseia-se na especificidade
6
Q
Anticorpos monoclonais
A
- Método direto: O anticorpo primário que reconhece o antigénio tem associada uma marcação (por ex: fluorescência, enzima…)
- Método indireto: O anticorpo primário que reconhece o antigénio é reconhecido por um anticorpo secundário. Este último tem associado uma marcação (por ex. fluorescência, enzima…)
7
Q
Métodos específicos
A
- Western blotting
- ELISA
- Imunofluorescência
- Citometria de fluxo
- FACS
- Proteoma
8
Q
Western Blotting
A
Identifica a proteína num extrato de células ou tecidos
9
Q
ELISA
A
- Identifica a proteína numa solução, tipo soro ou urina
- Pode ser indireto ou sanduiche
10
Q
Imunofluorescência
A
- Deteção de proteínas em células e tecidos
- Utiliza anticorpos monoclonais específicos, marcados com fluorocromos (enzimas) para que as proteínas sejam visíveis a microscópio (fluorescência ou luz branca)
11
Q
Citometria de fluxo
A
- Baseado em anticorpos monoclonais fluorescentes – método direto
- Identifica proteínas em células intactas
- Utiliza o citometro de fluxo
- Características que identifica na célula
1.Tamanho relativo - FSC
2.Granularidade ou complexidade interna – SSC
3.Intensidade de fluorescência (depende da quantidade de ligações do anticorpo à respetiva proteína)
Nota: FSC: dispersão de luz frontal e SSC: dispersão de luz lateral
12
Q
FACS
A
- Fluorescence-activaded cell sorting
- Identifica as populações de células e separa-as com base nas proteínas de superfície
13
Q
Proteoma
A
- Estuda o conjunto de todas as proteínas de um tecido
1. Separação por géis bidimensionais
2. Análise bio-informática
3. Identificação por espectrometria de massa
4. Base de dados
