PCR Flashcards
qué se requiere para hacer una PCR
- Secuencia de DNA
- Enzima DNA polimerasa
- Desoxiribonucleotidos (dNTP)
- Primers
- Cofactores
Polimerasa que se utiliza en la PCR y por qué
- Thermus aquaticus (Taq)
- soporta los 95 grados a los que estar el termociclador
dónde se encuentra la Taq
en una bacteria situada en geisers
dNTP requeridos en la PCR
- dATP
- dCTP
- dGTP
- dTTP
que función realiza un amortiguador en la PCR
Favorece un pH adecuado
* 8.4
Cofactor utilizado en una PCR
- Cloruro de Magnesio ya que el magnesio es cofactor de la Taq polimerasa
function de los iniciadores en una PCR
Reconocer secuencias blanco en el DNA molde
características de los iniciadores
- Proporcionan un extremo 3’
- Alto contenido en GC
por que los iniciadores tienen alto contenido de GC
No se desprende fácil de la cadena debido a que tiene 3 puentes de hidrógeno
tipos de iniciadores
- Forward 5’ a 3’
- Reverse 3’ a 5’
etapas del procedimiento
- Desnaturalización
- Hibridación
- Extensión
características de la etapa de desnaturalización
Se separan las cadenas DNA
* 95ºC (20 a 30 seg)
características de la etapa de hibridación
Los primers se alinean al extremo 3 ́
* 50ºC a 60ºC
de qué depende la temperatura de hibridación
del primer que se utilizará
características de la etapa de extensión
La Taq polimerasa agrega dNTP ́s complementarios para crear cadenas completas
* 72ºC
