Brainscape's Knowledge GenomeTM


Top Flashcards (Certified)
All Flashcards

Méthodes expérimentales > Gènes et protéines/Clonage/ADN recombinant > Flashcards

Gènes et protéines/Clonage/ADN recombinant Flashcards

(90 cards)

Start Studying
1
Q

Combien de gènes constitue le génome humain?

A

20 000 à 22 000 gènes

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Combien de transcrits sont obtenus à partir du génome humain?

A

100 000 transcrits

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Combien de protéines sont obtenus à partir des transcrits humains?

A

1 000 000 de protéines

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

À quoi sert le criblage génétique classique?

A

IDENTIFIER les gènes -> phénotype à l’étude

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

À quoi sert le criblage génétique inversé?

A

DÉTERMINER les phénotypes à partir d’un gène connu

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Quelle est la différence entre le criblage classique et inversé?

A 
Classique = plusieurs gènes
Inverse = 1 gène
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

V ou F : Le phénotype est connu dans le criblage classique

A

V

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

V ou F : Le criblage classique sert à générer une hypothèse

A

V

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

V ou F : La séquence n’est pas connue dans le criblage inversé

A

F

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Quelles sont les 6 étapes de l’élaboration d’un criblage classique?

A
  1. Élaborer un test de mesure du phénotype
  2. Mutagenèse
  3. Dépistage du phéno anormal
  4. Test de complémentation
  5. Localisation du gène
  6. Clonage du gène
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Quels sont les modes de mutagenèses?

A
  • Chimique
  • Irradiation
  • Insertion
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Qu’est-ce que la mutagenèse chimique?

A

Mutations ponctuelles :

  • Non-sens
  • Faux-sens
  • Mutation séquence non-codante
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Quel est le désavantage de la mutagenèse chimique?

A

Difficile à cartographier

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Quel est l’avantage de la mutagenèse chimique?

A

Plusieurs types de mutations différentes (non-sens, faux-sens, région non-codante)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Qu’est-ce que la mutagenèse par irradiation?

A

Rupture ADNdb :

  • Grande délétions
  • Réarrangements chromosomiques
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Que permet l’irradiation et l’insertion qui n’est pas possible dans la mutagenèse chimique?

A

Cartographier la mutation

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
17
Q

Quel est le désavantage de l’irradiation?

A

Pas limité à un seul gène (grande mutation)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
18
Q

Qu’est-ce que la mutagenèse par insertion?

A

Gène marqueur :

  • Insertion région codante (sq a.a. perturbée)
  • Insertion région non-codante (épissage/expression perturbée)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
19
Q

V ou F : Le gène marqueur ne peut s’insérer que dans une région codante

A

F, région non-codante aussi et induire perturbation de l’épissage p.ex.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
20
Q

Qu’est-ce qui fait en sortes qu’une mutation par insertion est facile à cartographier?

A

Transposon tag est retraçable

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
21
Q

Quelle est l’étape 3 du criblage classique est qu’implique-t-elle?

A

Dépistage du phénotype anormal par la production de 100 à 1000 lignées puis test phénotypique (étape 1) pour garder seulement les lignées exprimant le phénotype voulue

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
22
Q

Comment déterminer si les mutations identifiées sont uniques ou non? Comment se nomme cette étape?

A

Par des croisements : Si 2 gènes différents alors disparition du phénotype
—–> Test de complémentation

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
23
Q

Pour localiser le gène, quels sont les deux techniques utilisées?

A 
Analyse de liaison :
- Chimique
- Irradiation 
Séquence du transposon :
- Insertion
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
24
Q

Quelles sont les deux façons de perturber un gène dans le criblage génétique inversé?

