Módulo 1: Introdução à fluorescência Flashcards
A energia do fotão emitido é sempre mais baixa/alta do que a dos fotões da luz absorvida.
A que fenómeno luminoso está associado?
baixa (maior comprimento de onda)
Fluorescência
O que é o espectro de absorção de uma partícula?
É a gama em que um composto pode ser excitado.
Por outro lado, a gama de comprimentos de onda que um composto emite chama-se “espetro de emissão”
Em que consiste o desvio de Stokes?
Stokes Shift
A luz fluorescente que um corpo emite é de maior comprimento de onda do que a luz excitante.
Um fluorófero com bom desvio de Stokes é menos ou mais fiável?
Mais fiável. Há uma boa separação dos comprimentos de onda excitante e emitida.
O espetro de emissão corresponde à transição do eletrão para niveis mais altos/baixo de energia.
Baixos
Em fluorescência, o espetro de emissão é a imagem … do espetro de absorção.
Espelho
Só quando há excitação S0 -> S1
Dentro das gamas de excitação e emissão, existe um pico (máximo)?
Sim!
Quais são as propriedades das moléculas fluorescentes?
- Grande coeficiente de extinção na região de excitação (quantidade de luz absorvida de um determinado comprimento de onda)
- Alto rendimento quântico
- comprimento de onda de excitação ótimo
- Fotoestabilidade
- Vida em estado excitado
- Perturbação mínima pela sonda
O que é rendimento quântico?
Razão entre o nº de fotões emitidos e o nº de fotões absorvidos
O rendimento quântico depende de alguma coisa?
Sim, do ambiente biológico:
* pH
* oxigenação
* ligação (?)
De que depende a intensidade de fluorescência?
- Absorção
- rendimento quântico
- polaridade do solvente
- pH meio aquoso
- proximidade a espécies quencher
O que é Fluorescence Quenching?
Quando o rendimento quântico de um fluorófero diminui sem alterar o comprimento de onda de emissão –> Diminuição da intensidade
A emissão de corpos autofluorescentes está próxima da gama dos …
Infravermelhos
Podemos distinguir a autofluorescência da fluorescência exógena (marcadores)?
Sim!
Que identidades celulares/moleculares têm autofluorescência?
- Mitocôndrias
- Lisossomas
- a.a. aromáticos
- lipo-pigmentos
- NADH
- coenzimas flavinóides
- matriz extracelular (colagénio e elastina)
A análise da autofluorescência pode ser utilizada para avaliar alterações no estado celular?
Sim!
Estado morfológico e fisiológico de cell e tecidos.
A análise da autofluorescência tem a vantagem de:
diz duas vantagens
- ser avaliada em tempo real
- não necessitar de marcadores exógenos
GFP (green fluorescent protein) é um cromóforo ou um fluoróforo?
Fluoróforo
O que é um cromóforo?
Componentes/partes de moléculas que absorvem luz (dão cor!)
A maioria dos cromóforos são …
Aneis aromáticos
Os cromóforos fluorescentes usados para marcar moléc. biológicas devem ter valores baixos/elevados de rendimento quântico.
Elevados
Que tipos de fluoróforos existem?
- proteínas e péptidos
- compostos orgânicos
- polímeros sintéticos
- sistemas multi componentes
- quantum dots
Os fluoróferos biológicos podem ser divididos em … e …
Dá exemplos.
- endógenos
* a.a. (triptofano, tirosina…)
* enzimas e co-enzimas (NADH)
* Vitaminas (Vit A, K, D)
* Lípidos
* Porfirinas - exógenos
* Propidium iodide
A maioria dos fluoróforos endógenos requer comprimentos de onda de absorção na gama do ….
Que implicação isso tem?
Ultravioleta
baixo comprimento de onda
Perigo para as células vivas
