Mol Med2 Flashcards
(21 cards)
Nennen sie 2 detektionsmethoden in der PCR und nennen sie 2 spezifische ansätze zur detection
Agarose-Gelelektrophorese
→ Nachweis von PCR-Produkten anhand ihrer Größe durch Trennung im Gel und Färbung (z. B. mit Ethidiumbromid oder SYBR Safe).
Real-Time PCR (qPCR)
→ Detektion der PCR-Produkte in Echtzeit durch fluoreszierende Signale während der Amplifikation.
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TaqMan®-Sonden
→ Sequenzspezifische Fluoreszenz-Sonden, die beim Abbau durch die DNA-Polymerase ein Signal erzeugen (hohe Spezifität).
Molecular Beacons
→ Fluoreszierende Haarspangen-Sonden, die nur bei exakter Bindung an die Zielsequenz ein Signal aussenden.
Lebenszyklus von HIV
- Bindung (Attachment) und Eintritt in die WirtszelleHIV bindet über sein gp120-Oberflächenprotein an den CD4-Rezeptor auf bestimmten Immunzellen (v. a. T-Helferzellen).Zusätzlich sind Korezeptoren wie CCR5 oder CXCR4 notwendig.Nach der Bindung verschmilzt die Virushülle mit der Zellmembran → das Virusgenom gelangt in die Zelle.
- Reverse TranskriptionDas virale Enzym Reverse Transkriptase übersetzt die einzelsträngige RNA des Virus in doppelsträngige DNA.Dieser Prozess ist fehleranfällig und führt zu hoher Mutationsrate.
- Integration ins WirtsgenomDas Enzym Integrase schleust die virale DNA in das Genom der Wirtszelle ein.Die Virus-DNA ist jetzt ein Teil der zellulären DNA → man spricht von einem Provirus.
- Transkription und TranslationWenn die Zelle aktiviert wird, beginnt sie damit, die eingebaute Virus-DNA zu transkribieren → Bildung von viraler mRNA.Diese wird anschließend translatiert → Bildung viraler Proteine und Enzyme.
- Zusammenbau (Assembly)Neue virale RNA und Proteine lagern sich zusammen → Bildung unreifer Viruspartikel.
- Knospung (Budding) und ReifungDie neuen Viruspartikel verlassen die Zelle durch Knospung.Dabei nehmen sie ein Stück der Zellmembran als Virushülle mit.Das Enzym Protease spaltet virale Vorläuferproteine → Reifung zu infektiösen Viren.
In europa gibt es bereits die erste Stammzell Gentherapie, Welche Erkrankung wird dabei behandelt und welcher Vektor wurde dabei eingesetzt?
- schwerer kombinierter Immundefizienz aufgrund von Adenosin-Deaminase-Mangel (ADA-SCID)
-Oncoretrovirus
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Generell gentherapie:
-Lipoproteinlipase-Defizienz (LPLD)
-Vektor verwendet Glybera ein adeno-assoziiertes Virus vom Serotyp 1 (AAV1)
Nennen Sie resistenzmechanismen der bakterien gegen Antibiothika
-Enzymatischer Abbau oder Modifikation des Antibiotikums
-Veränderung der Zielstruktur (Target-Modifikation)
-Reduzierte Permeabilität (Aufnahmehemmung)
-Effluxpumpen
Skizzieren sie sh Expressionskette bis zur prozessierung
wie kann man embryonale stammzellen erzeugen?
In-vitro-Fertilisation (IVF):
– Eine Eizelle wird im Labor befruchtet und entwickelt sich zur Blastozyste (ca. 5–6 Tage nach Befruchtung).
Isolierung der inneren Zellmasse (Inner Cell Mass, ICM):
– Aus der Blastozyste wird die innere Zellmasse entnommen, die sich normalerweise zum Embryo entwickeln würde.
Kultivierung der ICM:
– Die Zellen werden auf einer Nährschicht (z. B. Fibroblasten) in einem geeigneten Kulturmedium gezüchtet.
– Diese Zellen sind pluripotent, d. h., sie können sich in alle Zelltypen des Körpers entwickeln (außer in extraembryonale Gewebe wie die Plazenta).
was sind stammzellen?
