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Microscopie Flashcards

(56 cards)

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1
Q

De quoi dépend la résolution?

A
  • Ouverture numérique

- LO de la lumière

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Q

Comment diminuer la résolution?

A

Diminuer la LO ou augmentation de l’ouverture numérique

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Q

Quelle est la formule de la résolution?

A

r = 1.22 × 𝛌/2 ON

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Q

Quelle est la résolution de l’oeil humain?

A

0.2 mm

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Q

Quelle est la définition de la résolution?

A

Qualité ou netteté de l’image : Séparer deux objets étroitement placés sur une image

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6
Q

Quelle LO a la plus grande énergie?

A

400 nm (violet)

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7
Q

Pourquoi utilise-t-on les LO de 700 nm sachant qu’ils sont de basse énergie?

A

Bonne pénétration dans les tissus + Visualisation chez vivants sans tuer (basse fréquence = proche de UV = néfaste)

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8
Q

Quels sont les trois milieux utilisés dans la microscopie?

A

Eau, huile et air

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9
Q

De quoi dépend l’ON?

A

Indice de réfraction (n) et angle (a)

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10
Q

Quelle est la formule de l’ouverture numérique?

A

ON = n x sin(a)

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11
Q

Comment est l’ouverture numérique qui permet de recueillir le plus de rayons lumineux?

A

Grand angle de l’objectif

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12
Q

Un microscope à résolution de 0.5 um permet de voir quelles tailles d’échantillons?

A

Tout ce qui est plus grand que 0.5 um

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13
Q

Comment augmenter la résolution outre que LO et l’ON?

A
  • LO hors du spectrum

- Modifier patron de diffraction de la lumière

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14
Q

Quelles sont les deux lentilles d’un microscope composé

A
  1. Lentille objectif

2. Lentille oculaire

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15
Q

Quel est le rôle du condenseur?

A

Focaliser la lumière de la source sur l’échantillon

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16
Q

Quel est le rôle de la lentille oculaire?

A

Ramasse la lumière et magnifie l’image

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17
Q

Quelles sont les limitations de la microscopie en champ clair?

A
  • Marquer parce que transparent
  • faible contraste
  • résolution faible
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18
Q

Quel est le préalable avant de faire la microscopie en champ clair?

A

Fixer les échantillons

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19
Q

Peut-on visualiser les cellules vivantes avec le microscope en champ clair?

A

Non, fixés donc mort

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20
Q

Quels sont les avantages de la microscopie à contraste de phase?

A

Cellules en culture + pas de coloration nécessaire

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21
Q

Quelles sont les deux limitations de la microscopie à contraste de phase?

A

Signaux hors focus et pas bonne résolution

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22
Q

Quels sont les avantages de la microscopie en champ sombre?

A

Cellules vivantes + bon rapport signal/bruit + hybridation in situ

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23
Q

Quelles sont les limitations de la microscopie en champ sombre?

Study These Flashcards
A

Limité échantillons qui dispersent bien la lumière

24
Q

Quels sont les avantages de la microscopie à contraste interférentiel?

Study These Flashcards
A

Cellules vivantes + bon rapport signal/bruit + 3D + bords et contours

25
Quelle est la limitation de la microscopie à contraste interférentiel?
Un seul plan focal
26
Quelles sont les différents types de microscopie à fluorescence?
- Microscopie à fluorescence standard - Microscopie à fluorescence confocale - Microscopie à deux-photons (multiphotonique) - Microscopie STED (déplétion par émission stimulée)
27
De quoi est composé un microscope à fluorescence?
Émetteur à laser
28
À quoi sert l’émetteur à laser?
Sélectionner une LO précise
29
Qu’est-ce qu’un fluorophore?
Émission fluorescence après excitation par la lumière
30
V ou F : la longueur d’onde émise est la même que la longueur d’onde de stimulation
F, différente
31
V ou F : le fluorophore passe d’un état - énergétique à + énergétique lorsqu’il est excité par un laser
V
32
Qu’induit l’excitation de la lumière sur les fluorophores?
Augmentation de l’état énergétique
33
Comment l’émission de la lumière fluorescente se fait-elle?
Excitation -> augmentation de l’état énergétique -> retour état basal -> émission
34
Pourquoi est-ce que le spectre d’excitation et d’émission sont légèrement décalés?
Perte E
35
Quels sont les limitations de la microscopie à fluorescence standard?
Photoblanchiment Phototoxicité Bruit de fond
36
Quels sont les avantages de la microscopie à fluorescence standard?
Plusieurs fluorophores en même temps Rapport signal/bruit Détection mlc en faible qté
37
Quel type d’objet est difficilement visualisé avec la microscopie à fluorescence standard?
Objet épais
38
Quelle technique de microscopie est à utiliser pour un échantillon plus épais?
Microscopie confocale
39
Que permet le microscope confocal que ne permet pas le microscope à fluorescence standard?
Plusieurs plan focaux (différentes profondeurs) | Plan Z
40
Avec quelle microscopie peut-on visualiser des structures dendritiques?
Confocale
41
Quels sont les avantages de la microscopie confocale?
Extrêmement nettes Échantillons plus épais Images dans le plan focal
42
La microscopie confocale permet-elle de visualiser des événements rapides?
Non, processus lent
43
Quelles sont les limitations de la microscopie confocale?
Illumination à long terme peut causer photobleaching et processus lent rend difficile visu événements rapides
44
Quelle est la différence entre la microscopie standard et confocale et la microscopie 2-photons?
1 photon vs 2
45
Qu’est-ce qui caractérise la microscopie 2-photon?
Double de la longueur d’onde nécessaire Événement rare Plan focal très étroit
46
Quelle est la LO d’excitation dans la microscopie 2-photon?
Proche IR
47
Comment évite-t-on la phototoxicité avec la microscopie 2-photon?
Proche IR = pénètre sans causer de dommage cellulaire
48
Comment évite-t-on le photobleaching avec la microscopie 2-photon?
Limitation au point focal
49
Quelle est la relation entre la fluorescence et l’intensité dans l’excitation à 2 photons?
Fluorescence ~ intensité^2
50
Quel est le principe de la microscopie de l’épuisement d’émission stimulée (STED)?
1 rayon laser : excitation échantillon 1 rayon laser : désactivation fluorophores avoisinants Super-résolution
51
Comment est le bruit de fond d’un microscope STED?
Très faible
52
Peut-on faire la microscopie électronique sur des cellules vivantes?
Non
53
Qu’utilise la microscopie électronique?
Faisceau de particules d’électrons
54
Jusqu’à quel grossissement peut aller la ME?
5 millions de fois
55
Comment est la LO d’un électron par rapport à un photon?
Plus petite
56
Quelles sont les limitations de la ME?
Cellules fixés (non vivantes) | Artefacts visuels

Méthodes expérimentales (5 decks)

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