A
  1. Knock-out

2. Édition du génome (Knock-in)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
25
Quelles sont les trois méthodes d'édition du génome?
1. CRISPR/Cas9 2. TALEN 3. Zinc Finger
26
Qui entre les knock-outs et les knock-ins sont plus facile à faire?
Knock-out
27
Quel type de knock est favorisé?
Knock-out
28
Quelle étape est commune entre les knock-in et out?
PAM -> séquence liaison des nucléases -> clivage de l'ADN -> réparation (NHEJ pour out et HR pour in)
29
Quelle est la différence entre la réparation des knock-in et des knock-out?
in : HR | out : NHEJ
30
Qu'induit la réparation HR au niveau des sq d'ADN? Cela induit quel type de knocking?
Insertion = Knock-in
31
Qu'induit la réparation NHEJ au niveau des sq d'ADN? Cela induit quel type de knocking?
Délétion = Knock-out
32
Que faut-il ajouter de plus pour avoir un knock-in? Que contient cet élément?
ARN guide : mutation à introduire + mutation silencieuse qui perturbe PAM -> éviter cycle de clivage recommence
33
Quelle est l'inconvénient de l'édition du génome?
Off target (clivage plusieurs endroits dans le génome)
34
Quel est l'inconvénient d'utiliser des marqueurs microsatellites?
Couverture non homogène dans le génome : région concentrée en microsatellites et autres avec rien
35
Quel est l'avantage d'utiliser des marqueurs microsatellites?
Très polymorphique : variation entre individu mais dans mm famille pareil
36
Quelle est la différence entre les micropuces SNPs et les marqueurs microsatellites?
Polymorphisme
37
Quel test est utilisé pour les maladies rares?
Analyse de liaison
38
Quel test est utilisé pour les maladies complexes?
Études d'association
39
Quels tests se font sur de grandes familles?
Analyse de liaison et Études d'association
40
Sous quelle forme se traduit les résultats d'une analyse de liaison?
Score LOD
41
Une étude d'association (GWAS) recherche quoi et entre qui?
SNPs groupe contrôle vs groupe malade
42
Le séquençage de l'exome se fait sur quelle partie du génome?
Région codante = exons
43
Quel est l'inconvénient du séquençage de l'exome?
2% génome seulement -> délaisser introns
44
Qu'est-ce que le séquençage du génome et de l'exome permettent d'identifier?
Les variants dans les sq
45
Qu'est-ce qu'un criblage in silico?
Approche bio-informatique pour identifier gènes ou protéines
46
Quels sont les trois types de base de données utilisées en criblage in silico?
- BLAST - Ensembl - UCSC
47
Quelles sont les deux techniques de criblage moléculaire?
1. Micro-puce ADNc | 2. Séquençage de l'ARN
48
Quels sont les trois types d'isolation d'ARN dans le séquençage de l'ARN?
1. Poly-A selection : ARNm slmnt 2. Ribo-depletion : perte ARNr 3. Size selection : micro ARN
49
À quoi sert le PCR?
Amplification
50
Quels sous les trois sous-types de PCR?
Standard : ADN à ADN RT-PCR : ARNm à ADNc qRT-PCR : analyse quantitative
51
Quels sont les deux techniques de RT-PCR quantitatif?
Taqman et Fluorescent SYBR I
52
Quelle est la différence entre TaqMan et SYBR I ?
Spécificité (TaqMan)
53
Quelle est la différence entre un vecteur de clonage et un vecteur d'expression?
Expression de l'ADN absente dans v. clonage (les deux répliquent l’ADN)
54
Quelles sont deux techniques de purification de l'ADN?
Électrophorèse sur gel et Purification chimique
55
Quels sont les types de kits dans la purification chimique?
- Mini-prep - Midi-prep - Maxi-prep
56
Qu'est-ce que le séquençage de type Sanger?
Synthèse de toutes les compositions possible de longueur de fragment -> migration par poids -> reconstruction séquence ADN
57
Comment se fait un clonage?