-Selbsterneuerung
-undifferenzierte Zellen
-können sich in verschiedene spezialisierte Zelltypen verwandeln
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Stammzellen sind undifferenzierte Zellen, die sich selbst erneuern können (Selbsterneuerung)
und sich in verschiedene spezialisierte Zelltypen differenzieren können (z. B. Muskel-, Nerven- oder Blutzellen)
was ist das druggable genom? welche bereiche umfasst es?
Das “druggable genome” umfasst all jene Gene und Proteine, die durch chemische Substanzen oder biologische Moleküle in ihrer Funktion beeinflusst werden können, um Krankheiten zu behandeln.
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Gene, die kodieren für Proteine, die in der Signaltransduktion, Zellwachstum, Stoffwechsel und Immunantwort eine Schlüsselrolle spielen und daher als Therapieziel in Frage kommen.
Proteine, die als Enzyme, Rezeptoren, Transporter oder Transkriptionsfaktoren fungieren, und die durch Medikamente gezielt gehemmt oder aktiviert werden können.
Wie heißt die Methode, mit der die Firma Affimetrix einen DNA Array betreibt?Beschreibe die Methode
Ziel: Auf einem festen Träger (z. B. einem Siliziumchip) werden viele verschiedene DNA-Oligonukleotide (kurze DNA-Stücke) präzise an definierten Positionen synthetisiert. Jeder Punkt auf dem Chip enthält eine bestimmte DNA-Sequenz.
- Protected linker molecules are fixed on a silane matrix on a quartz chip;
- Deprotection of selected positions (mask) by UV light;
- Addition of deoxynucleotide with protection group;
- Repetition of the process.
Wie heißt das wichtigste Gen für ein Membrantransportprotein für die Pharmacogenetik? Wie heißt das davon exprimierte Protein?
Multidrug Resistance 1 Gene = MDR-1 Gene
P-glycoprotein (PGP) = integral membrane protein that belongs to ABC transporter
Was bedeutet Gentherapie? was sind ihre Hauptfelder?
Gene therapy = transfer of genetic material (nucleic acids) for regulation or gene expression with the aim of treatment or cure of diseases.
Germline therapy = intervention in early stage of embryonic development Somatic gene therapy = transfer of therapeutic gene into somatic cells Ex vivo: gene therapy → cells removed from patient → treated with vector → transferred back In vivo: gene therapy → directly treating patient with vector
Skizzieren Blastozysten. Welche Bereiche werden für Generierung ESCs benutzt?
Blastocyst: Inner cell mass is used.
Nicht-virales Delivery von siRNA – Methoden nennen
Antibody
Peptide
Aptamer
Liposome, Nanoparticles
Cationic copolymers
Welcher Rezeptor wird aktiviert durch CpG-Motive?
Toll-like Receptor 9 (TLR9)
Pyrosequencing? Principle
Incorporation of a nucleotide into a nucleotide chain releases a pyrophosphate.
ATP sulfurylase uses the pyrophosphate to convert adenosine-5’-phosphosulfate to ATP.
Luciferase oxidizes luciferin in the presence of ATP and produces light.
Why is Pharmacogenetics in therapeutic usage important?
Pharmacogenetics: how a person’s genetic makeup affects their response to drugs.
The drugs are not effective for everyone, and that’s why it may only be prescribed after previous molecular diagnosis.
Was ist der wissenschaftliche Name von Schmerzmitteln? Welche 2 Formen gibt es?
Analgetics: Anti-inflammatory (non-opioid) & opioid
Nenne 4 Virostatika von HIV. Was ist HAART?
HAART: Highly active antiretroviral therapy
Azidothymidin
Abacavir
Ritonavir
Tipranavir (also called CTP)
Was sind Riboswitches?
Riboswitches are noncoding segments within mRNA that can regulate gene expression.
Welche Generationen der Stabilisierungen von Antisense-Molekülen gab es? Gib je eine Form an & ihre Vor- und Nachteile
1st Gen: Phosphorothioates
-Vorteil: Stability and activation of RNase H
-Nachteil: Binding to proteins, toxic side effects (particularly in the CNS), low affinity towards complementary RNA
2nd Gen: 2’-O-methyl RNA (OME)
-Vorteil: Reduced toxicity, high target affinity
-Nachteil: No activation of RNase H
3rd Gen: Locked nucleic acids (LNA)
-Vorteil: High target affinity, high nuclear stability, very high potency
-Nachteil: high cost
