PCR

Question 1

Materiales para PCR cualitativa:

Answer 1

• Molde de ADN
• Enzima
• Oligonucleótidos (primers)
• Desoxirribonucleotidos
• Mg
• Buffer y agua
• Termocicladores

Question 2

Función de termocicladores:

Answer 2

Establecen sistema homogéneo (temp y tiempo)
Excitan sistema de fluorescencia

Question 3

Características de primers:

Answer 3

• 15-20 pb
• Delimitan
• Foward and reward

Question 4

Enzima más utilizada:

Answer 4

Taq ADN polimerasa

Proviene de Bacteria que soporta altas temperaturas

Question 5

Pasos de PCR cualitativa:

Answer 5

1. Desnaturalización: 95C por 30-35 seg
2. Hibridación: 50-60C, primers en 3’
3. Extensión: Taq polimerasa, 72C. 5’ a 3’

Si es alto en C-G se deja más tiempo en desanaturalización

Question 6

Resultados de la PCR se llaman:

Answer 6

Amplicones

Question 7

En la PCR cualitativa qué se hace con los amplicones?

Answer 7

Electroforesis

Gel de agarosa y sobre buffer

Question 8

Tipo de carga que agrega el grupo fosfato

Answer 8

Negativa

Question 9

Tipos de ADN

Answer 9

Genómico = PCR punto final

Complementario = RT-PCR
A partir de RNAm

Cualitativa

Question 10

Tipos de cuantificación en PCR cuantitativa

Answer 10

Absoluta= indica carga viral
Relativa = indica cambios de expresión de genes

Question 11

q-PCR

¿Qué detecta la PCR cuantitativa?

Cuantitativa y tiempo real es lo mismo

Answer 11

Cambios en expresión génica mediante detección de ARNm

Question 12

Características de q-PCR:

Answer 12

• Alta sensibilidad, especificidad y eficiencia
• Agua libre de nucleasas
• Amplicones de 100-150 pb