voir diapo 49 1. Isolation matériel génétique 2. Amplification (PCR) 3. Ligation 4. Transformation 5. Purification/Isolation (Électrophorèse ou chimique) 6. Séquençage (Sanger)
58
D'où proviennent les anticorps monoclonaux?
Des ¢ B de la rate
59
Comment se nomme les myélomes fusionnés avec l'anticorps?
Hybridomes
60
De quoi se sert-on pour produire des anticorps polyclonaux?
Système immunitaire de l'animal
61
La production de quel type d'Ac est la plus rapide?
Polyclonaux
62
Quelles sont les deux méthodes de purification des protéines?
Chromatographie et Immunoprécipitation
63
Quel est le principe de la chromatographie?
séparer les protéines sur une colonne (charge, taille, hydrophobicité)
64
Quel est le principe de l'immunoprécipitation?
Utilisation d'Ac pour purifier protéine d'intérêt
65
Quelles sont les méthodes pour mesurer l'expression des protéines?
- Western Blot - ELISA - Radioimmunoassay - Immunohistochimie - Immunomicroscopie électronique
66
Quelle est la différence entre l'électrophorèse sur gel et le western blot?
1. ADN vs protéines | 2. Type de gel : polyacrylamide (protéines) et Bromure d'ethidium (ADN)
67
Quel est le rôle du SDS-PAGE?
Dénaturation des protéines
68
Les protéines migrent en fonction de deux composantes, lesquelles?
Poids et charge
69
Comment visualise-t-on les protéines sur Western Blot?
Ac primaire et secondaire
70
Quelles sont les avantages d'ELISA par rapport à WB?
1. Pas besoin de dénaturation 2. Quantification plus précise 3. Quantifier des ng (ELISA) vs µg (WB)
71
Quel est le désavantage d'ELISA par rapport à WB?
Ne distingue pas les isoformes -> signal total seulement
72
Quel est le principe de la radioimmunoassay?
Ratio protéines liées : non liées
73
D'où proviennent les échantillons de la radioimmunoassay?
Sang, LCR et liquide extracellulaire
74
L'immunohistochimie permet-elle une mesure quantitative de l'expression des protéines?
Non, visualisation dans l'espace
75
Comment mesurer l'interaction protéine-protéine?
Co-immunoprecipitation
76
Quelle technique est utilisée lorsque les protéines sont connues dans la co-immunoprecipitation?
WB et SDS-PAGE
77
Quelle technique est utilisée lorsque les protéines ne sont pas connues dans la co-immunoprecipitation?
Spectrométrie de masse
78
Quel est le principe de la spectrométrie de masse?
Reconnaît les peptides -> ratio MASSE : CHARGE et comparaison avec base de données
79
Quel est le principe du test de mobilité électrophorétique (EMSA)?
Interaction ADN et protéines -> bandes plus haut sur électrophorèse
80
Est-ce que EMSA est quantitatif?
Non
81
Quels sont les contrôles utilisés dans l'IP chromatine?
1. Input 2. Liaison ADN-protéine connue 3. Ac non-spécifique 4. Amorces non-spécifiques
82
Quel est le désavantage de l'IP chromatine?
Pas savoir si Protéine agit en complexe ou directement avec ADN
83
Sur quel type de matériel de départ se fait l'IP chromatine?
Cellules vivantes
84
Quelles sont les trois méthodes de mesure de l'interaction protéine-ADN?
1. IP chromatine 2. EMSA 3. Essai luciférase
85
Quel est le principe de ChIP-seq?
Séquençage de l'ADN libéré + Comparaison avec banque de données
86
À quoi sert l'essai luciférase?
Activation ou répression expression gène par une protéine
87
Quel caractéristique utilise l'essai luciférase?
Bioluminescence
88
L'essai luciférase est-il quantitatif?
Oui
89
V ou F : On utilise le promoteur de la luciférase
F, promoteur de la région d'intérêt
90
Comment détecter des modif post-trad?
Anticorps reconnaissant protéine normale vs Ac reconnaissant protéine avec modif post-trad

Méthodes expérimentales (5 decks)

Brainscape helps you reach your goals faster, through stronger study habits.
© 2025 Bold Learning Solutions. Terms and Conditions